本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种抑制热稳定聚合酶的核酸及应用。
背景技术：
dna聚合酶负责基因组的复制和维护，这是在世代间精确传递遗传信息的中心职责。在体外，dna复制可以重复多次，例如在聚合酶链式反应期间。最初研究中，dna聚合酶是在每一轮dna复制的开始时添加的；后来，确认了从在高温下生长的细菌中可获得热稳定dna聚合酶，这些酶只需要添加一次。在pcr高温下，这些酶没有不可逆地失活。因此，可以进行聚合酶链式反应的重复循环而不需要在每一合成加成过程开始时添加新鲜的酶。
dna聚合酶特别是热稳定聚合酶，是重组dna研究和疾病的医疗诊断中大量技术的关键。特别是对于诊断应用，目标核酸序列可能仅仅是所考察(inquestion)dna或rna的一小部分，因此在不扩增的情况下可能难以检测到目标核酸序列的存在。taqdna聚合酶是热稳定聚合酶最常用的一种，其是从温泉中分离的一株水生噬热杆菌(thermusaquaticus)中提取获得。此酶能耐高温，在分子克隆中taqdna聚合酶可用于dna序列测定并可利用聚合酶链式反应(polymerasechainreaction，pcr)对dna的特定片段进行体外扩增。在pcr过程中，由于taqdna聚合酶在变性步骤中(约94℃)不失活，可直接进入第二轮循环，因此不必每轮循环时重新加入新酶，这使得taqdna聚合酶成为pcr反应中的独特用酶。
由于常规的taqdna聚合酶活性位点直接暴露，在常温下存在活性，且最低在4℃时仍存在聚合酶活性，在配制pcr开始反应前，由于引物形成的二聚体，或者是引物本身特异性的问题导致的与模板的非特异性结合，导致非特异性产物的产生，造成pcr产物含有较多的非特异性产物或者无目的产物。但如果将taqdna聚合酶的活性位点进行封闭，该非特异性现象能够被明显改善，因此商业化的taqdna聚合酶大多都是将taq酶的聚合酶活性位点进行封闭，以抑制其扩增起始前的非特异性产物的产生，然后在pcr扩增起始前加入一步高温热激活步骤，使封闭酶活的物质与聚合酶活性位点分离，使taqdna聚合酶恢复活性，达到可逆封闭酶活的特点。
常规使用的修饰方法有单克隆抗体修饰和小分子化学基团修饰等，其虽然可以抑制taqdna聚合酶的活性，明显提高酶的性能，但也存在一定的缺点。如抗体修饰taqdna聚合酶：首先，由于taq酶本身为大分子蛋白，蛋白表面存在多个抗原表位，因此在初期需要大量的针对其聚合酶活性的位点的抗体表位筛选工作，在筛选完抗体之后，仍需要定量对多个单克隆抗体进行pcr性能的验证，进行第二轮的重复筛选，整体操作周期较长，操作过程复杂。其次，在后期抗体的放大生产时，需要对动物进行免疫，采集血液或者腹水分离单克隆抗体。但由于动物本身在饲养过程中接触环境中的其他抗原，会产生一定量的非目的抗体，导致纯化后的抗体纯度不高；且抗体的质量本也与动物本身的健康状态相关，动物的健康状态也会影响到最终抗体的活性。此外，本身细胞株在传代、存放过程中会存在退化的情况，同样会导致抗体本身活性下降，批次间抗体活性存在差异，导致抗体酶批次间存在活性差异。化学修饰taqdna聚合酶同样存在一定的缺点：化学基团通过与taq酶中的氨基酸残基进行反应而达到修饰的目的，但由于同一个蛋白含有不止一个相同类型的氨基酸残基，且氨基酸残基的位置可能在蛋白表面，也可能在其内部，导致修饰的不确定性。同时，由于化学反应本身速率较快，导致控制整个修饰过程难度较高，且化学反应常常伴随着副产物的产生，同样增加的反应的不确定性。
有鉴于此，特提出本发明。
技术实现要素：
本发明的第一个目的在于提供一种核酸，以至少缓解现有技术中存在的技术问题之一。
本发明的第二个目的在于提供上述核酸在抑制热稳定聚合酶活性中的应用。
