本发明一株能预防和缓解溃疡性结肠炎的鼠李糖乳杆菌及其应用，具体涉及鼠李糖乳杆菌ccfm1128在制备功能性菌剂、食品和/或药物中的应用，属于功能性微生物
技术领域：
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背景技术：
：在西方国家，炎症性肠病(inflammatoryboweldisease，ibd)是一种常见的消化系统自身免疫性疾病，其发病率高达每十万人口有5～12个患者。而随着中国国民生活压力提升以及饮食规律变化，国内炎症性肠病的发病率日益上升，比20年前提高了15倍以上，因此越来越多的研究机构和学者对ibd的发病机理及治疗方法进行了深入的探索。溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis,uc)是ibd的一种，主要临床表现为慢性或亚急性腹泻，黏液脓血便和腹痛。uc是结肠黏膜层和黏膜下层连续性炎症，疾病通常由直肠开始向向全结肠蔓延。病变处肠道紧密连接受到破坏，跨膜蛋白claudins、occludin和胞内蛋白zo家族(包括zo-1、zo-2和zo-3)等肠道屏障重要的蛋白表达量降低。本病见于任何年龄，但20～30岁最多见。近几十年来，随着经济发展，uc已成为全球性疾病，中国的uc发病率也呈现快速增长趋势。uc的病程长，易复发，不仅影响患者的生活质量，还增加了患者罹患肠癌的风险。目前uc的发病机制尚不清楚，研究显示其主要与免疫因素、遗传因素和环境因素有关。近年来越来越多的研究显示，uc的发病与肠道菌群的异常有直接关系，因此，改善患者肠道菌群结构，也成为治疗uc的一种重要手段。uc病因不明，且难以治愈。针对uc的治疗，传统的药物包括美沙拉嗪、柳氮磺胺吡啶、氢化可的松、氢化波尼松、硫唑嘌呤和甲氨喋呤等，主要通过抑制炎症相关的信号通路和清除自由基、氧化物等的调控途径来干预炎症性肠病，分别适用于uc不同程度患者的治疗方法。也有病情严重的患者直接采用手术治疗方法，以避免器官坏死或癌症发生。然而手术方法仅从缓解临床症状来维持uc病人的生活质量和防止其它并发症的角度进行治疗，并没有从根本上解决病因。由于uc是一个周期性反复性强的免疫疾病，长期服用化学合成药物会对患者身体带来较大的负担和较多的副作用。而对于采取外科手术治疗严重病变的结肠，术后可能会有肠道梗阻、功能失调、回肠造瘘处粘膜退缩等后遗症。因此，为了降低患者的并发症风险，提高治疗效率，迫切需要有一种安全有效的治疗及缓解方法能应用到长期治疗过程中。近年来，一些特殊的益生菌菌株被提出在干预uc的过程中能起到有益作用。益生菌作为一类对人体健康有益的微生物，当一定数量的活的益生菌定植于宿主肠道内时，能通过改变肠道微生态等途径发挥有益的健康效应，作为抗生素类生长促进剂的替代品已经在动物生产上得以应用。而乳杆菌是最常见的益生菌，安全可食用，无副作用，大量研究显示一些特殊的乳杆菌菌株具有良好的抗炎和调节肠道菌群的作用，但这种作用在乳杆菌中具有明显的个体差异。因此在乳杆菌中筛选一些特殊的具有抗炎，修复肠道屏障以及诱导抗菌肽产生的菌株，可用于预防或辅助治疗uc。技术实现要素：本发明提供了鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)ccfm1128，于2020年7月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno:61099。本发明提供了含有权利要求1所述鼠李糖乳杆菌ccfm1128的菌剂。在本发明的一种实施方式中，所述菌剂的制备方法为：将鼠李糖乳杆菌ccfm1128在mrs培养基中培养，然后在温度35-39℃厌氧条件下培养18-24h，用ph为7.0-7.4磷酸盐缓冲液清洗2-4次，用所述的保护剂重悬，使菌浓度达到1010cfu/ml；接着，悬浮液在温度37℃厌氧条件下预培养50-70min，再在-15～-20℃预冻8-14h，进行真空冷冻干燥得到所述的发酵菌剂。在本发明的一种实施方式中，冻干保护剂为100g/l-150g/l脱脂奶粉、和/或100g/l-150g/l麦芽糊精、和/或140g/l-160g/l海藻糖。