本发明属于医药技术领域，多糖的结构改造领域，具体涉及一种中亚白及多糖衍生物的制备方法和用途。
背景技术：
中亚白及(tubersalep)，又名欧白及，为兰科植物orchischusuad.don的干燥块茎。功能与主治:生湿生热，壮阳生精，养心生血等；几千年来，它作为了一种药物来治疗各种疾病，包括麻痹、胃疾病、霍乱、黄疸、胸痛、关节炎、炎症、梅毒、酸度、肝炎、遗精、肿瘤、月经失调、湿疹、哮喘、腹泻、催情药、血痢疾、消化不良、骨折、耳痛、风湿、疟疾、壮阳药、溃疡、伤口等。除此之外，它还可以作为增稠剂和稳定剂添加到饮料和冰淇淋中。中亚白及多糖主要由葡甘聚糖组成，研究表明魔芋葡甘聚糖具有抗糖尿病，抗肥胖，益生元，抗炎，调节免疫等功能；因此研究中亚白及多糖，挖掘其药用潜力十分有必要。
植物多糖具有抗氧化，抗炎，抗凝血，免疫调节及促益生菌增长等多种功能，它以其广泛的治疗作用和极低的细胞毒性，在医药、食品、化妆品和环境治理等领域具有广阔的应用前景。多糖的活性与多糖的结构有很大的关系，通过结构修饰之后的多糖在某些方面的活性会显著提高。如：硫酸化改性可显著改善多糖的结构特征,促进多糖的生物活性，甚至可使多糖具有新的生物活性。硫酸多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗癌、免疫调节、抗凝血等.因此，多糖的结构修饰也逐渐成为了研究的热点。
益生元是一种可被选择性发酵，而专一改善肠道中有益于宿主健康和幸福感的菌群组成和活性的食物配料。近年来，研究表明诸多多糖及低聚糖可作为益生元。益生元具有很多生理活性，如非消化性，改善肠道菌群，促进肠道益生菌生长，降低肠道ph，调节机体代谢和免疫系统，减轻便秘等。研究表明，肠道微生物结构的改变会影响消化率和代谢产物的种类，从而使机体发生变化。因此，通过干扰肠道内微生物菌群可以实现调节机体健康的目的。益生元具有稳定性好、热量低、服用量小、配伍性好等优点，其通过促进有益菌的繁殖来抑制有害细菌的生长，从而达到调整肠道菌群，保持机体健康的目的。
技术实现要素：
本发明的目的在于，提供一种中亚白及多糖衍生物的制备方法和用途，该方法经淀粉酶辅助提取中亚白及多糖后，对中亚白及多糖经硫酸化，乙酰化，羧甲基化及磷酸化的修饰，分别得到硫酸化中亚白及多糖衍生物，乙酰化中亚白及多糖衍生物，羧甲基化中亚白及多糖衍生物及磷酸化中亚白及多糖衍生物；取代度ds分别为：0.12，0.56，0.13，0.32，经验证表明：
这些衍生物具较显著的抗氧化及益生元活性，适作为一种新型的抗氧化剂及潜在的益生元的药物或保健食品中的用途。
本发明所述的一种中亚白及多糖衍生物的制备方法，所述中亚白及多糖衍生物为硫酸化中亚白及多糖衍生物、乙酰化中亚白及多糖衍生物、羧甲基化中亚白及多糖衍生物和磷酸化中亚白及多糖衍生物，具体操作按下列步骤进行：
a、将干燥的中亚白及用万能打粉机打粉，过40目筛，取粉末加浓度80％乙醇，磁力搅拌，加热器回流提取，冷却至室温，过滤，将残渣通风干燥，置于温度-4℃备用，得到提取物；
b、将步骤a得到的提取物1g，加100ml水和0.5ml耐高温淀粉酶，磁力搅拌，加热器回流提取2小时，500转/分钟，温度100℃，离心7800转/分钟，将上清液在温度55℃条件下进行减压浓缩至1/4-1/5，得到浓缩液；
c、将步骤b得到的浓缩液用4倍体积无水乙醇进行沉淀，在温度4℃下放置12h，收集沉淀后，溶解于水中，3500da透析袋透析3天，冷冻干燥，备用；
d、将步骤c所得样品200mg溶于10mln,n-二甲基甲酰胺，然后加入三氧化硫吡啶络合物100mg，在磁力搅拌下温度80℃反应3小时，反应后冷却至室温，用4m氢氧化钠调节ph至中性，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后，冷冻干燥得硫酸化中亚白及多糖衍生物；
