本发明属于生物医药领域，涉及一种生物标志物，具体而言，涉及生物标志物rp11-575f12.2在制备诊断和治疗口腔鳞癌制剂中的应用。
背景技术：
口腔鳞状细胞癌(oralsquamouscellcarcinoma，oscc)，简称口腔鳞癌，是口腔颌面部发生率最高的恶性肿瘤，在口腔恶性疾病中，其比例高达90％左右，具有局部浸润性强、颈部淋巴结转移率高及易复发等特点，预后较差。近年来，口腔鳞癌患者术后5年存活率始终在60％左右，并未随着诊疗技术的改进而有明显的提高。临床上，当患者出现疼痛、溃疡、出血、肿块等症状而就诊时，往往已经发生了较大面积的浸润生长甚至局部及远处的转移，此阶段采取手术治疗一般会造成患者面容及口腔功能损害，严重影响其进食、言语、社交等，给患者和其家庭带来了极大的影响。
若口腔鳞癌患者能在发病初期得到及时诊断，其术后5年存活率可达到80％～90％，由于发病初期肿瘤浸润面积小，手术切除范围小，对患者的影响也较小。因此，做到早发现、早诊断、早治疗是改善口腔鳞癌预后的重要手段。目前口腔鳞癌主要采用组织活检进行确诊，但由于肿瘤病变具有不均一性的特点，活检切取的部分组织并不能完全反映病变的性质，甚至影响肿瘤的检出，导致出现漏诊，此外，侵入性检查的组织活检更适用于高度怀疑的恶性病变，而在癌前病变等患者的早期诊断方面，因为其检查过程中造成的创伤，会造成患者依从性的下降，从而错过最佳的预防期或治疗期。因此，利用现代生物学方法，进行无创性的早期筛查和诊断的开发，对改善口腔鳞癌的发病率高、预后差的现状至关重要。
近年来，关于口腔癌的早期无创诊断取得了丰富的研究成果。但各种方法均存在一定的不足，例如：荧光素检测利用荧光液在组织内的扩散程度判定病变的良恶性程度，荧光液注射进入病变区域后需立即在暗室中观查，检测条件临床上无法完全实现，且充血部位血红蛋白的增加会增强对光的吸收，导致荧光缺失，易造成假阳性；活体组织染色法对组织进行染色以达到显示癌变组织部位的目的，但染料对上皮异常增生组织、有丝分裂活跃的细胞及粗糙或角化组织亦有亲和力，其假阳性率可达到42.2％。因此，寻找出一种稳定可靠且容易获取的生物标志物分子进行口腔鳞癌的早期诊断和后期治疗具有重要的意义。
技术实现要素：
针对目前现有技术存在的不足，本发明研究了在口腔鳞癌组织和癌旁组织中呈现差异表达的基因，并通过进一步的细胞实验探究了差异表达基因对口腔鳞癌细胞的影响，从而为口腔鳞癌的诊断和治疗提供了检测和靶向位点，同时为揭示口腔鳞癌的发病机制提供了理论基础。
本发明的上述目的通过以下技术方案得以实现：
本发明的第一方面提供了生物标志物的检测试剂在制备诊断口腔鳞癌的产品中的应用。
进一步，所述生物标志物为rp11-575f12.2。
进一步，所述检测试剂包括用于检测rp11-575f12.2基因和/或其表达产物的试剂；
优选地，所述试剂选自：特异性扩增rp11-575f12.2基因的引物、特异性识别rp11-575f12.2基因的探针；
更优选地，所述特异性扩增rp11-575f12.2基因的引物序列如seqidno.1～2所示。
进一步，所述的引物序列是根据rp11-575f12.2基因的转录本enst00000541419.1、enst00000535022.1设计的。
本发明的第二方面提供了一种诊断口腔鳞癌的产品。
进一步，所述产品包括检测rp11-575f12.2基因表达水平的试剂。
进一步，所述产品包括试剂盒、芯片或试纸条。
进一步，所述试剂包括通过逆转录pcr、实时定量pcr、原位杂交、基因芯片检测rp11-575f12.2表达水平的试剂；
优选地，所述通过逆转录pcr和/或实时定量pcr检测rp11-575f12.2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增rp11-575f12.2的引物；
优选地，所述通过原位杂交和/或基因芯片检测rp11-575f12.2表达水平的试剂包括与rp11-575f12.2的核酸序列杂交的探针。
本发明的第三方面提供了rp11-575f12.2在制备治疗口腔鳞癌的药物组合物中的应用。
进一步，所述药物组合物包括抑制rp11-575f12.2表达的试剂；
优选地，所述抑制rp11-575f12.2表达的试剂为双链分子；
更优选地，所述双链分子包括sirna；
最优选地，所述sirna的序列如seqidno.11～12所示。