本发明的第三个目的在于提供一种核酸修饰酶。
本发明的第四个目的在于提供一种核酸扩增试剂盒。
本发明的第五个目的在于提供一种热稳定聚合酶的制备方法，该方法工艺简单，操作方便，且制备得到的热稳定聚合酶具有良好的热启动性。
本发明提供了一种核酸，所述核酸包括如下(a)-(c)中的任一种核苷酸序列：
(a)、seqidno:1-12所示的核苷酸序列之一；
(b)、与(a)所述的核苷酸序列具有80％以上同一性的核苷酸序列；
(c)、与(a)或(b)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
进一步地，所述核酸的5’端和/或3’端经过修饰；
优选地，所述核酸的5’端具有硫代修饰、氨基修饰、巯基修饰、磷酸化修饰或生物素修饰；
优选地，所述核酸的3’端具有硫代修饰、磷酸化修饰、脱羟基修饰、巯基修饰、磷酸化修饰或生物素修饰。
进一步地，所述核酸能抑制热稳定聚合酶；
任选地，所述核酸能在最高60℃下抑制热稳定聚合酶；
任选地，所述核酸能在最高55℃下抑制热稳定聚合酶。
任选地，热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
进一步地，所述核酸为单链dna。
本发明还提供了上述的核酸在抑制热稳定聚合酶活性中的应用；
所述热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
本发明还提供了一种核酸修饰酶，包括热稳定聚合酶和上述的核酸；
所述热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
本发明还提供了一种核酸扩增试剂盒，包括上述的核酸修饰酶。
另外，本发明还提供了上述核酸修饰酶的制备方法，包括将热稳定聚合酶与上述的核酸共孵育，得到活性封闭的核酸修饰酶；
所述热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
进一步地，所述热稳定聚合酶与核酸的单位浓度比为1:1-10；
优选地，所述共孵育的温度为4-50℃；
优选地，所述共孵育的时间为0.5-24h。
进一步地，还包括对活性封闭的核酸修饰酶进行纯化的步骤；
优选地，在纯化后还包括浓缩的步骤，使纯化后的热稳定聚合酶浓度不小于活性封闭前的热稳定聚合酶浓度；
优选地，还包括向浓缩后的热稳定聚合酶中加入冷冻保护剂及表面活性剂的步骤。
本发明提供的核酸可在常温下抑制热稳定聚合酶的活性，同时具有良好的热启动性，从而能够有效控制pcr反应初始阶段引物二聚体或非特异性产物的产生。并且核酸在反应过程中不会被灭活或者降解，在复性过程中可以重新折叠，重新结合到热稳定聚合酶上封闭其活性，能够保证体系中热稳定聚合酶活性充足。此外，基于核酸确定的序列进行制备，能够保证不同批次间核酸的稳定性。
本发明提供的核酸修饰酶的制备方法，包括将热稳定聚合酶与核酸共孵育。该方法工艺简单，操作方便，修饰过程较温和、可控，且制备得到的核酸修饰酶具有良好的热启动性，从定量、定性结果分析都高于未修饰的酶和对照酶，活性封闭效果明显。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1提供的核酸在不同温度下结合并抑制热稳定聚合酶的功能的结果图；
图2为本发明实施例1提供的不同核酸在55℃下结合并抑制热稳定聚合酶的功能的结果图；
图3为本发明实施例3提供的不同核酸及对照核酸修饰后taq酶的荧光定量pcr结果图。
具体实施方式
除非本文另有定义，连同本发明使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。术语的含义和范围应当清晰，然而，在任何潜在不明确性的情况下，本文提供的定义优先于任何字典或外来定义。在本申请中，除非另有说明，“或”的使用意味着“和/或”。此外，术语“包括”及其他形式的使用是非限制性的。
