本发明涉及4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯的新用途，本发明具体为4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯在制备治疗泪液分泌不足所致眼部炎症损伤的眼科外用制剂中的用途。
背景技术：
干眼症，又称干性角膜结膜炎，是指由于泪液的质或量的异常或泪液液体动力学异常引起的眼部不适和眼表面损害的一类疾病的总称。临床表现为干涩感、烧灼感、异物感、痒感、畏光、眼红、视物模糊、视力波动及视疲劳等。严重的干眼还可引起角膜炎、角膜血管新生、角膜溃疡等。干眼症主要分为泪液不足型和蒸发过量型，睑板腺功能障碍、干燥综合症、维生素a缺乏症、过敏、怀孕、药物治疗都可引起干眼症的发生。随着社会经济发展和人们生活水平提高，干眼症的发生率有升高且患病群体年轻化的趋势。
目前临床上治疗干眼症的药物分为抗菌类、激素类、人工泪液等，但由于眼部组织较为敏感，且易产生耐药性等问题，对干眼症的治疗效果十分有限。
东莨菪碱氢溴酸盐是一种具有较强外周作用的抗胆碱药，能够阻断m胆碱受体，抑制腺体的分泌[1]。通过皮下注射东莨菪碱诱导大鼠泪液分泌减少，可建立稳定持久的泪液缺乏型干眼症，是公认的泪液生成不足型干眼症动物模型[2-3]。
s-腺苷同型半胱氨酸水解酶(s-adenosyl-l-homocysteinehydrolase,sahh)是一种细胞内广泛存在的酶，它催化水解s-腺苷同型半胱氨酸(s-adenosyl-l-homocysteine，adohcy)生成腺苷和同型半胱氨酸(hcy)。抑制sahh将导致细胞内adohcy的蓄积，从而对转甲基化反应产生反馈性抑制作用。根据对酶的抑制机制不同，sahh抑制剂分为三型，ⅰ型、ⅱ型和ⅲ型。ⅰ型、ⅱ型sahh抑制剂对酶活性抑制是不可逆的，由于sahh在体内广泛存在，不可逆地抑制此酶会产生毒副作用。ⅲ型sahh酶抑制剂对酶的抑制作用是可逆的，随着药物的活性作用减退，酶的活性可以恢复，因此其毒性作用较小。4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯就是一个ⅲ型sahh抑制剂，其细胞毒性低，4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯在治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，eae)、系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，sle)、银屑病(psoriasis,ps)等疾病动物模型上表现出良好的治疗作用。4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯具有如下的结构式：
目前尚未有4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯治疗由于泪液分泌不足所致眼部炎症损伤的应用和报道。
技术实现要素：
本发明人首次发现4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯对泪液分泌不足所致眼部炎症损伤的治疗作用，并由此完成本发明。
因此，本发明的目的是提供4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯在制备预防或治疗由泪液分泌不足所致眼部炎症损伤的眼科制剂(特别是眼科外用制剂)中的用途。
本发明人发现通过局部给药的方式，可以提高4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯的疗效和便捷性。
因此，根据一个方面，本发明提供了4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯在制备预防或治疗由泪液分泌不足所致眼部炎症损伤的眼科制剂(特别是眼科外用制剂)中的用途。
本发明中，所述由泪液分泌不足所致眼部炎症损伤包括但不限于，因疾病或用眼过度等原因引起的泪液分泌不足、角膜、结膜炎症损伤等眼科疾病。优选地，所述由泪液分泌不足所致眼部炎症损伤为干眼症，特别是泪液不足型干眼症。
本发明中，优选地，所述眼科制剂可以为本领域已知的各种剂型，包括但不限于滴眼液、眼用凝胶、眼用软膏等。
所述眼科制剂可以包括治疗有效量的4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯和一种或多种药学上可接受的常规辅料。所述药学上可接受的常规辅料可以为赋形剂、填充剂或稀释剂等。