进一步，所述的sirna的序列是根据rp11-575f12.2基因的转录本enst00000541419.1、enst00000535022.1设计的。
本发明的第四方面提供了一种药物组合物。
进一步，所述药物组合物包括抑制rp11-575f12.2表达的试剂；
优选地，所述抑制rp11-575f12.2表达的试剂为双链分子；
更优选地，所述双链分子包括sirna；
最优选地，所述sirna的序列如seqidno.11～12所示。
进一步，所述的sirna的序列是根据rp11-575f12.2基因的转录本enst00000541419.1、enst00000535022.1设计的。
进一步，所述药物组合物还可以包括有效量的用于口腔鳞癌治疗的药物及药学上可接受的载体和/或辅料。
进一步，所述药物组合物与用于口腔鳞癌治疗的药物可以制备成单独的制剂联合应用，也可将两者制备成一种制剂以组合物的形式应用。
进一步，所述载体和/或辅料包括药学上可接受的载体、稀释剂、填充剂、结合剂及其它赋形剂，这依赖于给药方式及所设计的剂量形式。本领域技术人员已知的治疗惰性的无机或有机的载体包括(但不限于)乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、植物油、蜡、脂肪、多羟基化合物(例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油)，各种防腐剂、润滑剂、分散剂、矫味矫臭剂、湿润剂、甜味剂、香味剂、乳化剂、悬浮剂、保存剂、抗氧化剂、着色剂、稳定剂、盐、缓冲液，诸如此类的也可加入其中，适合的药学上可接受的载体和/或辅料在remington'spharmaceuticalsciences(19thed.,1995)中有详细的记载，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味，在这种药物组合物中可以使用的制剂可以是其原始化合物本身的形式，或任选地使用其药物学可接受的盐的形式。如此配制的药物组合物根据需要可选择本领域技术人员已知的任何适当的方式把药物进行给药，使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明的药物施用于人。
本发明的所述的药物组合物的适合的给药剂量根据制剂化方法、给药方式、患者的年龄、体重、性别、病态、饮食、给药时间、给药途径、排泄速度及反应灵敏性之类的因素而可以进行多种处方，熟练的医生通常能够容易地决定处方及处方对所希望的治疗或预防有效的给药剂量。
本发明的第五方面提供了rp11-575f12.2在筛选治疗口腔鳞癌的候选药物中的应用。
进一步，所述应用包括一种筛选预防或治疗口腔鳞癌的候选药物的方法。
本发明的第六方面提供了一种筛选预防或治疗口腔鳞癌的候选药物的方法。
进一步，所述方法包括如下步骤：
(1)用待测试物质处理表达或含有rp11-575f12.2基因的体系；
(2)检测所述体系中rp11-575f12.2基因的表达；
(3)选择可降低rp11-575f12.2基因表达水平的测试物质为候选药物。
进一步，所述体系选自：细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体系、器官体系或动物体系。
进一步，所述测试物质包括但不限于：针对rp11-575f12.2基因或其上游或下游基因设计的干扰分子、核酸抑制物、小分子化合物等。
进一步，步骤(3)中所述的选择的测试物质为与在该测试物质不存在时检测到的表达水平相比显著降低rp11-575f12.2表达水平的测试物质。
除非另有定义，本发明上下文中的所有科技术语具有本领域普通技术人员所理解的相同含义。此外，对部分术语解释如下。
本文中所使用的“生物标志物”及“标志物”可混用，以便于指称个体中正常或异常进展的指征或个体中疾病或其他状态的指征或表现这些的靶分子。更详细地，“生物标志物”及“标志物”为正常或异常，以及若是异常，则为与慢性或急性的特定生理学状态或进展的存在相关的解剖学、生理学、生物化学或分子学参数。生物标志物可通过包括实验室检测和医学成像的多种方法来进行检测及测定。
本文中使用的术语“有效量”，是指具有治疗效果的量或在治疗对象中产生治疗效果所需要的量。例如，药物治疗上或药学上有效量是指产生需要的治疗效果所需要的药物的量，治疗效果可以通过临床试验结果、模型动物研究和/或体外研究的结果来反映。药学上有效量取决于几个因素，包括但不限于治疗对象的特征因素(如身高、体重、性别、年龄和用药史)、罹患疾病的严重程度。