一般地，连同本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白和核酸化学和杂交使用的命名法和其技术是本领域众所周知和通常使用的那些。除非另有说明，本发明的方法和技术一般根据本领域众所周知，且如各种一般和更具体的参考文献中所述的常规方法来进行，所述参考文献在本说明书自始至终引用和讨论。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书、如本领域通常实现的或如本文所述来进行。连同本文描述的分析化学、合成有机化学以及医学和药物化学使用的命名法、以及其实验室程序和技术是本领域众所周知和通常使用的那些。
根据本发明的一个方面，提供了核酸，所述核酸包括如下(a)-(c)中的任一种核苷酸序列：
(a)、seqidno:1-12所示核苷酸序列之一；
(b)、与(a)所述的核苷酸序列具有80％以上同一性的核苷酸序列；
(c)、与(a)或(b)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
本发明提供核酸的具体序列可以根据所要修饰的对象进行针对性的选择。该核酸可在常温下抑制热稳定聚合酶的活性，同时具有良好的热启动性，即核酸能够与热稳定聚合酶结合致使热稳定聚合酶的活性被阻断，而当温度升高到某一阈值以上，核酸又能够释放结合的热稳定聚合酶并启动其活性，从而能够有效控制pcr反应初始阶段引物二聚体或非特异性产物的产生。并且，核酸在反应过程中不会被灭活或者降解，在复性过程中可以重新折叠，重新结合到热稳定聚合酶上封闭其活性，能够保证体系中热稳定聚合酶活性充足。此外，基于核酸确定的序列进行制备，也能够保证不同批次间核酸的稳定性。
需要进行说明的是，术语“核酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物。该术语包括含有已知核苷酸类似物或修饰的骨架残基或连锁的核酸，“核酸”可以是合成的、天然存在的或非天然存在的，其具有与参考核酸相似的结合特性，并且以类似于参考核苷酸的方式代谢。
术语“热稳定聚合酶”是指对热相对稳定，并且催化核苷三磷酸的模板依赖性聚合的酶。当“热稳定聚合酶”用于pcr的反复加热和冷却循环时，能够保持用于聚合的酶活性和核酸外切酶活性。例如，“热稳定核酸聚合酶”在高于45℃的温度下，或在40℃至80℃，更优选55℃至75℃的温度下具有最佳活性。
需要进行说明的是，术语“同一性”包括与(a)所述的核苷酸序列具有至少80％(例如可以为，但不限于80％、82％、85％、88％、90％、92％、95％、96％、97％、98％、99％或者更高)同一性的核苷酸序列。
在本发明中，与seqidno:1-12所示核苷酸序列互补的核苷酸序列同样也具有可在常温下抑制热稳定聚合酶的活性，同时具有良好的热启动性的作用，因此，与seqidno:1-12所示核苷酸序列互补的核苷酸序列也在本发明的保护范围之内。
在一些优选的实施方式中，所述核酸的5’端和/或3’端经过修饰。
可以理解的是，“和/或”用于表示所说明的情况的一者或两者均可能发生，例如所述核酸可以在5’端具有修饰，也可以在3’端具有修饰，或者在5’端和3’端同时具有修饰。
其中，5’端典型但非限制性的具有硫代修饰、氨基修饰、巯基修饰、磷酸化修饰或生物素修饰；3’端典型但非限制性的具有硫代修饰、磷酸修饰、脱羟基修饰、巯基修饰、磷酸化修饰或生物素修饰。通过对核酸适配体进行不同的修饰，能够使核酸适配体具有不同的特点，例如硫代修饰能够防止被核酸酶降解、磷酸化修饰可抗外切酶消化等。
在一些优选的实施方式中，所述核酸能抑制热稳定聚合酶。
任选地，所述核酸能在最高60℃下抑制热稳定聚合酶。