本发明提供了所述鼠李糖乳杆菌或所述菌剂在制备预防、缓解或改善溃疡性结肠炎症状的产品中的应用。在本发明的一种实施方式中，所述产品包括功能性发酵食品、药物或药物组合物。在本发明的一种实施方式中，所述功能性发酵食品包括固态食品、液态食品、半固态食品。在本发明的一种实施方式中，所述发酵食品包括乳制品、豆制品、果蔬制品，所述乳制品包括酸奶、奶油、干酪；所述果蔬制品包括黄瓜、胡萝卜、甜菜、芹菜、圆白菜制品。在本发明的一种实施方式中，所述药物或药物组合物应用于(a)～(e)至少一方面：(a)减少溃疡性结肠炎患病期间体重减轻，改善粪便性状和便血情况；(b)调控结肠紧密连接相关蛋白和结肠抗菌肽的转录水平，改善结肠粘膜损伤；(c)降低髓过氧化物酶活性；(d)减少结肠和血清中促炎因子；(e)提高短链脂肪酸含量，改善肠道菌群，提高肠道菌群多样性。在本发明的一种实施方式中，所述结肠和血清中促炎因子包括tnf-α，il-1β，il-6，ifn-γ。在本发明的一种实施方式中，所述结肠紧密连接相关蛋白包括claudin-3、zo-1、zo-2和occludin；所述结肠抗菌肽包括cramp。在本发明的一种实施方式中，所述短链脂肪酸包括乙酸、丁酸和/或丙酸。在本发明的一种实施方式中，改善肠道菌群包括提高肠道内短链脂肪酸产生菌属coprococcus的丰度在本发明的一种实施方式中，所述药物或药物组合物还包括药学上可接受的赋型剂；所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。本发明的有益效果：本发明提供的鼠李糖乳杆菌ccfm1128能耐受人体胃肠环境，显著减少溃疡性结肠炎患病期间体重减轻，改善粪便性状和便血情况，改善结肠粘膜损伤，降低mpo活性，减少结肠中促炎因子tnf-α，il-1β，il-6，ifn-γ产生，减少血清中促炎因子il-6含量，上调结肠紧密连接相关蛋白claudin-3、zo-1、zo-2和occludin的基因转录水平，上调结肠抗菌肽cramp的转录水平，提高粪便中短链脂肪酸含量，提高肠道菌群多样性，提高肠道内短链脂肪酸产生菌属coprococcus的丰度。本发明所述的鼠李糖乳杆菌ccfm1128可用于制备具有预防和/或辅助治疗溃疡性结肠炎的乳制品、豆制品与果蔬制品。还可用于制备具有预防和/或辅助治疗溃疡性结肠炎的益生菌制剂和药物，用以辅助改善溃疡性结肠炎的症状，具有非常广泛的应用前景。生物材料保藏本发明所提供的鼠李糖乳杆菌ccfm1128，分类命名为lactobacillusrhamnosus，于2020年7月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号为gdmccno：61099。附图说明图1是鼠李糖乳杆菌ccfm1128的菌落形态图；图2是鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠体重的影响图；图3是鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠结肠结肠粘膜损伤的影响图；图4是鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠结肠组织病理评分和结肠mpo活性的影响图；图5是鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠结肠和血清中促炎因子含量的影响图；图6是鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠结肠紧密连接相关蛋白的影响图；图7是鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠结肠中抗菌肽cramp转录水平的影响图；图8是鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠粪便中短链脂肪酸含量的影响图；图9是鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠肠道菌群多样性(shannon指数)的影响图；图10是鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠肠道中菌属coprococcus丰度的影响图。