本文中使用的术语“药学上可接受载体和/或辅料”，是指这样的载体和/或辅料，其并不引起对生物体的显著刺激，并且并不废除所给予化合物的生物活性和性质。
本文中使用的术语“赋形剂”，是指惰性物质，其被加入药物组合物用来进一步促进活性成分的给予。赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖和各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
在本发明的实施例中，本发明经过深入的研究，首次发现了口腔鳞癌组织中rp11-575f12.2基因的表达显著高于正常的口腔粘膜组织，并且用相关的细胞实验证明了rp11-575f12.2基因在口腔鳞癌细胞中也呈现高表达，下调rp11-575f12.2基因的表达水平可抑制口腔鳞癌细胞的增殖和侵袭，提示rp11-575f12.2基因可作为口腔鳞癌诊断和治疗的靶标应用于临床。
目前已经公开rp11-575f12.2基因存在两个转录本，序列分别如enst00000541419.1、enst00000535022.1所示，rp11-575f12.2基因位于12号染色体上，ensembleid为ensg00000256001。
本发明的优点和有益效果如下：
(1)本发明首次证实了rp11-575f12.2可作为口腔鳞癌诊断和治疗的生物标志物，rp11-575f12.2在口腔鳞癌组织中的表达量显著高于癌旁组织。
(2)本发明通过检测发现rp11-575f12.2在口腔鳞癌中特异性高表达，检测准确度高，为临床提供了一种更加准确、快速的检测方法。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1是差异表达基因在口腔鳞癌组织和癌旁组织中差异表达图；
图2是cck-8细胞增殖实验检测差异表达基因对口腔鳞癌细胞增殖活性影响的结果图；
图3是细胞迁移实验检测差异表达基因对口腔鳞癌细胞迁移能力影响的结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。本领域的普通技术人员可以理解为：在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照厂商所建议的条件实施检测。
实施例1筛选与口腔鳞癌相关的基因标志物
1、样品收集
分别收集5例口腔鳞癌组织和癌旁组织，均经病理学诊断证实，所有患者术前未接受任何形式的治疗，手术切下的样本于液氮中冻存。上述所有标本的取得均通过组织伦理委员会的同意。
2、组织rna的提取
取出冻存于液氮中的癌组织和癌旁组织样本约50mg，把组织样本放入已预冷的研钵中进行研磨，至无大颗粒组织时转移至1.5mlep管中，按照试剂盒中的说明书提取分离rna。具体提取步骤如下：
(1)加入1mltrizol，室温放置5min；
(2)加入氯仿0.2ml，用力振荡离心管，充分混匀，室温下放置5-10min；
(3)12000rpm，4℃的条件下，离心15min后，将上层水相轻柔地移到另一新的ep管中(注意不要吸到两层水相之间的蛋白物质)，加入等体积的-20℃预冷的异丙醇，充分颠倒混匀，置于冰上10min；
(4)12000rpm，4℃的条件下，离心15min后，小心弃掉上清液，加入1ml75％depc乙醇洗涤沉淀(4℃保存)，振荡混匀，4℃，12000rpm离心5min；
(5)弃去乙醇上清液体，室温下放置5min，加入depc水溶解沉淀；
(6)定量后使用或冻存于-80℃冰箱备用。
3、总rna的定量与纯度分析
将提取的rna进行琼脂糖凝胶电泳，利用nanodrop2000对所提取的rna的浓度和纯度进行测定，琼脂糖凝胶电泳检测rna的完整性，agilent2100测定rin值。单次建库要求rna总量5μg，浓度≥200ng/μl。
4、构建cdna文库
使用epicentre的ribo-zero试剂盒除去总rna中的核糖体rna；对完整的rna序列，利用金属离子进行随机打断，将rna随机断裂成200bp左右的小片段；采用illuminatruseqtmrnasampleprepkit进行cdna文库的构建。
5、测序
使用illuminax-ten测序平台，进行2*150bp测序。