或将步骤c所得样品200mg溶解于10ml蒸馏水中，用10m氢氧化钠调节ph至9.0，并置于室温10min，加入2ml乙酸酐，并用氢氧化钠保持ph在8.0-8.5，反应30min后，加入10m盐酸调节ph至7终止反应，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后，冷冻干燥得乙酰化中亚白及多糖衍生物；
或将步骤c所得样品200mg溶解于15.6ml18％氢氧化钠中，缓慢加乙醇至出现白色沉淀，继续搅拌1h，继续加入乙醇至出现白色沉淀，向反应液中加入3.0ml一氯乙酸，搅拌，再次加入乙醇至浑浊，并用磁力搅拌加热器在温度70℃反应2小时，继续加乙醇至出现沉淀，再置于在70℃反应2小时，反应结束后，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后冷冻干燥得羧甲基化中亚白及多糖衍生物；
或将3.4g多聚磷酸钠和0.56g三偏磷酸钠溶于30ml蒸馏水中，加入150mg硫酸钠和步骤c所得样品200mg，并用氢氧化钠调节ph至9.0，用磁力搅拌，温度90℃加热反应4小时，反应结束后，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后，冷冻干燥得磷酸化中亚白及多糖衍生物。
所述方法获得的中亚白及多糖衍生物在制备抗氧化剂中的用途。
所述方法获得的中亚白及多糖衍生物在制备益生元的药物中的用途。
所述方法获得的中亚白及多糖衍生物在制备益生元的保健食品中的用途。
本发明所述的一种中亚白及多糖衍生物的制备方法和用途，其有益效果为：
本发明通过淀粉酶辅助提取了中亚白及多糖，使中亚白及中淀粉有效去除。
本发明通过不同手段对中亚白及多糖进行了衍生化修饰，所得硫酸化中亚白及多糖衍生物，乙酰化中亚白及多糖衍生物，羧甲基化中亚白及多糖衍生物及磷酸化中亚白及多糖衍生物的取代度ds分别为：0.12，0.56，0.13，0.32，具有显著的抗氧化，促益生菌生长活性。为中亚白及多糖衍生物开发作为氧化剂和益生元提供了理论依据。
验证了中亚白及多糖不同结构修饰衍生物对其抗氧化及作为益生元活性的影响效果不同，为后期定向修饰多糖及构效关系研究提供了参考。
附图说明
图1为本发明中亚白及衍生化多糖紫外谱图；
图2为本发明中亚白及衍生化多糖红外谱图；
图3为本发明中亚白及衍生化多糖xrd谱图；
图4为本发明中亚白及衍生化多糖刚果红实验结果；
图5-图7为本发明中亚白及衍生化多糖抗氧化实验结果；
图8-图9为本发明中亚白及衍生化多糖促益生菌增长活性实验结果。
具体实施方式
实施例1
制备硫酸化中亚白及多糖衍生物：
a、将干燥的中亚白及用万能打粉机打粉，过40目筛，取粉末加浓度80％乙醇，磁力搅拌，加热器回流提取，冷却至室温，过滤，将残渣通风干燥，置于温度-4℃备用，得到提取物；
b、将步骤a得到的提取物1g，加100ml水和0.5ml耐高温淀粉酶，磁力搅拌，加热器回流提取2小时，500转/分钟，温度100℃，离心7800转/分钟，将上清液在温度55℃条件下进行减压浓缩至1/4-1/5，得到浓缩液；
c、将步骤b得到的浓缩液用4倍体积无水乙醇进行沉淀，在温度4℃下放置12h，收集沉淀后，溶解于水中，3500da透析袋透析3天，冷冻干燥，备用；
d、将步骤c所得样品200mg溶于10mln,n-二甲基甲酰胺，然后加入三氧化硫吡啶络合物100mg，在磁力搅拌下温度80℃反应3小时，反应后冷却至室温，用4m氢氧化钠调节ph至中性，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后，冷冻干燥得硫酸化中亚白及多糖衍生物；
将硫酸化中亚白及多糖所得样品干燥后的样品用溅射镀上金层，利用能量色散x射线能谱(edx，supra55vp，zeiss，德国)对硫酸化多糖衍生物进行了元素分析：高压：21.5kv；脉冲：1.07kcps，重复3次，根据公式：
ds＝1.62×s％/32-1.02×s％求得取代度ds为0.118。
实施例2