本发明提供的核酸能够与热稳定聚合酶结合，从而阻断热稳定聚合酶的活性，在本实施方式中，当温度升高到至少60℃时，核酸能够与结合的热稳定聚合酶解离并启动热稳定聚合酶活性，从而能够有效减少pcr反应初始阶段引物二聚体或非特异性产物的产生。
任选地，所述核酸能在最高55℃下抑制热稳定聚合酶。
同样地，在本实施方式中，当温度升高到至少55℃时，核酸能够与结合的热稳定聚合酶解离并启动热稳定聚合酶活性，从而能够有效减少pcr反应初始阶段引物二聚体或非特异性产物的产生。
任选地，热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
根据本发明的第二个方面，还提供了上述的核酸在抑制热稳定聚合酶活性中的应用，其中，典型的热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
根据本发明的第三个方面，还提供了一种核酸修饰酶，该核酸修饰酶包括热稳定聚合酶和上述的核酸。
基于本发明提供的抑制热稳定聚合酶的核酸可在常温下抑制热稳定聚合酶的活性，同时又兼具良好的热启动性，因此，包括该核酸的核酸修饰酶同样具有良好的热启动性，能够保证体系中热稳定聚合酶的活性充足，从定量、定性结果分析都达到化学修饰对照相同的水平。
基于本发明提供的核酸修饰酶相同的发明构思，本发明还提供了一种核酸扩增试剂盒，因此，本发明提供的核酸扩增试剂盒具有与本发明提供的核酸修饰酶全部的有益效果，在此不再赘述。
此外，本发明还提供了上述核酸修饰酶的制备方法，包括将热稳定聚合酶与上述的核酸共孵育，得到活性封闭的核酸修饰酶。
该方法工艺简单，操作方便，修饰过程较温和、可控，且制备得到的核酸修饰酶具有良好的热启动性，从定量、定性结果分析都达到化学修饰对照相同的水平，修饰效果明显。
在一些优选的实施方式中，所述热稳定聚合酶与核酸的单位浓度比为1:1-10，例如可以为，但不限于1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10。需要说明的是，热稳定聚合酶与核酸的单位浓度比指的是热稳定聚合酶单位：核酸浓度，其中热稳定聚合酶单位为u，核酸浓度为pmol/μl。
优选地，所述共孵育的温度为4-50℃，例如可以为，但不限于4℃、5℃、10℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃或50℃。
优选地，所述共孵育的时间为0.5-24h，例如可以为，但不限于0.5h、1h、2h、5h、8h、10h、15h、20h或24h。
在上述优选的温度和/或优选的时间条件下共孵育核酸和热稳定聚合酶，能够起到更好的修饰作用。
优选地，还包括对活性封闭的核酸修饰酶进行纯化的步骤。
在一些具体的实施方式中，对核酸修饰酶进行收样处理，然后使用柱纯化的方法，对核酸修饰酶进行过柱处理，以除去未结合的核酸和热稳定聚合酶，即通过纯化能够得到修饰有核酸的热稳定聚合酶，产物纯度更高。
优选地，在纯化后还包括浓缩的步骤，使纯化后的核酸修饰酶浓度不小于活性封闭前的热稳定聚合酶浓度。
通过浓缩纯化后的核酸修饰酶浓度，能够保证在实际使用过程中核酸修饰酶的添加量不会过大，减少反应体系中不必要的成分，保证检测结果的准确性。可以理解的是，活性封闭前的热稳定聚合酶浓度为与核酸共孵育前的热稳定聚合酶浓度。
优选地，还包括向浓缩后的核酸修饰酶中加入冷冻保护剂及表面活性剂的步骤。
加入冷冻保护剂和表面活性剂能够保证核酸修饰酶在-20℃条件下不结冰，从而维持核酸修饰酶的蛋白结构及其活性。
对冷冻保护剂和表面活性剂不做具体的限定，凡是能够起到相应作用的试剂均可。其中，冷冻保护剂例如可以为，但不限于甘油；表面活性剂例如可以为，但不限于吐温20、吐温80、tritonx-100、np-40或ca-630。