具体实施方式鼠李糖乳杆菌ccfm1128具有下述生物学特性：(1)菌体特征：呈革兰氏染色阳性，不形成孢子，不运动的细菌。(2)菌落特征：有氧或厌氧培养36小时形成明显的菌落，直径在0.5-2mm之间，正面形态圆形，侧面形态呈突起状，边缘不齐，乳白色，不透明，表面湿润光滑，不产生色素，参见附图1。(3)生长特性：在37℃恒温有氧或厌氧的条件下，在mmrs培养基中培养约15小时达到对数末期。(4)对模拟胃肠液具有较好的耐受能力。本菌株的获得方法为：(1)取1g来自健康人群的新鲜粪便。将样品在含有山梨醇gm17培养基中35℃富集12h；(2)将富集样品进行梯度稀释后涂布于添加了0.02％嗅甲酚紫的gm17固体平板上，培养24～48h；(3)选取变色圈明显，并且符合乳酸菌目基本形态的单菌落进行平板划线纯化，筛选分离出乳酸菌；(4)将上述单菌落培养于液体gm17培养液中培养24h后进行革兰氏染色，选取革兰氏阳性菌进行后续试验。鼠李糖乳杆菌fnmgel5-1：记载于黄丹毕业论文《人肠道鼠李糖乳杆菌的比较基因组与部分生理生化特性研究》，2019年。mmrs培养基：mrs培养基 0.05g/100ml半胱氨酸盐酸盐。实施例1：鼠李糖乳杆菌ccfm1128对模拟胃肠液具有良好的耐受性将冷冻保存的鼠李糖乳杆菌ccfm1128接种于mmrs培养基(mrs培养基 0.05％半胱氨酸盐酸盐)中，在温度37℃厌氧培养48h，再经mmrs培养液传代培养2～3次后，得到鼠李糖乳杆菌ccfm1128的培养液。取1ml鼠李糖乳杆菌ccfm1128的培养液，与9.0mlph2.5人工模拟胃液(含1％胃蛋白酶、ph＝2.5的mmrs培养基)混合，并在37℃下厌氧培养，分别在0h、0.5h、1h、2h和3h时取样，用mmrs琼脂培养基浇注培养进行平板菌落计数，测定活菌数并计算其存活率。存活率是在该培养液中在取样时的活菌数对数值与在第0h时活菌数对数值之比，以％表示。取1ml鼠李糖乳杆菌ccfm1128的培养液加入9ml人工模拟肠液(含0.3％牛胆盐、1％胰蛋白酶、ph＝8.0的mmrs培养基)中，在37℃下厌氧培养，分别在0h、0.5h、1h、2h、3h和4h时取样，用mmrs琼脂培养基浇注培养进行平板菌落计数，测定活菌数并计算其存活率。实验结果如表1和表2所示。结果表明，鼠李糖乳杆菌ccfm1128对人工胃肠液具有较好的耐受性。表1鼠李糖乳杆菌ccfm1128在人工模拟胃液中的耐受性表2鼠李糖乳杆菌ccfm1128在人工模拟肠液中的耐受性实施例2：鼠李糖乳杆菌ccfm1128对c57bl/6j小鼠无毒副作用将鼠李糖乳杆菌ccfm1128菌体重悬于3g/100ml的蔗糖溶液中，制成浓度为5.0×109cfu/ml的菌悬液。取体重14-16g左右的健康雄性c57bl/6j小鼠6只，适应环境一周后，每日给予该浓度菌悬液灌胃一次(每次灌胃0.2ml)，观察一周，记录死亡和体重情况。这些试验结果列于表3中。这些结果表明，喂食浓度5.0×109cfu/ml的鼠李糖乳杆菌ccfm1128未对小鼠造成明显影响，体重无显著变化，无死亡现象产生。小鼠外观无明显病理症状。表3小鼠体重的变化及死亡情况时间(天)1234567体重(g)19.22±0.1019.40±0.2119.65±0.2819.82±0.3320.08±0.2520.30±0.3620.54±0.31死亡情况-------注：-：小鼠无死亡实施例3：鼠李糖乳杆菌ccfm1128对uc小鼠疾病症状的影响取体重14-16g的健康雄性c57bl/6j小鼠30只，适应环境1周，每组6只小鼠，随机分为5组：空白组、模型组、药物组、鼠李糖乳杆菌ccfm1128干预组(ccfm1128)、鼠李糖乳杆菌fnmgel5-1对照组(fnmgel5-1)。灌胃菌悬液的剂量为5.0×109cfu/ml，重悬于3％(w/v)的蔗糖溶液中。在第5周在饮水中添加终浓度为2.5g/100ml(即2.5％(w/v))的葡聚糖硫酸钠(dextransulphatesodium，dss)以诱导小鼠结肠炎。