6、高通量转录组测序数据分析
删除不易检测到的lncrna，使用r-3.3.3工具中的deseq2对reads数进行差异表达分析，差异表达lncrna筛选标准：fdr<0.05，abs(log2fc)>2。
7、实验结果
结果显示，与癌旁组织相比，rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1在口腔鳞癌组织中的表达水平显著上调。
实施例2qpcr验证rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1的差异表达
1、组织收集
利用实施例1中所述的收集方法收集60例口腔鳞癌的组织样本及其对应的癌旁组织样本，对rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1进行大样本差异表达基因的验证。
2、组织rna的提取
提取步骤同实施例1。
3、qpcr实验
(1)逆转录反应
采用fastqμantcdna第一链合成试剂盒(货号：kr106)进行lncrna反转录，首先去除基因组dna反应，在试管中加入5×gdnabμffer2.0μl，总rna1μg，加rnasefreeddh2o使总体积至10μl，水浴锅中42℃加热3min。
将10×fastrtbμffer2.0μl，rtenzymemix1.0μl，fq-rtprimermix2.0μl，rnasefreeddh2o5.0μl，混合后加入上述试管中一起混合共20μl，水浴锅中42℃加热15min，95℃加热3min。
(2)引物的设计与制备
根据genebank中rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1基因和gapdh基因的编码序列设计qpcr扩增引物，在进行rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1的引物设计时，选择不同转录产物序列的共同序列进行设计，具体引物序列如下：
rp11-575f12.2基因：
正向引物为5’-ttagaagaagaaccattg-3’(seqidno.1)
反向引物为5’-tcctattcaagaccataa-3’(seqidno.2)
rp11-54a9.1基因：
正向引物为5’-gactgacactgcttgatt-3’(seqidno.3)
反向引物为5’-tccttcactgtaagagttatc-3’(seqidno.4)
rp11-973h7.1基因：
正向引物为5’-ttgccattctaatgtaag-3’(seqidno.5)
反向引物为5’-actcctattatctgtatgt-3’(seqidno.6)
af131217.1基因：
正向引物为5’-attctcgttactccttgt-3’(seqidno.7)
反向引物为5’-tgttgcctattcataagac-3’(seqidno.8)
gapdh基因：
正向引物为5’-ctctggtaaagtggatattgt-3’(seqidno.9)
反向引物为5’-ggtggaatcatattggaaca-3’(seqidno.10)
(3)实时定量pcr反应
用superrealpremixplus(sybrgreen)(货号：fp205)，进行扩增。
采用20μl反应体系：2×superrealpremixplus10μl，正反向引物(10μm)各0.6μl，5×roxreferencedye△2μl，dna模板2μl，灭菌蒸馏水4.8μl。每个样本设置3个平行管，所有扩增反应均重复三次以上以保证实验结果的可靠性。
扩增程序分别为：
rp11-575f12.2基因：95℃15min，(95℃10s，50℃30s，72℃32s)×45个循环；
rp11-54a9.1基因：95℃15min，(95℃10s，54℃30s，72℃32s)×40个循环；
rp11-973h7.1基因：95℃15min，(95℃10s，56℃30s，72℃32s)×39个循环；
af131217.1基因：95℃15min，(95℃10s，52℃30s，72℃32s)×45个循环。
4、统计学分析
采用统计学软件spss20.0进行统计分析，计量资料以均数±标准差(mean±sd)表示。两组间比较采用配对t检验，三组及以上采用单因素方差分析，多重比较采用lsd-t检验。所有实验重复三次，以p<0.05为差异具有统计学意义。
