本发明属于胶原蛋白肽制备
技术领域：
，具体涉及一种以鳕鱼皮原料生产胶原蛋白肽的方法。
背景技术：
：胶原蛋白是很多结缔组织的结构性蛋白，在哺乳动物蛋白质中含量达到30%以上，胶原蛋白肽是胶原蛋白的酶解产物，其以小肽和游离氨基酸的形式易被吸收，动物实验证实，摄入放射性胶原蛋白肽后，在股骨、胫骨、关节、肌肉等组织中都检测到了放射性存在，说明一定程度上，胶原蛋白肽参与了上述组织的生长合成，而临床研究证明胶原蛋白肽可以促进骨骼关节健康，缓解因运动导致的疼痛，改善肌少症，促进伤口愈合等，适用于运动营养食品。目前数据统计，2015-2019年，全球共发布了约4.8万件运动营养食品，而其中有3200多件新产品中添加了胶原蛋白肽，约占总量的6.7%，而美国和德国是发布添加了胶原蛋白肽的运动营养食品最多的国家。而我国胶原蛋白肽出于初级阶段，且水产品种提取的胶原蛋白肽产品极易产生令人不愉快的腥味，且色泽深，多肽分子量分布不集中，且提取率低。现有技术中，大多采用活性炭进行异味吸附，但是，该方法对于异味吸附不彻底，且蛋白损失率高。技术实现要素：针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种一种以鳕鱼皮原料生产胶原蛋白肽的方法，该方法制备的胶原蛋白肽无异味，脱色脱腥彻底，且产率高，品质好。本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：本发明提供了一种以鳕鱼皮原料生产胶原蛋白肽的方法，包括以下步骤：（1）将鳕鱼皮清洗干净后，加入氢氧化钠水溶液浸泡脱脂，然后加入梯度氯化钠-柠檬酸水溶液进行搅拌浸泡，每个梯度浸泡2h，第二梯度浸泡结束后开始缓慢滴加碳酸氢钙水溶液，滴加完成后，继续浸泡3h，浸泡完成后过滤，去离子水清洗鱼皮，将鱼皮晾干表面水分后，加入乙酸溶液及藻朊酸钠进行溶胀12h，打浆，调节ph为6.5-7.5，得鱼皮浆备用；（2）将鱼皮浆加入木瓜蛋白酶及角鲨烯，进行酶解，酶解结束后灭酶，离心后取上清液，将上清液进行超滤后冷冻干燥即可。进一步的，步骤（1）中，所述氢氧化钠水溶液的质量浓度为0.5-0.6%；所述脱脂时间为3-3.5h；所述鳕鱼皮同氯化钠-柠檬酸水溶液的料液比为1g：20-25ml；所述梯度氯化钠-柠檬酸水溶液具体为：第一梯度为氯化钠同柠檬酸的质量比为1：0.3-0.5，第二梯度氯化钠同柠檬酸的质量比为2：0.3-0.5；所述氯化钠在水溶液中的质量浓度为10%。进一步的，所述碳酸氢钙水溶液的浓度为0.15-0.20g/ml；所述碳酸氢钙同柠檬酸的摩尔比为3：2。进一步的，所述乙酸溶液的浓度为5-8g/ml；所述藻朊酸钠加入量占鳕鱼皮质量的0.3-0.6%；所述溶胀的时间为10-12h。进一步的，步骤（3）中，所述木瓜蛋白酶的添加量为1000-1200u/g；所述角鲨烯的加入量占鱼浆质量的0.2-0.25%。上述酶解为在38-42℃的温度下，酶解2.5-3h。本发明提供的制备方法，前期将鱼皮浆进行预处理，前期在氯化钠及柠檬酸盐析作用、晶体渗透压及稀释作用下，能够使得鱼皮中腥味物质析出，而碳酸氢钙水溶液的加入，有助于腥味物质的析出及散发，通过前期的预处理，不仅能够提高胶原蛋白肽的得率，同时，能够消除通过水产品制备胶原蛋白肽而造成的异味，且不会产生蛋白损失，前期的预处理能够使得制备的胶原蛋白肽保持其储存稳定性，保护其表面的极性基团稳定，从而使得制备的胶原蛋白肽维持高的生物活性。