在一些具体的实施方式中，加入等体积的冷冻保护剂至终浓度为50％(v/v)，表面活性剂加至终浓度0.025％(v/v)。
下面通过具体的实施例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
本发明实施例中用到的主要试剂信息如下：
taq酶为菲鹏生物股份有限公司生产的taqdnapolymerase(货号：md001)；
用于修饰的核酸适配体、pcr检测的引物、taqman探针均为委托引物、探针合成厂家进行合成，具体厂家没有限制，保证纯度≥99％，序列测序正确即可；
进行pcr反应使用的buffer为菲鹏生物股份有限公司的taq酶配套的5×pcrbuffer(货号：md001-b)；
进行荧光定量的pcr仪器为abi-实时荧光定量，型号为abi-7500。
实施例1、抑制热稳定聚合酶的核酸
发明人设计了系列单链核酸，经过多轮筛选和测试获得序列如seqno:1所示的核酸，不同温度封闭性能测试其能发挥结合并抑制热稳定聚合酶的功能，测试方法：使用核酸修饰后的taq酶(参照实施例2)配制pcr体系，使用人基因组dna作为模板，在进行pcr反应前分别进行35/40/45/50/55℃热处理，然后再进行正常的pcr扩增反应条件，最后通过琼脂糖电泳分析非特异性条带的数量、亮度来判断核酸适配体对于taq酶的封闭效果。如图1所示，从图中可以看出在35℃到55℃热处理条件下核酸修饰后的taq酶均无明显的非特异性条带，说明核酸对于taq酶的活性封闭效果良好，在55℃孵育条件下聚合酶活性没有释放，没有导致非特异性产物的扩增。
本实施例中，还通过核苷酸替换的方式设计和验证了序列一致性大于80％的变体，如seqidno:2-12所示，在55℃下封闭性能测试(方法同上)，能发挥结合并抑制聚合酶的功能(如图2所示，在图2中，泳道由左至右依次为：泳道1-12：seqidno:1-12，泳道13：marker)。
实施例2、核酸修饰酶的制备
将实施例1提供的核酸进行梯度退火，退火条件为从95℃退火到4℃，每隔8-10℃退火1轮，每轮处理1-2min；使其正确折叠成茎环结构。取dna聚合酶(如taq酶)与上述折叠后的核酸混合，装于5ml螺母管中，置于血浆混匀器上，设置转速为50rpm，在10℃条件下，混匀修饰8小时，获得核酸修饰酶。
将核酸修饰酶使用monoq柱进行纯化，将未修饰上的核酸进行分离，收集完全修饰上核酸的酶；将修饰上的核酸修饰酶进行浓缩处理，使其蛋白浓度大于或等于修饰前蛋白浓度，可选择性补加表面活性剂(例如吐温20)和冷冻保护剂(例如甘油)进行保存。核酸修饰后的酶37℃放置7天稳定性好，灵敏度与未放置保存基本一致。
实施例3、酶活封闭性能检测
将不同核酸修饰后的taq酶配制pcr反应体系，以人基因组dna为模板，设置非特异性扩增条件进行pcr扩增，最终通过琼脂糖电泳，比较非特异性条带的数量来判断适体的对于taq酶的封闭效果。
1、酶活封闭检测体系配制
检测引物：
forwardprimer：5’-acgcctccgaccagtgttt-3’；
reverseprimer：5’-acgcctccgaccagtgttt-3’。
酶活封闭检测体系：
表中核酸修饰taq酶是采用seqidno:1-12所示的核酸按照实施例2的方法分别制备而成。
对照核酸修饰taq酶(1#，2#)的核酸为：
1#:5’-cgatcatctcagaacattcttagcgttttgttcttgtgtatgatcg-3’；
2#:5’-gatcatctcagaacattcttagcgttttgttcttgtgtatga-3’。
2、反应条件：
3、产物法分析