5、实验结果
qpcr的结果见图1，结果显示，与癌旁组织相比，口腔鳞癌组织中rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1的表达量显著上调，差异具有统计学意义(p<0.05)，表明rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1可作为分子标志物用于口腔鳞癌的诊断和治疗。
实施例3rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1的沉默检测和功能验证
1、细胞培养
将液氮内保存的人口腔鳞癌scc-15细胞取出后进行复苏接种于dmem培养基中，在37℃、5％co2恒温的培养箱中培养细胞。24h后细胞呈贴壁生长即复苏成功，每隔1-2d换液1次，使用胰蛋白酶消化并制成细胞悬液用于实验。
2、细胞转染
将细胞按2×105/孔接种到六孔细胞培养板中，在37℃、5％co2培养箱中进行培养。将处于增殖对数期细胞(约80％左右)，弃去培养基后，pbs清洗2次，加入2mldmem于培养箱内饥饿培养1h，使用脂质体转染试剂2000(invitrogen公司)进行转染，具体操作按照说明书进行。
将实验分为三组：空白对照组(scc-15)、阴性对照组(sirna-nc)和实验组(sirna组)，其中阴性对照组sirna与rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1的序列无同源性。
其中，针对rp11-575f12.2的sirna序列如下：
正义链为5’-uuguaaaagaauucuuugcuc-3’(seqidno.11)
反义链为5’-gcaaagaauucuuuuacaaag-3’(seqidno.12)
针对rp11-54a9.1的sirna序列如下：
正义链为5’-acaaucugugcaauuacaguu-3’(seqidno.13)
反义链为5’-cuguaauugcacagauuguuc-3’(seqidno.14)
针对rp11-973h7.1的sirna序列如下：
正义链为5’-uucaaaagugaaacuacagac-3’(seqidno.15)
反义链为5’-cuguaguuucacuuuugaacc-3’(seqidno.16)
针对af131217.1的sirna序列如下：
正义链为5’-aucuuagacuggguaaaucau-3’(seqidno.17)
反义链为5’-gauuuacccagucuaagauau-3’(seqidno.18)
3、qpcr检测rp11-575f12.2、rp11-54a9.1、rp11-973h7.1和af131217.1基因的转录水平
各组细胞转染培养48h后，使用trizol法提取细胞总rna，按照实施例2中的方法进行逆转录以及实时定量pcr检测。
4、细胞增殖实验
将转染24h的阴性对照组与实验组细胞常规方法消化、离心，弃上清液，加入1ml完全培养基重悬细胞，吹打混匀，以每孔3000个细胞接种至96孔板，补充完全培养基至100μl；在孔板最外周一圈内加入100mldepc水，将96孔板置于恒温培养箱内培养。培养48h后加入含有10％的cck-8的100μl培养基，继续于培养箱内培养1h后，于酶标仪测定450nm吸光度，统计实验数据并记录。
5、细胞迁移实验
将transwell小室置于24孔板内，上室内加入200μldmem溶液，置于培养箱内，水化1h；按照每小室2×104个细胞进行铺板，将上室液体补充至200μl，吹打混匀，下室加入700μl完全培养基，继续于培养箱内培养36h；取出小室，弃去上室及下室内的培养基，用棉签轻柔擦拭去上室内残留的培养基及细胞，pbs清洗小室，摇床5min，弃pbs；下室内加入500μl4％多聚甲醛，室温固定30min，弃固定液，pbs清洗3次，摇床5min，弃pbs；将小室置于通风橱内，风干30min；下室内加入500μl制备好的0.1％结晶紫溶液，排除气泡，静止30min；弃结晶紫溶液，使用pbs清洗3次，摇床5min，弃pbs，用干棉签轻柔擦去上室内多余液体，将小室置于显微镜下，进行细胞数量统计并记录。
6、统计学分析