制备乙酰化中亚白及多糖衍生物：
a、将干燥的中亚白及用万能打粉机打粉，过40目筛，取粉末加浓度80％乙醇，磁力搅拌，加热器回流提取，冷却至室温，过滤，将残渣通风干燥，置于温度-4℃备用，得到提取物；
b、将步骤a得到的提取物1g，加100ml水和0.5ml耐高温淀粉酶，磁力搅拌，加热器回流提取2小时，500转/分钟，温度100℃，离心7800转/分钟，将上清液在温度55℃条件下进行减压浓缩至1/4-1/5，得到浓缩液；
c、将步骤b得到的浓缩液用4倍体积无水乙醇进行沉淀，在温度4℃下放置12h，收集沉淀后，溶解于水中，3500da透析袋透析3天，冷冻干燥，备用；
d、将步骤c所得样品200mg溶解于10ml蒸馏水中，用10m氢氧化钠调节ph至9.0，并置于室温10min，加入2ml乙酸酐，并用氢氧化钠保持ph在8.0-8.5，反应30min后，加入10m盐酸调节ph至7终止反应，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后，冷冻干燥得乙酰化中亚白及多糖衍生物；
将乙酰化中亚白及多糖所得样品20mg样品溶解于10ml0.01mol/lnaoh中，于温度50℃加热搅拌2小时，反应结束后，剧烈震荡使其充分皂化，用酚酞为指示剂，用0.01mol/l盐酸滴定，共消耗2.0ml盐酸，根据公式；
ds＝132a/4300-42a求得取代度为0.56。
实施例3
制备羧甲基化中亚白及多糖衍生物
a、将干燥的中亚白及用万能打粉机打粉，过40目筛，取粉末加浓度80％乙醇，磁力搅拌，加热器回流提取，冷却至室温，过滤，将残渣通风干燥，置于温度-4℃备用，得到提取物；
b、将步骤a得到的提取物1g，加100ml水和0.5ml耐高温淀粉酶，磁力搅拌，加热器回流提取2小时，500转/分钟，温度100℃，离心7800转/分钟，将上清液在温度55℃条件下进行减压浓缩至1/4-1/5，得到浓缩液；
c、将步骤b得到的浓缩液用4倍体积无水乙醇进行沉淀，在温度4℃下放置12h，收集沉淀后，溶解于水中，3500da透析袋透析3天，冷冻干燥，备用；
d、将步骤c所得样品200mg溶解于15.6ml18％氢氧化钠中，缓慢加乙醇至出现白色沉淀，继续搅拌1h，继续加入乙醇至出现白色沉淀，向反应液中加入3.0ml一氯乙酸，搅拌，再次加入乙醇至浑浊。并用磁力搅拌加热器在温度70℃反应2小时，继续加乙醇至出现沉淀，再置于在温度70℃反应2小时，反应结束后，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后冷冻干燥得羧甲基化中亚白及多糖衍生物；
将羧甲基化中亚白及多糖所得样品11mg于温度100℃干燥1小时，冷却至室温，加入3ml浓度70％甲醇，搅拌5分钟，加入50ml0.5m氢氧化钠，搅拌3小时，并用0.4m盐酸滴定，消耗盐酸41ml，根据公式：
ds＝0.162a/1-0.058a求得取代度得0.132。
实施例4
制备磷酸化中亚白及多糖衍生物：
a、将干燥的中亚白及用万能打粉机打粉，过40目筛，取粉末加浓度80％乙醇，磁力搅拌，加热器回流提取，冷却至室温，过滤，将残渣通风干燥，置于温度-4℃备用，得到提取物；
b、将步骤a得到的提取物1g，加100ml水和0.5ml耐高温淀粉酶，磁力搅拌，加热器回流提取2小时，500转/分钟，温度100℃，离心7800转/分钟，将上清液在温度55℃条件下进行减压浓缩至1/4-1/5，得到浓缩液；
c、将步骤b得到的浓缩液用4倍体积无水乙醇进行沉淀，在温度4℃下放置12h，收集沉淀后，溶解于水中，3500da透析袋透析3天，冷冻干燥，备用；
d、将3.4g多聚磷酸钠和0.56g三偏磷酸钠溶于30ml蒸馏水中，加入150mg硫酸钠和步骤c所得样品200mg，并用氢氧化钠调节ph至9.0，用磁力搅拌，温度90℃加热反应4小时，反应结束后，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后，冷冻干燥得磷酸化中亚白及多糖衍生物；