实验动物分组及处理方法见表4：表4动物实验设计第五周，即造模期间(dss处理期间)，每天定时称量小鼠体重并计算其变化的百分比。此外，每日观察小鼠的粪便性状，将其分为三个等级：第一，正常小鼠的粪便成型，且为颗粒状；第二，粪便粘度增加且易散，但不粘附于肛门则为“松散”；第三，粪便呈稀水样或不成形且粘附于肛门，即为“稀便”。同时，使用匹拉米洞法测定小鼠粪便隐血情况，若小鼠粪便含有肉眼可见的红褐色或鲜红色血液，则判定为肉眼便血。最后，根据小鼠体重、粪便性状和便血情况，计算得出小鼠的疾病活动指数(diseaseactivityindex，dai)，具体评分项目的得分如表5。表5动物疾病活动指数(dai)评分系统表6疾病活动指数造模期间，uc模型组小鼠出现明显的便血，粪便松散和体重下降，如图2所示，模型组小鼠体重从第5天开始显著下降，在第七天时体重下降率接近10％，此外，模型组小鼠的疾病活动指数从造模第4天开始显著上升，第7天时增长至2.72±0.14(表7)，而鼠李糖乳杆菌ccfm1128的摄入可显著减少uc小鼠的体重下降，并改善粪便性状和便血情况，降低dai值，这表明本发明筛选的鼠李糖乳杆菌ccfm1128具有缓解uc小鼠症状的功能。实施例4：鼠李糖乳杆菌ccfm1128在改善小鼠结肠粘膜损伤中的应用c57bl/6j小鼠分组、造模及处理方法同实施例3。在第36天处死小鼠后，收集小鼠结肠组织，按照mpo试剂盒说明书测定结肠mpo活性，制作结肠石蜡切片并进行he染色，实验步骤为：(1)取距肛门1cm处的一段远端结肠1cm用4％多聚甲醛固定48h；(2)将固定好的结肠组织流水冲洗8h后进行脱水，样品依次经70％、80％、90％各级乙醇溶液脱水，各30min，再放入95％、100％各2次，每次20min；(3)将结肠样品放入1:1的二甲苯和酒精混合液中15min，然后放入二甲苯i和二甲苯ii各15min；(4)将结肠组织转移至二甲苯和石蜡各半的混合液15min，再放入石蜡ⅰ、石蜡ⅱ透蜡各1h，温度保持60℃；(5)用莱卡石蜡包埋机将结肠包埋于重新融化的蜡块中；(6)用组织切片机对包埋好的组织切片，厚度为5μm；(7)粘片后晾干，置于62℃烘箱中1h。he染色过程如下：(1)石蜡切片经二甲苯ⅰ、ⅱ脱蜡各5min，然后放入100％、95％、90％、80％、70％各级酒精溶液中各3-5min，再放入蒸馏水中3min；(2)用苏木精染色20s；(3)蒸馏水洗去未结合的苏木精；(4)伊红染色2s，依次进入95％乙醇ⅰ、ⅱ，70％乙醇中，并快速拿出，然后进入80％乙醇中50～55s，进入无水乙醇中2min；(5)切片放入1:1的二甲苯和酒精混合液中1min，接着放入二甲苯ⅰ、ⅱ中各2～3min；(6)用中性树胶封片。实验结果如图3和图4所示。由图3可以看出，模型组小鼠结肠可见大量黏膜上皮细胞变性、坏死，杯状细胞数量明显减少和肠隐窝损伤，炎细胞浸润等病理变化，结肠组织损伤评分显著高于空白对照组(图4)，此外，其结肠mpo值显著升高(图4)，灌胃鼠李糖乳杆菌ccfm1128明显降低了模型小鼠的mpo活性并接近于空白对照组，显著降低结肠组织损伤评分，其结肠结构接近于空白对照组。说明鼠李糖乳杆菌ccfm1128能够显著改善uc小鼠的结肠粘膜损伤，且效果优于药物美沙拉嗪和鼠李糖乳杆菌fnmgel5-1。实施例5：鼠李糖乳杆菌ccfm1128在降低结肠和血清中促炎因子含量中的应用c57bl/6j小鼠分组、造模及处理方法同实施例3。在第36天处死小鼠后，收集小鼠血液和结肠组织。小鼠血液在3000×g、4℃条件下离心10min，取上清，按照il-6酶联免疫试剂盒的检测方法测定血清中il-6的含量。小鼠结肠组织按1:9比例加入预冷pbs缓冲液进行组织研磨，12000×g，离心15min，取上清，分别按照tnf-α、il-1β、il-6和ifn-γ酶联免疫试剂盒的检测方法测定结肠中tnf-α、il-1β、il-6和ifn-γ的含量。实验结果如图5所示，模型组小鼠结肠中促炎因子tnf-α、il-1β、il-6和ifn-γ含量显著增高，血清中il-6含量显著升高，灌胃鼠李糖乳杆菌ccfm1128显著降低了小鼠结肠中促炎因子tnf-α、il-1β、il-6和ifn-γ，同时显著降低了血清中il-6含量，且效果优于药物美沙拉嗪。