将上述反应后产物使用2％琼脂糖凝胶电泳进行分析，根据电泳后产物的扩增条带数量分析不同核酸修饰后taq酶的活性封闭效果，结果如下图3所示(泳道由左至右依次为：泳道1-12：seqidno:1-12，泳道13：1#，泳道14：2#)，本发明核酸修饰taq酶扩增特异性增强，且优于对照核酸修饰酶。
实施例4、荧光定量pcr活性检测
1、荧光定量pcr检测体系配制
使用人基因组中管家基因gapdh作为待检dna片段，设计引物探针：
gapdh-forwardprimer：5’-ggaaggtgaaggtcggagtc-3’；
gapdh-reverseprimer：5’-cattgatggcaacaatatccac-3’；
gapdh-probe：(fam)5’-ttggtcgtattgggcgcctggtcac-3’(bhq1)。
荧光定量检测体系：
2、反应条件:
3、荧光定量pcr结果分析
上述荧光定量结果如下表1所示：
表1不同样品荧光定量pcr的ct值
以上结果表明，本发明核酸对taq酶的聚合酶活性存在封闭作用，且优于对比核酸，与化学修饰酶相当。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
1.核酸，其特征在于，所述核酸包括如下(a)-(c)中的任一种核苷酸序列：
(a)、seqidno:1-12所示的核苷酸序列之一；
(b)、与(a)所述的核苷酸序列具有80％以上同一性的核苷酸序列；
(c)、与(a)或(b)所述的核苷酸序列互补的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的核酸，其特征在于，所述核酸的5’端和/或3’端经过修饰；
优选地，所述核酸的5’端具有硫代修饰、氨基修饰、巯基修饰、磷酸化修饰或生物素修饰；
优选地，所述核酸的3’端具有硫代修饰、磷酸化修饰、脱羟基修饰、巯基修饰、磷酸化修饰或生物素修饰。
3.根据权利要求1或2所述的核酸，其特征在于，所述核酸能抑制热稳定聚合酶；
任选地，所述核酸能在最高60℃下抑制热稳定聚合酶；
任选地，所述核酸能在最高55℃下抑制热稳定聚合酶。
4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
5.根据权利要求1或2所述的核酸，其特征在于，所述核酸为单链dna。
6.如权利要求1-5任一项所述的核酸在抑制热稳定聚合酶活性中的应用；
所述热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
7.核酸修饰酶，其特征在于，包括热稳定聚合酶和权利要求1-5任一项所述的核酸；
所述热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
8.核酸扩增试剂盒，其特征在于，包括权利要求7所述的核酸修饰酶。
9.核酸修饰酶的制备方法，其特征在于，包括将热稳定聚合酶与权利要求1-5任一项所述的核酸共孵育，得到活性封闭的核酸修饰酶；
所述热稳定聚合酶来自栖热菌属(thermus)的野生型或突变型或修饰型；
任选地，栖热菌属选自：thermusaquaticus、thermusthermophilus、thermuscaldophilus、thermusflavus或thermusfiliformis中的一种或多种。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述热稳定聚合酶与核酸的单位浓度比为1:1-10；
优选地，所述共孵育的温度为4-50℃；
优选地，所述共孵育的时间为0.5-24h；
优选地，还包括对活性封闭的核酸修饰酶进行纯化的步骤；
优选地，在纯化后还包括浓缩的步骤，使纯化后的核酸修饰酶浓度不小于活性封闭前的热稳定聚合酶浓度；
优选地，还包括向浓缩后的核酸修饰酶中加入冷冻保护剂及表面活性剂的步骤。
技术总结