将磷酸化中亚白及多糖所得样品干燥后的样品用溅射镀上金层，利用能量色散x射线能谱(edx，supra55vp,zeiss,德国)对磷酸化多糖衍生物进行了元素分析：高压：21.5kv，脉冲：1.07kcps，重复3次，根据公式：
ds＝1.62×s％/32-1.02×s％求得取代度ds为0.32。
实施例5
单糖分析：
单糖标准曲线的绘制：取葡萄糖，甘露糖各20mg，盐酸羟胺32mg至气相顶口瓶，加2ml吡啶溶解，至于烤箱中温度90℃反应0.5小时；反应后，取出迅速冷水降温，加2ml乙酸酐，再至于烤箱中温度90℃反应0.5小时，取出，氮气吹干，加2ml氯仿溶解，过滤头0.45ul，再用氯仿配成浓度分别为5mg/ml，2.5mg/ml，1.25mg/ml，0.625mg/ml，0.3125mg/ml单糖标准溶液，供气相分析；用峰面积为x轴，单糖浓度为y轴建立标准曲线；
结果：y＝2e-05x-0.636r2＝0.9915(甘露糖)；
y＝2e-05x 0.191r2＝0.9904(葡萄糖)
采用气相色谱仪(shemadzugc-2014c)以标准单糖测定实施例1-4所得衍生物样品单糖组成；取干燥后多糖衍生物样品10mg至于气相顶口瓶中，加8ml三氟乙酸2mol/l于烤箱中温度110℃水解4小时，反应后，冷却至室温，加入2ml甲醇，用旋转蒸发仪移除溶剂，重复三次，再加入盐酸羟胺16mg，吡啶1ml溶解，至于烤箱中温度90℃反应0.5小时；反应后，取出迅速冷水降温，加1ml乙酸酐，再至于烤箱中温度90℃反应0.5小时，取出，氮气吹干，加2ml氯仿溶解，终浓度为5mg/ml，过滤头0.45ul，供气相分析，将结果带入图1标准曲线；
单糖组成分析结果表明，中亚白及多糖及其衍生物主要由葡萄糖和甘露糖组成，但比例不同，如表1；
表1，中亚白及多糖衍生物单糖组成
在样品中，乙酰化衍生物的葡萄糖的比例最高77.0％，硫酸化衍生物的甘露糖比例最高36.8％，与原多糖相比，硫酸化多糖和羧甲基化多糖的葡萄糖和甘露糖比值(glu/man)低于原多糖，乙酰化多糖和磷酸化多糖高于原多糖，说明硫酸化和羧甲基化反应可能导致葡萄糖降解，在乙酰化和磷酸化过程中导致甘露糖降解。
实施例6
分子量测定：
采用高效液相色谱法(agilenttechnologies，usa)分析实施例1中中亚白及多糖衍生物的分子量(mw)，色谱柱：tsk-凝胶柱g3000pwxl(tosho，japan，300mm×7.8mm,i.d.)；色谱条件：柱温：25℃；进样量：10μl；流动相：0.02m磷酸二氢钠；流速0.6ml/min；通过标准分子量5、25、50、80、150和410kda与保留体积的回归方程得到多糖的相对分子质量；得回归方程为：y＝0.0043x2-0.148x 1.6047，r2＝0.9738；实验结果见表2：
表2，中亚白及多糖衍生物相对分子量分布
显示：于原多糖相对分子量3.69×105da相比，除了羧甲基化多糖衍生物分子量降低外约0.68×105da，其他衍生物相对分子量变化不明显，表明对中亚白及羧甲基化修饰过程中中亚白及多糖被一定程度降解。
实施例7
紫外和红外分析：
将实施例1-4得到的硫酸化中亚白及多糖衍生物，乙酰化中亚白及多糖衍生物，羧甲基化中亚白及多糖衍生物及磷酸化中亚白及多糖衍生物样品经红外光谱图分析结果显示图1和图2；紫外谱图显示：原多糖及衍生物在280nm处无吸收，表明样品中无蛋白及核酸；硫酸化样品在263nm处有较强烈的吸收峰，归因于硫酸基的n→π跳跃，再次表明多糖硫酸化修饰的成功；