实施例6：鼠李糖乳杆菌ccfm1128在提高结肠紧密连接相关蛋白以及抗菌肽转录水平中的应用c57bl/6j小鼠分组、造模及处理方法同实施例3。在第36天处死小鼠后，收集小鼠结肠组织测定结肠中紧密连接相关蛋白claudin-3、zo-1、zo-2、occludin以及抗菌肽cramp的转录水平。测定方法如下：合成claudin-3、zo-1、zo-2、occludin、cramp和gapdh的引物序列，引物信息如表6。取小鼠同部位的结肠组织1cm，迅速放入液氮中，置于负80℃冰箱冻存，取出冻存结肠组织放入已加入1mltrizol和3粒锆珠的1.5ml无酶离心管中，用组织研磨匀浆机充分匀浆，室温静置5min。加入0.2ml氯仿，剧烈振荡30s，静置10min。接着以12000g，4℃离心15min。小心吸取上层水相至一新的无酶1.5ml离心管中，加入等体积异丙醇，上下轻轻颠倒混匀，室温静置10min。接着以12000g，4℃离心15min。弃去上清，加入1ml预冷75％乙醇，轻弹洗涤沉淀。以12000g，4℃离心5min，小心吸取弃去上清，于超净台内吹干沉淀，加入50μl无酶超纯水溶解rna。使用微量分光光度计测定提取的rna浓度，od260/od280在1.9～2.0之间的质量合格。以提取质量合格的总rna为模板，按照反转录试剂盒说明书的步骤合成cdna。反转录得到的cdna进行qrt-pcr检测，pcr体系为：5μlsybrgreensupermix，3μl去离子水，0.5μl上游引物(10μmol/l)，0.5μl下游引物(10μmol/l)和1μl的cdna模板(100ng/μl)。qpcr运行程序设定：94℃，2min，(94℃，30s；61℃，30s；72℃，20s)39个循环；目的基因经过real-timepcr检测后，以gapdh为内参基因，采用2-δδct法进行相对基因表达分析。实验结果如附图6和附图7所示。由图6可以看出，模型组小鼠结肠中四种主要紧密连接蛋白claudin-3、zo-1、zo-2和occludin均发生了显著下调，灌胃鼠李糖乳杆菌ccfm1128显著提高了结肠中四种紧密连接相关蛋白的转录水平，其效果优于药物美沙拉嗪。由图7可以看出，鼠李糖乳杆菌ccfm1128干预后显著提高了结肠中抗菌肽cramp的转录水平，其相对mrna转录水平约为空白组的3倍。表7所用引物实施例7：鼠李糖乳杆菌ccfm1128可提高uc小鼠粪便中短链脂肪酸含量c57bl/6j小鼠分组、造模及处理方法同实施例3。试验末期收集小鼠新鲜粪便冻存于-80℃。首先对粪便进行冻干处理，称取50mg粪便，用500μl饱和nacl溶液重悬，加入20μl的10％h2so4酸化；加入800μl无水乙醚，震荡均匀，提取脂肪酸，然后18000g离心15min；取上层乙醚相，加入0.25g无水na2so4进行干燥；静置30min后18000g离心10min取上层乙醚相，利用gc-ms测定小鼠冻干粪便中的短链脂肪酸含量。使用rtx-wax柱(柱长30m，内径。25μm)；载气为he，流速为2ml/min；进样体积1μl,按7.5℃/min升温至140℃，然后按60℃/min升温至200℃保持3min,离子化温度20℃；分析采用全扫描模式，为通过外标法值得标准曲线，从而计算出各短链脂肪酸浓度。实验结果如附图8所示。由实验结果可以看出，与空白组相比，模型组小鼠粪便中短链脂肪酸总量减少，尤其是丁酸含量明显减少；鼠李糖乳杆菌ccfm1128灌胃处理显著提高了小鼠粪便中短链脂肪酸的含量，包括乙酸、丙酸、丁酸和总短链脂肪酸含量，且效果优于药物美沙拉嗪和鼠李糖乳杆菌fnmgel5-1。实施例8：鼠李糖乳杆菌ccfm1128可提高uc小鼠肠道菌群多样性c57bl/6j小鼠分组、造模及处理方法同实施例3。试验末期收集小鼠新鲜粪便冻存于-80℃，用dna快速提取试剂盒按说明书方法步骤提取粪便中的dna，对样本16srdna的v3-v4区进行pcr扩增，用胶回收试剂盒对扩增片段进行纯化回收，在illuminamiseqpe300平台进行高通量测序，采用qiime2分析平台对扩增子进行分析。