本发明涉及疫苗生产
技术领域：
，具体涉及一种产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺。
背景技术：
：为达到配苗要求，c型产气荚膜梭菌毒素抗原需达到3400mld/ml，因此需进行浓缩处理。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺。为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺，包括如下步骤：将产气荚膜梭菌培养获得的上清液使用超滤系统进行浓缩，浓缩时进口压力0.1～0.15mpa、回流压力0～0.05mpa，浓缩倍数分别为5～10倍。值得注意的是，浓缩前，需先测定产气荚膜梭菌培养的毒素的含量，当毒素的含量≥400mld/ml时，方可进行浓缩。进一步地，在保证配苗要求的前提下，可适当降低毒素的浓缩倍数，提高浓缩回收率，浓缩倍数优选为5倍。本发明具有以下有益效果：通过对产气荚膜梭菌毒素抗原的浓缩处理，使得所得的抗原可以达到疫苗生产的需要，同时可以降低疫苗的免疫剂量，便于临床应用，并减少注射母猪的应激反应。具体实施方式下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。试验例1材料1.1菌种c型产气荚膜梭菌c59-2f10代基础种子，由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所鉴定、保管和供应。1.2主要培养基及原材料大豆蛋白胨购自北京双旋微生物培养基制品厂，货号02-19；水解酪蛋白购自sigma，货号n4517-1kg；酵母浸膏购自北京双旋微生物培养基制品厂，货号02-22；葡萄糖购自国药集团化学试剂有限公司，货号10010518；氨水购自武汉市洪山中南化工试剂有限公司，货号2672。梭菌液体培养基准确称取大豆蛋白胨15g、水解酪蛋白15g、酵母浸膏5g、葡萄糖5g，溶于950ml纯化水，用2mol/lnaoh调ph值至8.0～8.5，加纯化水定容至1000ml，116℃高压灭菌30分钟，冷却后备用。1.3试验动物16～20g昆明小鼠，购自武汉生物制品研究所。2方法2.1菌液的培养按“产气荚膜梭菌培养工艺的研究”最优生产工艺进行100l细菌发酵罐菌液的培养，共培养4次。具体的：产气荚膜梭菌c59-2在35～37℃培养条件，1％～5％接种，培养过程中根据培养菌液ph值的变化，补加氨水，使培养液的ph值维持在7.0～7.4，培养6～10小时收获。2.2毒素含量的测定菌液培养完成后，取样，离心取上清，测定毒素的含量(mld/ml)。2.3毒素浓缩试验当毒素的含量≥400mld/ml时，方可进行浓缩。为了计算毒素浓缩的回收率，在浓缩前未进行灭活和脱毒处理。培养菌液经管式离心机离心，收集上清液，用于浓缩试验。2.3.110l毒素液的浓缩试验将第1次培养获得的上清液分为4份，每份10l，使用超滤系统进行浓缩，浓缩时进口压力0.1～0.15mpa、回流压力0～0.05mpa，使4份毒素液的浓缩倍数分别为5倍、8倍、10倍、15倍。测定不同浓缩倍数的毒素液含量，并计算浓缩回收率。2.3.210l毒素液浓缩重复性试验将第1次培养获得的上清液分为3份，每份10l，分别进行3次浓缩试验。浓缩倍数5～10倍，浓缩时进口压力0.1～0.15mpa、回流压力0～0.05mpa，根据浓缩前后体积、浓缩前后毒素含量，测定浓缩回收率。2.3.370l毒素液浓缩重复性试验第2～4次培养获得的毒素上清，体积均约70l，进行浓缩试验，浓缩倍数5～10倍，浓缩时进口压力0.1～0.15mpa、回流压力0～0.05mpa，根据浓缩前后体积、浓缩前后毒素含量，测定浓缩回收率。3结果3.1毒素含量的测定结果用100l发酵罐培养产气荚膜梭菌c59-2，4次培养的毒素含量分别为800mld/ml、1000mld/ml、1250mld/ml、800mld/ml(表1)。表1c型产气荚膜梭菌毒素含量的测定结果上罐次数毒素含量(mld/ml)1800210003125048003.210l毒素液的浓缩试验结果浓缩前产气荚膜毒素含量为800mld/ml，通过超滤浓缩5倍、8倍、10倍和15倍后，其毒素含量分别为3600mld/ml、5600mld/ml、6800mld/ml、8400mld/ml，均达到了配苗要求(毒素含量应≥3400mld/ml)，回收率依次92％、87.5％、85％、70.5％，结果见表2。结果表明，随着浓缩倍数的增加，毒素回收率有所下降，因此，在保证配苗要求的前提下，可适当降低毒素的浓缩倍数，提高浓缩回收率。表2c型产气荚膜梭菌毒素浓缩效果浓缩后体积(l)浓缩倍数毒素含量(mld/ml)回收率(％)10浓缩前800/25倍浓缩3600921.258倍浓缩560087.5110倍浓缩6800850.6715倍浓缩840070.53.310l毒素液浓缩重复性试验结果浓缩前毒素含量为800mld/ml，将该毒素进行了3次浓缩性试验，结果表明，浓缩后回收率均在85％以上(表3)。表310l毒素液浓缩重复性试验结果3.470l毒素液浓缩重复性试验结果3批70l毒素液经浓缩后，毒素含量分别为5400mld/ml、5800mld/ml、4600mld/ml，回收率分别为89.2％、91.5％、87.1％，结果见表4。表470l毒素液浓缩重复性试验结果4结论本试验例用超滤浓缩对毒素进行了浓缩工艺的研究。结果表明，毒素浓缩5～10倍后，其回收率均不低于85％。随着浓缩倍数的增加，毒素回收率有所下降，因此，在保证配苗要求的前提下，可适当降低毒素的浓缩倍数，提高浓缩回收率。试验确定灭活毒素的浓缩倍数为5～10倍，毒素抗原的浓缩回收率按85％计算。以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变化或修改，这并不影响本发明的实质内容。在不冲突的情况下，本申请的实施例和实施例中的特征可以任意相互组合。当前第1页1 2 3
技术特征：1.产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺，其特征在于：包括如下步骤：
将产气荚膜梭菌培养获得的上清液使用超滤系统进行浓缩，浓缩时进口压力0.1～0.15mpa、回流压力0～0.05mpa，浓缩倍数分别为5～10倍。
2.如权利要求1所述的产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺，其特征在于：浓缩前，需先测定产气荚膜梭菌培养的毒素的含量，当毒素的含量≥400mld/ml时，方可进行浓缩。
3.如权利要求1所述的产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺，其特征在于：浓缩倍数为5倍。
技术总结本发明涉及疫苗生产技术领域，具体涉及一种产气荚膜梭菌毒素抗原浓缩工艺，包括如下步骤：将产气荚膜梭菌培养获得的上清液使用超滤系统进行浓缩，浓缩时进口压力0.1～0.15MPa、回流压力0～0.05MPa，浓缩倍数分别为5～10倍。值得注意的是，浓缩前，需先测定产气荚膜梭菌培养的毒素的含量，当毒素的含量≥400MLD/ml时，方可进行浓缩。本发明通过对产气荚膜梭菌毒素抗原的浓缩处理，使得所得的抗原可以达到疫苗生产的需要，同时可以降低疫苗的免疫剂量，便于临床应用，并减少注射母猪的应激反应。
技术研发人员：刘泽文;田永祥;袁芳艳;刘威;高婷;周丹娜;杨克礼;郭锐;梁婉;陈文杰
受保护的技术使用者：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
技术研发日：2020.12.02
技术公布日：2021.03.12
