本发明属于医药技术领域，具体涉及一种rgdfk抑制pdl1的检测方法及其在制备抗pdl1药物中的应用。
背景技术：
乳腺癌是一种恶性肿瘤，在女性群体中发病率很高。近年来，针对乳腺癌的治疗已经取得了显著的临床效果，治疗方式主要有手术、放疗和化疗，然后5年生存率普遍较低，特别是中晚期患者。随着肿瘤生物学和免疫学的发展，癌症免疫治疗已成为近年来肿瘤治疗领域的新研究热点，被喻为第四种肿瘤治疗模式，主要是指应用免疫学原理和方法，通过激活体内的免疫细胞和增强机体抗肿瘤免疫应答，特异性地清除肿瘤微小残留病灶、抑制肿瘤生长，打破免疫耐受的治疗方法。肿瘤免疫治疗就是要克服肿瘤免疫逃逸的机制，从而重新唤醒免疫细胞来清除癌细胞。一般地，肿瘤患者机体免疫反应处于抑制状态，一方面是由于体内细胞毒性t细胞相关抗原及辅助性t细胞不足，另一方面是肿瘤细胞产生的免疫抑制分子，导致免疫耐受。有研究显示，免疫检查点程序性死亡受体1（programmeddeath1，pd1）及其配体1（pdl1）参与形成肿瘤微环境，能显著抑制t细胞活性，促使肿瘤细胞逃避机体免疫系统的监视和杀伤。pd1是一种细胞表面受体，属于免疫球蛋白超家族，仅在活化的t淋巴细胞上表达。在结构上，成熟的pd1蛋白包含细胞外识别结构域、跨膜区以及细胞内尾部。功能上，pd1在抑制t细胞活性中起重要作用，具有两个磷酸化位点的尾部，分别是免疫受体酪氨酸抑制基序（immunoreceptortyrosine-basedinhibitionmotif，itim）和一个基于免疫受体酪氨酸的转换基序（immunoreceptortyrosine-basedswitchmotif，itsm），均负调节t细胞受体信号。
乳腺癌是危害女性身体健康最常见的恶性肿瘤，而转移是乳腺癌临床治疗失败的主要原因。上皮间质转化（epithelialmesenchymaltransformation，emt）是肿瘤转移的关键步骤，参与乳腺癌的发生、浸润等多个恶变过程。纤连蛋白（fibronectin，fn）是细胞外基质中一种功能性糖蛋白。临床数据研究表明，fn在正常成人乳腺组织中低表达，而在肿瘤基质中表达水平显著升高。整合素是一种位于细胞表明介导细胞内外信号传导的跨膜糖蛋白受体，fn可通过rgd位点与整合素受体结合调控细胞多种生理功能。
随着信号通路、细胞凋亡等分子生物学方法在肿瘤研究中的应用，乳腺癌分子靶点和靶向治疗逐渐成为抗乳腺癌研究的趋势和热点。鉴于传统治疗方法的局限性，免疫疗法以其高特异性和记忆性，对改善肿瘤患者的生存率和预后情况具有潜在作用。免疫检查点是阻碍机体免疫细胞抗肿瘤的主要原因，也是发生免疫逃逸的罪魁祸首。目前针对免疫检查点，主要是采用单克隆抗体抑制剂的方法来提高抗肿瘤的效果。pdl1和pdl2是目前肿瘤免疫治疗，特别是免疫检查点阻断疗法的核心靶点。抑制pdl1和pdl2功能可以激活t细胞的抗肿瘤免疫，杀伤肿瘤细胞。cyclo(-rgdfk)是整合素αvβ3高效选择性环肽类抑制剂，rgdfk的抗肿瘤作用已在多种肿瘤治疗中得到广泛开展，本发明旨在研究rgdfk在制备抗pd-l1药物中的应用，为cyclo-rgdfk的临床实践提供更多的理论依据。
技术实现要素：
本发明要解决的技术问题是提供一种rgdfk抑制pdl1的检测方法及其在制备抗pdl1药物中的应用，为cyclo-rgdfk的临床实践提供更多的理论依据。
为解决上述技术问题，本发明的实施例提供一种rgdfk抑制pdl1的检测方法，包括如下步骤：
（1）探究肿瘤细胞表面pdl1分子的表达调控机制：利用小分子抑制剂处理肿瘤细胞，分别通过基因和蛋白水平来表征pdl1的表达；
（2）检测肿瘤细胞中erk的磷酸化水平；
（3）验证rgdfk对肿瘤细胞pdl1的抑制作用：用rgdfk抑制剂处理肿瘤细胞后，用免疫荧光技术检测细胞中pdl1的蛋白表达水平。
其中，步骤（1）中，小分子抑制剂包括整合素αvβ3的抑制剂rgdfk。
其中，所述肿瘤细胞包括乳腺癌细胞系sum159和mda-mb-231。
其中，所述整合素αvβ3的抑制剂rgdfk的处理浓度为0、2和5μm。
其中，步骤（1）中采用westernblot方法和实时定量pcr方法检测pdl1蛋白水平和基因水平的表达。
其中，步骤（1）中利用小分子抑制剂处理肿瘤细胞的步骤为：
（1-1）复苏细胞：从-80℃中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，摇动令其尽快融化；
（1-2）从37℃水浴中取出冻存管，加入1ml的完全培养基，混匀；
（1-3）1000rpm离心3min，弃去上清液；
（1-4）加入含10