pcr扩增引物：f：5’-aytgggydtaaagng-3’，seqidno.13；r：5’-tacnvgggtatctaatcc-3’，seqidno.14。实验结果如附图9所示。由实验结果可以看出，与空白组相比，模型组小鼠shannon指数显著降低，说明dss结肠炎小鼠肠道菌群多样性显著降低。鼠李糖乳杆菌干预后显著提高shannon指数，说明鼠李糖乳杆菌可提高结肠炎小鼠肠道菌群的多样性。实施例9：鼠李糖乳杆菌ccfm1128可提高uc小鼠肠道中产短链脂肪酸菌属粪球菌(coprococcus)丰度c57bl/6j小鼠分组、造模及处理方法同实施例3。试验末期收集小鼠新鲜粪便冻存于-80℃，用dna快速提取试剂盒按说明书方法步骤提取粪便中的dna，对样本16srdna的v3-v4区进行pcr扩增，用胶回收试剂盒对扩增片段进行纯化回收，在illuminamiseqpe300平台进行高通量测序，采用qiime2分析平台对扩增子进行分析(引物如seqidno.13和14所示)。实验结果如附图10所示。由实验结果可以看出，与正常对照组相比，模型组小鼠粪便中产短链脂肪酸的菌属coprococcus丰度显著下降，灌胃鼠李糖乳杆菌ccfm1128可改善dss引起的菌群变化，显著提高uc小鼠粪便中产短链脂肪酸的菌属coprococcus丰度。实施例10：鼠李糖乳杆菌ccfm1128在制备发酵食品中的应用菌剂制备：将鼠李糖乳杆菌ccfm1128在mrs培养基中培养，然后在温度35-39℃厌氧条件下培养18-24h，用ph为7.0-7.4磷酸盐缓冲液清洗2-4次，用所述的保护剂重悬，使菌浓度达到1010cfu/ml；接着，悬浮液在温度37℃厌氧条件下预培养50-70min，再在-15～-20℃预冻8-14h，进行真空冷冻干燥得到所述的发酵菌剂；冻干保护剂为100g/l-150g/l脱脂奶粉、和/或100g/l-150g/l麦芽糊精、和/或140g/l-160g/l海藻糖。选用新鲜蔬菜洗净后榨汁，接着进行高温瞬间灭菌，在温度140℃下高温热杀菌2秒后，立即降温至37℃，再接入本发明制备的鼠李糖乳杆菌ccfm1128或含鼠李糖乳杆菌ccfm1128的菌剂发酵剂，使其浓度达到106cfu/ml以上，在温度4℃下冷藏保存，于是得到含有鼠李糖乳杆菌ccfm1128活菌的果蔬饮料。还可以利用本发明的鼠李糖乳杆菌ccfm1128发酵生产制备其他发酵食品，发酵食品包括酸奶、奶油、干酪、黄瓜、胡萝卜、甜菜、芹菜、圆白菜制品等。虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。sequencelisting<110>江南大学<120>一株能预防和缓解溃疡性结肠炎的鼠李糖乳杆菌及其应用<130>baa200756a<160>14<170>patentinversion3.3<210>1<211>20<212>dna<213>人工序列<400>1tcaagaaggtggtgaagcag20<210>2<211>21<212>dna<213>人工序列<400>2aaggtggaagagtgggagttg21<210>3<211>21<212>dna<213>人工序列<400>3aactgcgtacaagacgagacg21<210>4<211>20<212>dna<213>人工序列<400>4atccctgatgatggtgttgg20<210>5<211>21<212>dna<213>人工序列<400>5cttctcttgctggccctaaac21<210>6<211>21<212>dna<213>人工序列<400>6tggcttcacttgaggtttctg21<210>7<211>20<212>dna<213>人工序列<400>7atgggagcagtacaccgtga20<210>8<211>22<212>dna<213>人工序列<400>8tgaccaccctgtcattttcttg22<210>9<211>20<212>dna<213>人工序列<400>9cacacttgcttgggacagag20<210>10<211>20<212>dna<213>人工序列<400>10tagccatagcctccatagcc20<210>11<211>20<212>dna<213>人工序列<400>11gctgtggcggtcactatcac20<210>12<211>21<212>dna<213>人工序列<400>12tgtctagggactgctggttga21<210>13<211>15<212>dna<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(14)..