如本文中所使用的，术语“治疗有效量”是指该数量具有治疗性的效果而可用于预防或治疗本文所述的特定疾病、病症或病状。例如，“治疗有效量”可指在接受治疗的个体上提供治疗性或所欲功效所需的数量。如本领域技术人员所知，治疗有效量会因为施用途径、赋形剂的使用以及与其他疗法共用时的可能性而有所变化。
本发明运用东莨菪碱氢溴酸盐诱导大鼠泪液分泌量不足的干眼症模型，研究发现了含有4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯的眼科外用制剂可以增加泪液分泌量，减小角膜炎症损伤和增加结膜杯状细胞数量，增加黏蛋白分泌，维持结膜屏障功能等，从而治疗大鼠泪液分泌不足导致的眼部疾病，具有良好的临床应用前景。
附图说明
图1显示实施例2中4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯治疗提高东莨菪碱诱导的大鼠泪液分泌量的结果。其中，图1a为显示治疗周期内各组大鼠泪液分泌量的图；图1b为显示治疗第0天的各组大鼠泪液分泌量的图；
图1c为显示治疗第3天的各组大鼠泪液分泌量的图；图1d为显示治疗第5天的各组大鼠泪液分泌量的图；图1e为显示治疗第7天的各组大鼠泪液分泌量的图。其中，各组与模型组比较*＝p<0.05，**＝p<0.01，***＝p<0.001。
图2显示实施例2中4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯缓解东莨菪碱诱导的大鼠角膜损伤的结果。其中，图2a为显示治疗第3天的各组大鼠角膜荧光素钠染色损伤评分的图；图2b为显示第5天的各组大鼠角膜荧光素钠染色损伤评分的图；图2c为显示治疗第7天的各组大鼠角膜荧光素钠染色损伤评分的图。其中，各组与模型组比较*＝p<0.05，**＝p<0.01，***＝p<0.001。
图3a-c显示实施例2中4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯缓解东莨菪碱诱导的大鼠角膜损伤代表图。其中，图3a为治疗第3天裂隙灯下观察大鼠角膜荧光素钠染色的图像；图3b为治疗第5天裂隙灯下观察大鼠角膜荧光素钠染色的图像；图3c为治疗第7天裂隙灯下观察大鼠角膜荧光素钠染色的图像。
图4为显示实施例2中治疗7天后，取大鼠结膜组织进行过碘酸希夫(periodicacidschiff,pas)染色，并对结膜杯状细胞计数的结果的图。其中，各组与模型组比较*＝p<0.05，**＝p<0.01，***＝p<0.001。
图5为显示实施例2中取大鼠结膜组织进行过碘酸希夫(pas)染色结果的图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式进一步说明本发明。在此提供的实施例仅用于说明或解释本发明的实施方式，而不意图限制发明的保护范围。
实施例1.4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯滴眼制剂的制备
4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯可以采用本领域中已知的合成方法制备，例如，可参照cn1014568680b制备。
本实施例所述的眼科制剂，为滴眼液，以100ml计，含4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯1g或0.25g或0.0625g、氯化钠0.8g、氯化钾0.02g、十二水合磷酸氢二钠0.2924g、磷酸二氢钾0.02g，ph7.37。
制备方法：
取氯化钠8g、氯化钾0.2g、十二水合磷酸氢二钠2.924g、磷酸二氢钾0.2g，溶于1l蒸馏水中，室温，充分混匀，制得ph7.39溶液，为溶液a；
取4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯1g或0.25g或0.0625g，加入100ml溶液a中，室温，静置，充分溶解后无菌滤膜过滤，制得含量分别为1w/v％、0.25w/v％、0.0625w/v％的4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯滴眼液，ph7.37。
实施例2.实施例1制备的4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯滴眼液对东莨菪碱诱导的大鼠泪液分泌不足所致眼部炎症损伤的治疗作用