本发明的有益效果为：（1）本发明提供的提取方法，能够提高胶原蛋白体得率，且提取的胶原蛋白肽纯度高，分子量分布均匀，抗氧化能力强；（2）本发明制备的胶原蛋白肽无异味，最大程度的降低了水产品制备胶原蛋白肽的苦腥味，且大大降低了酶解时间。具体实施方式下面通过具体的实施例对本发明的技术方案做进一步的解释和说明。实施例1（1）将鳕鱼皮清洗干净后，加入质量浓度为0.6%的氢氧化钠水溶液脱脂3h，然后每1g加入20ml质量浓度为10%氯化钠-柠檬酸水溶液进行梯度浸泡，第一梯度为氯化钠同柠檬酸的质量比为1：0.3，浸泡2h，第二梯度氯化钠同柠檬酸的质量比为2：0.3，浸泡2h后，开始缓慢滴加浓度为0.15g/ml的碳酸氢钙水溶液（碳酸氢钙同柠檬酸的摩尔比为3：2），滴加完成后，继续浸泡3h，浸泡完成后过滤，去离子水清洗鱼皮，将鱼皮晾干表面水分后，每1g鳕鱼皮中加入10ml7g/ml的乙酸溶液及占鳕鱼皮质量0.6%的藻朊酸钠进行溶胀12h，打浆，调节ph为7.5，得鱼皮浆备用；（2）将鱼皮浆加入1200u/g木瓜蛋白酶及占鱼浆质量0.2%的角鲨烯，在38-42℃的温度下，酶解2.5，酶解结束后灭酶，离心后取上清液，将上清液进行超滤后冷冻干燥即可。实施例2（1）将鳕鱼皮清洗干净后，加入质量浓度为0.6%的氢氧化钠水溶液脱脂3h，然后每1g加入25ml质量浓度为10%氯化钠-柠檬酸水溶液进行梯度浸泡，第一梯度为氯化钠同柠檬酸的质量比为1：0.5，浸泡2h，第二梯度氯化钠同柠檬酸的质量比为2：0.5，浸泡2h后，开始缓慢滴加浓度为0.20g/ml的碳酸氢钙水溶液（碳酸氢钙同柠檬酸的摩尔比为3：2），滴加完成后，继续浸泡3h，浸泡完成后过滤，去离子水清洗鱼皮，将鱼皮晾干表面水分后，每1g鳕鱼皮中加入10ml7g/ml的乙酸溶液及占鳕鱼皮质量0.3%的藻朊酸钠进行溶胀12h，打浆，调节ph为7.5，得鱼皮浆备用；（2）将鱼皮浆加入1000u/g木瓜蛋白酶及占鱼浆质量0.25%的角鲨烯，在38-42℃的温度下，酶解2.5，酶解结束后灭酶，离心后取上清液，将上清液进行超滤后冷冻干燥即可。对比例1（1）将鳕鱼皮清洗干净后，加入质量浓度为0.6%的氢氧化钠水溶液脱脂3h，然后每1g加入20ml质量浓度为10%氯化钠-柠檬酸水溶液进行梯度浸泡，第一梯度为氯化钠同柠檬酸的质量比为1：0.3，浸泡2h，第二梯度氯化钠同柠檬酸的质量比为2：0.3，浸泡5h，浸泡结束后过滤，去离子水清洗鱼皮，将鱼皮晾干表面水分后，每1g鳕鱼皮中加入10ml7g/ml的乙酸溶液及占鳕鱼皮质量0.6%的藻朊酸钠进行溶胀12h，打浆，调节ph为7.5，得鱼皮浆备用；（2）将鱼皮浆加入1200u/g木瓜蛋白酶及占鱼浆质量0.2%的角鲨烯，在38-42℃的温度下，酶解2.5，酶解结束后灭酶，离心后取上清液，将上清液进行超滤后冷冻干燥即可。对比例2（1）将鳕鱼皮清洗干净后，加入质量浓度为0.6%的氢氧化钠水溶液脱脂3h，然后每1g加入20ml质量浓度为10%氯化钠-柠檬酸水溶液进行梯度浸泡，第一梯度为氯化钠同柠檬酸的质量比为1：0.3，浸泡2h，第二梯度氯化钠同柠檬酸的质量比为2：0.3，浸泡2h后，开始缓慢滴加碳酸氢钙水溶液（碳酸氢钙同柠檬酸的摩尔比为3：2），滴加完成后，继续浸泡3h，浸泡完成后过滤，去离子水清洗鱼皮，将鱼皮晾干表面水分后，每1g鳕鱼皮中加入10ml7g/ml的乙酸溶液进行溶胀12h，打浆，调节ph为7.5，得鱼皮浆备用；（2）将鱼皮浆加入1200u/g木瓜蛋白酶及占鱼浆质量0.2%的角鲨烯，在38-42℃的温度下，酶解2.5，酶解结束后灭酶，离心后取上清液，将上清液进行超滤后冷冻干燥即可。