(14)<223>nisa,c,g,ort<400>13aytgggydtaaagng15<210>14<211>18<212>dna<213>人工序列<220><221>misc_feature<222>(4)..(4)<223>nisa,c,g,ort<400>14tacnvgggtatctaatcc18当前第1页1 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技术特征：1.鼠李糖乳杆菌(lactobacillusrhamnosus)，于2020年7月24日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为gdmccno：61099。
2.含有权利要求1所述鼠李糖乳杆菌的菌剂。
3.权利要求1所述鼠李糖乳杆菌或权利要求2所述菌剂在制备预防、缓解或改善溃疡性结肠炎症状的产品中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述产品包括功能性发酵食品、药物或药物组合物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述功能性发酵食品包括固态食品、液态食品、半固态食品。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述药物或药物组合物应用于(a)～(e)至少一方面：
(a)减少溃疡性结肠炎患病期间体重减轻，改善粪便性状和便血情况；
(b)调控结肠紧密连接相关蛋白和结肠抗菌肽的转录水平，改善结肠粘膜损伤；
(c)降低髓过氧化物酶活性；
(d)减少结肠和血清中促炎因子；
(e)提高短链脂肪酸含量，改善肠道菌群，提高肠道菌群多样性。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述结肠和血清中促炎因子包括tnf-α，il-1β，il-6，ifn-γ。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述结肠紧密连接相关蛋白包括claudin-3、zo-1、zo-2和occludin；所述结肠抗菌肽包括cramp。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述短链脂肪酸包括乙酸、丁酸和/或丙酸。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物或药物组合物还包括药学上可接受的赋型剂；所述药学上可接受的赋型剂是指任何可用于药学领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。
技术总结本发明公开了一株能预防和缓解溃疡性结肠炎的鼠李糖乳杆菌及其应用，属于功能性微生物技术领域。鼠李糖乳杆菌CCFM1128能耐受人体胃肠环境，显著改善溃疡性结肠炎患病期间的体重下降，改善粪便性状和便血情况，减少结肠粘膜损伤，降低MPO活性，减少结肠中促炎因子TNF‑α，IL‑1β，IL‑6，IFN‑γ产生，降低血清中促炎因子IL‑6含量，上调结肠紧密连接相关蛋白Claudin‑3、ZO‑1、ZO‑2和Occludin的基因转录水平，上调结肠中抗菌肽CRAMP的转录水平，提高粪便中短链脂肪酸含量，提高肠道菌群多样性，提高肠道内短链脂肪酸产生菌属Coprococcus的丰度。
技术研发人员：王刚;郑雨星;王琳琳;翟齐啸;陆文伟;崔树茂;杨波;毛丙永;唐鑫;赵建新;张灏;陈卫
受保护的技术使用者：江南大学
技术研发日：2020.12.29
技术公布日：2021.03.12