红外图谱图2显示，原多糖及衍生物均在3400cm-1附近处有较强，较宽的吸收峰，这是由糖链上o-h伸缩振动引起的；在大约2920cm-1附近处的吸收峰是由c-h弯曲振动引起的；约1790cm-1的吸收峰是由于c＝o的伸缩振动引起的，表明糖醛酸的存在；在1640cm-1附近处有吸收表明有糖类化合物水合震动峰；这些数据均属于多糖类化合物的特征；除此之外，每一个衍生物都具有各自的特征吸收峰，硫酸化多糖在1262cm-1处的吸收峰是由硫酸化衍生物的s＝o对称收缩振动产生，在578cm-1处吸收峰是由s-o-s的伸缩振动产生；乙酰化多糖在1799cm-1处有很强羰基的吸收峰；羧甲基化多糖在1617cm-1和1438cm-1处出现较强烈的新峰，归因于coo-的对称和不对称收缩；磷酸化多糖在1153cm-1和897cm-1出现两个新峰，属于p＝o和p-p-c的伸缩振动；这些特征均再次表明中亚白及多糖硫酸化，乙酰化，羧甲基化及磷酸化结构修饰的成功。
实施例8
x射线衍射：
将实施例1-4得到的硫酸化中亚白及多糖衍生物，乙酰化中亚白及多糖衍生物，羧甲基化中亚白及多糖衍生物及磷酸化中亚白及多糖衍生物样品采用x-射线衍射技术考察分子结晶特征见图3，结果显示：所有多糖样品均在大约22°(2θ)处出现尖而强的衍射峰表明样品存在晶体结构；除此之外，我们也观察到了非晶体结构；因此，可以得出结论：原多糖及衍生物样品主要以晶体，非晶体，以及晶体与非晶体共存的多晶体体系存在，且硫酸化，乙酰化，羧甲基化及磷酸化结构修饰对晶体结构几乎无影响。
实施例9
刚果红：
将实施例1-4所得硫酸化中亚白及多糖衍生物，乙酰化中亚白及多糖衍生物，羧甲基化中亚白及多糖衍生物及磷酸化中亚白及多糖衍生物配制质量浓度为2mg/ml的水溶液，再配置0.2mmol/l的刚果红试剂，分别量取6份1ml的多糖衍生物水溶液于离心管中，分别加入1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0.1ml的氢氧化钠溶液，加水至2ml，摇匀，添加配置的1ml刚果红试剂，用紫外分光光度计在400-700nm波长范围内进行扫描，记录最大吸收波长λmax，以水代替氢氧化钠溶液作为空白组，以刚果红试剂与氢氧化钠溶液为对照组，结果见图4，结果显示：于空白对照相比，原多糖，磷酸化，硫酸化以及乙酰化多糖的最大吸收波长随着氢氧化钠的浓度增加而发生红移，说明这4种多糖与刚果红形成了络合物，当氢氧化钠浓度达到0.5时，发生蓝移，表明高浓度的naoh导致多糖构象发生去折叠，由三螺旋变为单链；其中只有羧甲基化多糖一直呈减小趋势，说明其三股螺旋结构受到了破坏。
实施例10
抗氧化活性实验：
dpph自由基清除实验：将100ul各浓度的多糖0.25-5.0mg/ml和100μl新配置的dpph0.2mol/l，加到96孔板上，然后立即混合，温度37℃避光反应30min，在517nm下测吸光度值，每个实验重复三次；
abts自由基清除实验：将50ul,0.25-5.0mg/ml多糖和150μlabts自由基吸光度在0.7±0.02混合，在室温反应10分钟后，在730nm出测定吸光度，每个实验重复3次；
羟基自由基清除实验：将不同浓度0.2-2.0mg/ml的样品70ul与60ul水杨酸-乙醇6mm，以及5ulh2o20.1％混合，在室温下反应30min，在510nm下测量吸光度，每个实验重复三次；
实验结果：如图4-6所示，所有硫酸化中亚白及多糖衍生物，乙酰化中亚白及多糖衍生物，羧甲基化中亚白及多糖衍生物及磷酸化中亚白及多糖衍生物dpph，oh,abts自由基清除率均呈现浓度依赖性；从图4中可知，当浓度达到4mg/ml时，除了磷酸化多糖外，硫酸化，乙酰化，羧甲基化多糖的dpph自由基清除活性均高于修饰前原多糖，其中羧甲基化多糖最高，高于原多糖11.5个百分点；从图5可知，在羟基自由基清除实验中，所有修饰多糖活性均高于修饰前原多糖，且当浓度达为2mg/ml时，磷酸化多糖的清楚oh自由基能力高于原多糖63.5个百分点；从图6可知，结构衍生化修饰对提高多糖清楚abts自由基清楚能力不明显，甚至会导致减弱；综合可知，不同的结构修饰对不同自由基清楚能力影响不同，其中羧甲基化对增强dpph,abts自由基，磷酸化对oh自由基清楚效果最好。
实施例11