对比例3（1）将鳕鱼皮清洗干净后，加入质量浓度为0.6%的氢氧化钠水溶液脱脂3h，然后每1g加入20ml质量浓度为10%氯化钠-柠檬酸水溶液进行梯度浸泡，第一梯度为氯化钠同柠檬酸的质量比为1：0.3，浸泡2h，第二梯度氯化钠同柠檬酸的质量比为2：0.3，浸泡2h后，开始缓慢滴加碳酸氢钙水溶液（碳酸氢钙同柠檬酸的摩尔比为3：2），滴加完成后，继续浸泡3h，浸泡完成后过滤，去离子水清洗鱼皮，将鱼皮晾干表面水分后，每1g鳕鱼皮中加入10ml7g/ml的乙酸溶液及占鳕鱼皮质量0.6%的藻朊酸钠进行溶胀12h，打浆，调节ph为7.5，得鱼皮浆备用；（3）将鱼皮浆加入1200u/g木瓜蛋白酶，在38-42℃的温度下，酶解2.5，酶解结束后灭酶，离心后取上清液，将上清液进行超滤后冷冻干燥即可。对比例4（1）将鳕鱼皮清洗干净后，加入质量浓度为0.6%的氢氧化钠水溶液脱脂3h，然后每1g加入20ml质量浓度为10%氯化钠-柠檬酸水溶液进行梯度浸泡，（氯化钠同柠檬酸的质量比为1：0.3），浸泡4h，浸泡结束后开始缓慢滴加浓度为0.15g/ml的碳酸氢钙水溶液（碳酸氢钙同柠檬酸的摩尔比为3：2），滴加完成后，继续浸泡3h，浸泡完成后过滤，去离子水清洗鱼皮，将鱼皮晾干表面水分后，每1g鳕鱼皮中加入10ml7g/ml的乙酸溶液及占鳕鱼皮质量0.6%的藻朊酸钠进行溶胀12h，打浆，调节ph为7.5，得鱼皮浆备用；（2）将鱼皮浆加入1200u/g木瓜蛋白酶及占鱼浆质量0.2%的角鲨烯，在38-42℃的温度下，酶解2.5，酶解结束后灭酶，离心后取上清液，将上清液进行超滤后冷冻干燥即可。效果实施例（一）对实施例及对比例制备得到的胶原蛋白肽进行收率计算，计算公式如下：胶原蛋白肽收率（%）=总胶原蛋白肽质量/解冻后的鳕鱼皮质量×100%，同时对得到的胶原蛋白肽进行感官评价，感官评价小组是由本实验室经过系统感官培训的10名成员组成（年龄为25-38岁），对样品的腥味及苦味进行评价，评价标准为：苦腥味重，标记为1；苦腥味稍重，标记为2；苦腥味淡，标记为3；苦腥味很淡，标记为4；没有苦腥味，标记为5；具体结果见表1。表1收率（%）苦腥味值实施例118.445实施例218.164对比例116.283对比例217.112对比例315.734对比例417.583同时，按照gb/t22729进行胶原蛋白肽分子量检测，本发明制备的胶原蛋白肽其分子量分布83%集中在2000-3500道尔顿，其分子链短，更适合人体吸收。（二）将实施例及对比例制备的胶原蛋白肽作用于经lps诱导的changliver细胞，收集细胞，采用pbs清洗两次，细胞裂解液裂解细胞，离心后取上清液，采用试剂盒法检测细胞内外超氧化物歧化酶（sod）、丙二醛（mda）、过氧化氢酶（cat）及谷胱甘肽过氧化物酶（gsh-px）的活性，添加的胶原蛋白肽的浓度为5mg/ml，检测各组抗氧化酶活性，设置正常组作为空白对照组1，不加入胶原蛋白肽的lps组进行原始数据检测，具体结果见表1。表1sod（μmol/ml）mda（μmol/ml）cat（μmol/ml）gsh-px（μmol/ml）实施例137.32±2.1133.50±0.92320.25±18.98271.23±32.11实施例237.59±1.9934.02±0.81311.98±20.11269.94±28.41对比例135.21±3.0237.14±1.13243.67±19.09236.30±19.62对比例236.92±1.8635.27±1.58301.05±21.33260.58±25.27对比例334.28±2.3