一种提升大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞效率的方法与流程

    专利2022-07-08  110


    本发明涉及一种提升大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞效率的方法,属于干细胞分化培养领域。



    背景技术:

    生物起搏器为治疗缓慢型心律失常提供了一种新的选择,骨髓间充质干细胞是心脏修复和再生细胞治疗的主要来源之一,因为这些细胞很容易获得,而且对任何不良免疫反应几乎没有固有的免疫原性。但只有非常少的部分间充质干细胞在分化过程中表现为心肌细胞特异性蛋白阳性,这明显限制了其对心脏修复的潜在临床应用。



    技术实现要素:

    本发明的目的是针对上述问题,提供一种提升大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞效率的方法。

    本发明的技术方案是:一种提升大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞效率的方法,其特征在于,包括以下步骤:

    (1)构建慢病毒干扰载体g9a-shrna,将g9a-shrna转染至大鼠骨髓间充质干细胞;

    (2)通过5-氮杂胞苷诱导转染干扰载体后的骨髓间充质干细胞,在第21天的时候流式细胞检测肌钙蛋白阳性细胞的阳性率。

    步骤(1)中,包括以下步骤:(1-1)根据ncbi提供的g9a的cds区域序列,设计干扰靶标;合成了上游和下游序列后,退火形成寡核苷酸双链,通过bamhi和ecori双酶切连接pgmlv-sc5rnai载体得到重组干扰质粒,分别为sh-g9a;然后将重组干扰质粒进行测序进一步验证;测序成功后,将载体进行慢病毒包;

    (1-2)采用fugene(promega)脂质体介导g9a-shrna慢病毒重组质粒转染大鼠骨髓间充质细胞系;转染前24h,将大鼠骨髓间充质细胞按l×l05/孔接种于24孔板中,用含10

    转载请注明原文地址:https://wp.8miu.com/read-17717.html

    最新回复(0)