益生元活性实验：
对两种益生菌体外生长的影响试验：将德氏乳杆菌保加利亚亚种、青春双歧杆菌分别接种至mars、tpy培养基中，分别添加5mg/ml的样品于基础培养基中，培养16-18h后，用细胞计数仪检测细菌数，每个样品重复3次，如图7所示，与阴性对照相比，原多糖几乎不能促进德氏乳杆菌保加利亚亚种增长，但是所有衍生化多糖均具有促德氏乳杆菌保加利亚亚种增长作用，其中磷酸化多糖促增长作用最强，如图8图9所示，对于青春双歧杆菌，只有乙酰化修饰多糖具有促增长作用，且作用较明显；对于益生菌，中亚白及多糖结构衍生化后均呈现出了不同的促增长作用，可作为益生元用于日后保健品，医药等领域。
综上，本发明涉及的中亚白及多糖衍生物分别是硫酸化中亚白及多糖衍生物，乙酰化中亚白及多糖衍生物，羧甲基化中亚白及多糖衍生物及磷酸化中亚白及多糖衍生物；分子量分别为3.18×105，3.31×105，0.68×105，3.55×105，主要以葡萄糖和甘露糖以不同比例组成，且这些衍生物具较显著的抗氧化及益生元活性。有望作为新型的抗氧化剂，益生元等用于食品，保健，医药等领域。
1.一种中亚白及多糖衍生物的制备方法，其特征在于所述中亚白及多糖衍生物为硫酸化中亚白及多糖衍生物、乙酰化中亚白及多糖衍生物、羧甲基化中亚白及多糖衍生物和磷酸化中亚白及多糖衍生物，具体操作按下列步骤进行：
a、将干燥的中亚白及用万能打粉机打粉，过40目筛，取粉末加浓度80%乙醇，磁力搅拌，加热器回流提取，冷却至室温，过滤，将残渣通风干燥，置于温度-4℃备用，得到提取物；
b、将步骤a得到的提取物1g，加100ml水和0.5ml耐高温淀粉酶，磁力搅拌，加热器回流提取2小时，500转/分钟，温度100℃，离心7800转/分钟，将上清液在温度55℃条件下进行减压浓缩至1/4-1/5，得到浓缩液；
c、将步骤b得到的浓缩液用4倍体积无水乙醇进行沉淀，在温度4℃下放置12h，收集沉淀后，溶解于水中，3500da透析袋透析3天，冷冻干燥，备用；
d、将步骤c所得样品200mg溶于10mln,n-二甲基甲酰胺，然后加入三氧化硫吡啶络合物100mg，在磁力搅拌下温度80℃反应3小时，反应后冷却至室温，用4m氢氧化钠调节ph至中性，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后，冷冻干燥得硫酸化中亚白及多糖衍生物；
或将步骤c所得样品200mg溶解于10ml蒸馏水中，用10m氢氧化钠调节ph至9.0，并置于室温10min，加入2ml乙酸酐，并用氢氧化钠保持ph在8.0-8.5，反应30min后，加入10m盐酸调节ph至7终止反应，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后，冷冻干燥得乙酰化中亚白及多糖衍生物；
或将步骤c所得样品200mg溶解于15.6ml18%氢氧化钠中，缓慢加乙醇至出现白色沉淀，继续搅拌1h，继续加入乙醇至出现白色沉淀，向反应液中加入3.0ml一氯乙酸，搅拌，再次加入乙醇至浑浊，并用磁力搅拌加热器在温度70℃反应2小时，继续加乙醇至出现沉淀，再置于在70℃反应2小时，反应结束后，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后冷冻干燥得羧甲基化中亚白及多糖衍生物；
或将3.4g多聚磷酸钠和0.56g三偏磷酸钠溶于30ml蒸馏水中，加入150mg硫酸钠和步骤c所得样品200mg，并用氢氧化钠调节ph至9.0，用磁力搅拌，温度90℃加热反应4小时，反应结束后，用蒸馏水3500da透析袋透析72小时，透析结束后，冷冻干燥得磷酸化中亚白及多糖衍生物。
2.根据权利要求1所述的方法获得的中亚白及多糖衍生物在制备抗氧化剂中的用途。
3.根据权利要求1所述的方法获得的中亚白及多糖衍生物在制备益生元的药物中的用途。
4.根据权利要求1所述的方法获得的中亚白及多糖衍生物在制备益生元的保健食品中的用途。
技术总结