838.31±1.20239.87±20.54228.74±19.33对比例436.32±3.1235.62±1.08303.37±20.73245.69±27.13空白对照组41.33±8.2430.52±2.05448.69±20.69352.10±15.98lps组29.85±5.2541.17±1.39209.22±25.12128.97±9.17当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种以鳕鱼皮原料生产胶原蛋白肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将鳕鱼皮清洗干净后，加入氢氧化钠水溶液浸泡脱脂，然后加入梯度氯化钠-柠檬酸水溶液进行搅拌浸泡，每个梯度浸泡2h，第二梯度浸泡结束后开始缓慢滴加碳酸氢钙水溶液，滴加完成后，继续浸泡3h，浸泡完成后过滤，去离子水清洗鱼皮，将鱼皮晾干表面水分后，加入乙酸溶液及藻朊酸钠进行溶胀，打浆，调节ph为6.5-7.5，得鱼皮浆备用；
（2）将鱼皮浆加入木瓜蛋白酶及角鲨烯，进行酶解，酶解结束后灭酶，离心后取上清液，将上清液进行超滤后冷冻干燥即可。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述氢氧化钠水溶液的质量浓度为0.5-0.6%；所述脱脂时间为3-3.5h；所述鳕鱼皮同氯化钠-柠檬酸水溶液的料液比为1g：20-25ml；所述梯度氯化钠-柠檬酸水溶液具体为：第一梯度为氯化钠同柠檬酸的质量比为1：0.3-0.5，第二梯度氯化钠同柠檬酸的质量比为2：0.3-0.5；所述氯化钠在水溶液中的质量浓度为10%。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述碳酸氢钙水溶液的浓度为0.15-0.20g/ml；所述碳酸氢钙同柠檬酸的摩尔比为3：2。
4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，所述乙酸溶液的浓度为5-8g/ml；所述藻朊酸钠加入量占鳕鱼皮质量的0.3-0.6%；所述溶胀的时间为10-12h。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，所述木瓜蛋白酶的添加量为1000-1200u/g；所述角鲨烯的加入量占鱼浆质量的0.2-0.25%。
6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述酶解为在38-42℃的温度下，酶解2.5-3h。
技术总结本发明属于胶原蛋白肽制备技术领域，具体涉及一种以鳕鱼皮原料生产胶原蛋白肽的方法。该方法通过以下步骤实现：将鳕鱼皮清洗干净后，加入梯度氯化钠‑柠檬酸水溶液进行搅拌浸泡，滴加碳酸氢钙水溶液，继续浸泡，浸泡完成后过滤，去离子水清洗鱼皮，将鱼皮晾干表面水分后，加入乙酸溶液及藻朊酸钠进行溶胀，打浆，调节pH，得鱼皮浆备用；将鱼皮浆加入木瓜蛋白酶及角鲨烯，进行酶解，酶解结束后灭酶，离心后取上清液，将上清液进行超滤后冷冻干燥即可。本发明提供的提取方法，能够提高胶原蛋白体得率，且提取的胶原蛋白肽纯度高，分子量分布均匀，抗氧化能力强，无异味，最大程度的降低了水产品制备胶原蛋白肽的苦腥味，且大大降低了酶解时间。
技术研发人员：李江;潘美针;张格;邱学如;赵新辉
受保护的技术使用者：山东恒鑫生物科技有限公司
技术研发日：2021.01.14
技术公布日：2021.03.12