采用统计学软件spss20.0进行统计分析，计量资料以均数±标准差(mean±sd)表示。两组间比较采用配对t检验，三组及以上采用单因素方差分析，多重比较采用lsd-t检验。所有实验重复三次，以p<0.05为差异具有统计学意义。
7、实验结果
转染结果显示，以空白对照组rp11-575f12.2的表达水平作为参比设为1，相比空白对照组rp11-575f12.2的表达量(相对表达量为1)与转染sirna-nc阴性对照组rp11-575f12.2的表达量(相对表达量为0.948±0.026)，转染sirna实验组的rp11-575f12.2的表达量(相对表达量为0.541±0.085)显著下调，差异具有统计学意义(实验组vs空白对照组，p<0.05；实验组vs阴性对照组，p<0.05)，而sirna-nc组和空白对照组之间没有显著的差异(p>0.05)。
转染结果显示，以空白对照组rp11-54a9.1的表达水平作为参比设为1，相比空白对照组rp11-54a9.1的表达量(相对表达量为1)与转染sirna-nc阴性对照组rp11-54a9.1的表达量(相对表达量为0.948±0.026)，转染sirna实验组的rp11-54a9.1的表达量(相对表达量为0.355±0.027)显著下调，差异具有统计学意义(实验组vs空白对照组，p<0.05；实验组vs阴性对照组，p<0.05)，而sirna-nc组和空白对照组之间没有显著的差异(p>0.05)。
转染结果显示，以空白对照组rp11-973h7.1的表达水平作为参比设为1，相比空白对照组rp11-973h7.1的表达量(相对表达量为1)与转染sirna-nc阴性对照组rp11-973h7.1的表达量(相对表达量为0.948±0.026)，转染sirna实验组的rp11-973h7.1的表达量(相对表达量为0.743±0.096)显著下调，差异具有统计学意义(实验组vs空白对照组，p<0.05；实验组vs阴性对照组，p<0.05)，而sirna-nc组和空白对照组之间没有显著的差异(p>0.05)。
转染结果显示，以空白对照组af131217.1的表达水平作为参比设为1，相比空白对照组af131217.1的表达量(相对表达量为1)与转染sirna-nc阴性对照组af131217.1的表达量(相对表达量为0.948±0.026)，转染sirna实验组的af131217.1的表达量(相对表达量为0.131±0.053)显著下调，差异具有统计学意义(实验组vs空白对照组，p<0.05；实验组vs阴性对照组，p<0.05)，而sirna-nc组和空白对照组之间没有显著的差异(p>0.05)。
cck-8细胞增殖活性结果见图2，结果显示转染sirna的实验组的od450(0.634±0.064)明显低于转染sirna-nc的对照组(1.236±0.051)，且p<0.05，表明本研究的rp11-575f12.2在口腔鳞癌细胞的增殖中起着重要的作用，改变rp11-575f12.2的表达水平可改变口腔鳞癌细胞的增殖能力。
cck-8细胞增殖活性结果见图2，结果显示转染sirna的实验组的od450(0.506±0.038)明显低于转染sirna-nc的对照组(1.236±0.051)，且p<0.05，表明本研究的rp11-54a9.1在口腔鳞癌细胞的增殖中起着重要的作用，改变rp11-54a9.1的表达水平可改变口腔鳞癌细胞的增殖能力。
cck-8细胞增殖活性结果见图2，结果显示转染sirna的实验组的od450(0.820±0.110)明显低于转染sirna-nc的对照组(1.236±0.051)，且p<0.05，表明本研究的rp11-973h7.1在口腔鳞癌细胞的增殖中起着重要的作用，改变rp11-973h7.1的表达水平可改变口腔鳞癌细胞的增殖能力。
cck-8细胞增殖活性结果见图2，结果显示转染sirna的实验组的od450(0.336±0.051)明显低于转染sirna-nc的对照组(1.236±0.051)，且p<0.05，表明本研究的af131217.1在口腔鳞癌细胞的增殖中起着重要的作用，改变af131217.1的表达水平可改变口腔鳞癌细胞的增殖能力。
细胞迁移实验的结果见图3，结果显示转染sirna的实验组的迁移细胞数(69±6.245)明显低于转染sirna-nc的对照组(111±5.568)，且p<0.05，表明本研究的rp11-575f12.2在口腔鳞癌细胞的迁移中起着重要的作用，改变rp11-575f12.2的表达水平可改变口腔鳞癌细胞的迁移能力。
细胞迁移实验的结果见图3，结果显示转染sirna的实验组的迁移细胞数(55±14.107)明显低于转染sirna-nc的对照组(111±5.568)，且p<0.05，表明本研究的rp11-54a9.1在口腔鳞癌细胞的迁移中起着重要的作用，改变rp11-54a9.1的表达水平可改变口腔鳞癌细胞的迁移能力。
细胞迁移实验的结果见图3，结果显示转染sirna的实验组的迁移细胞数(84.333±4.163)明显低于转染sirna-nc的对照组(111±5.568)，且p<0.05，表明本研究的rp11-973h7.1在口腔鳞癌细胞的迁移中起着重要的作用，改变rp11-973h7.1的表达水平可改变口腔鳞癌细胞的迁移能力。
细胞迁移实验的结果见图3，结果显示转染sirna的实验组的迁移细胞数(35.667±8.622)明显低于转染sirna-nc的对照组(111±5.568)，且p<0.05，表明本研究的af131217.1在口腔鳞癌细胞的迁移中起着重要的作用，改变af131217.1的表达水平可改变口腔鳞癌细胞的迁移能力。
上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。
序列表
<110>湖南中南大学湘雅口腔医院
<120>rp11-575f12.2在制备诊断和治疗口腔鳞癌制剂中的应用
<141>2020-11-27
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1.生物标志物的检测试剂在制备诊断口腔鳞癌的产品中的应用，其特征在于，所述生物标志物为rp11-575f12.2。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测试剂包括用于检测rp11-575f12.2基因和/或其表达产物的试剂；
优选地，所述试剂选自：特异性扩增rp11-575f12.2基因的引物、特异性识别rp11-575f12.2基因的探针；
更优选地，所述特异性扩增rp11-575f12.2基因的引物序列如seqidno.1～2所示。
3.一种诊断口腔鳞癌的产品，其特征在于，所述产品包括检测rp11-575f12.2基因表达水平的试剂。
4.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述产品包括试剂盒、芯片或试纸条。
5.根据权利要求3所述的产品，其特征在于，所述试剂包括通过逆转录pcr、实时定量pcr、原位杂交、基因芯片检测rp11-575f12.2表达水平的试剂；
优选地，所述通过逆转录pcr和/或实时定量pcr检测rp11-575f12.2表达水平的试剂至少包括一对特异性扩增rp11-575f12.2的引物；
优选地，所述通过原位杂交和/或基因芯片检测rp11-575f12.2表达水平的试剂包括与rp11-575f12.2的核酸序列杂交的探针。
6.rp11-575f12.2在制备治疗口腔鳞癌的药物组合物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述药物组合物包括抑制rp11-575f12.2表达的试剂；
优选地，所述抑制rp11-575f12.2表达的试剂为双链分子；
更优选地，所述双链分子包括sirna；
最优选地，所述sirna的序列如seqidno.11～12所示。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括抑制rp11-575f12.2表达的试剂；
优选地，所述抑制rp11-575f12.2表达的试剂为双链分子；
更优选地，所述双链分子包括sirna；
最优选地，所述sirna的序列如seqidno.11～12所示。
9.rp11-575f12.2在筛选治疗口腔鳞癌的候选药物中的应用。
10.一种筛选预防或治疗口腔鳞癌的候选药物的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
(1)用待测试物质处理表达或含有rp11-575f12.2基因的体系；
(2)检测所述体系中rp11-575f12.2基因的表达；
(3)选择可降低rp11-575f12.2基因表达水平的测试物质为候选药物。
技术总结