1.主要实验材料及来源
(1)动物：spf级sd大鼠，雌性，体重120-150g，由上海杰思捷实验动物有限公司提供，合格证编号：20180004003956。
(2)主要实验药物及试剂
4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯，性状：白色粉末，按实施例1制成滴眼液。
试剂：东莨菪碱氢溴酸盐，购自国药集团化学试剂有限公司，cas：6533-68-2，生产批号：#f1713061。以无菌水配制成1.5w/v％、1.75w/v％浓度。玻璃酸钠滴眼液，由参天制药株式会社能登工厂生产，参天制药(中国)有限公司分包装，进口药品注册证小包装证号：h20130583，进口药品注册证大包装证号：h20130584，分包装批准文号：国药准字j20130150。泪液检测酚红棉线，由天津晶明新技术开发有限公司生产，生产许可证号：津食药监械生产许20100040号，注册证号：津食药监械(准)字2014第2410002号，生产批号：20171002。荧光素钠注射液，由广州白云山明兴制药有限公司生产，国药准字h44023401，产品批号170303。
(3)主要仪器
kowa手持式裂隙灯，型号sl-17，购自上海悠森树生物科技有限公司。滨松病理切片荧光扫描仪(型号：nanozoomer2.0ht)。
2.实验方法：
(1)实验分组：在造模前用酚红棉线检测所有大鼠泪液分泌量，并根据泪液分泌量水平进行平均分组，每组10只大鼠，组别分别为：正常对照组，模型对照组，玻璃酸钠对照组，(1％，0.25％，0.0625％)滴眼液治疗组。
(2)模型构建
除正常对照组外的其余每只大鼠每日9:00，12:00，15:00点皮下注射浓度1.5w/v％东莨菪碱注射液0.2ml，18:00点皮下注射浓度1.75w/v％东莨菪碱注射液0.2ml，连续注射7天。
(3)治疗方法
正常对照组、模型对照组大鼠不做任何干预，玻璃酸钠对照组大鼠每日4次采用0.1％玻璃酸钠滴眼液滴液(20μl/眼/次)，滴眼液治疗组大鼠每天4次分别采用实施例1制得的1％、0.25％、0.0625％4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯滴眼液滴眼(20μl/眼/次)。滴眼时间约为每日9:30，12:30，15:30，18:30，连续进行7天。
1)泪液分泌量检测：分别于治疗第0天、第3天、第5天、第7天用酚红棉线检测各组大鼠泪液分泌量；
2)角膜损伤评分：分别于治疗第3天、第5天、第7天用对角膜进行荧光素钠染色，并用裂隙灯观察角膜染色面积进行损伤评分；
3)结膜杯状细胞计数：实验终点，取大鼠左眼结膜组织，置于4％甲醛中室温固定，石蜡切片进行过碘酸希夫(periodicacidschiff,pas)染色，每个标本40倍放大范围内取3个视野进行阳性染色杯状细胞计数，其3个视野计数的平均值为该样品的结膜杯状计数结果；
(4)实验结果
1)如图1所示，1％及0.25％的4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯滴眼液能够显著提高大鼠泪液分泌量；
2)如图2及图3a-c所示，荧光素钠染色大鼠双侧角膜结果表明，1％及0.25％的4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯滴眼液能够显著改善大鼠角膜损伤，且缓解作用优于玻璃酸钠滴眼液；
3)如图4及图5所示，大鼠结膜杯状细胞计数解表表明，1％、0.25％及0.0625％的4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯滴眼液能够维持大鼠结膜的杯状细胞正常数量，其中1％及0.25％滴眼液对杯状细胞保护作用优于玻璃酸钠滴眼液。
以上结果表明，4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯对大鼠泪液分泌不足所致眼部损伤具有显著的治疗作用，能够提高泪液分泌量，改善角膜炎症损伤，维持结膜杯状细胞数量，且效果优于玻璃酸钠滴眼液，可以开发为治疗泪液分泌不足所致眼部炎症损伤的药物。
参考文献
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[2]刘会娟，黄悦，张琰，等.大鼠干眼模型的建立及其角膜神经的改变[j].眼科新进展，2014，34(5)：422-427.
[3]刘雪，徐雯，高卫萍.硫酸阿托品滴眼液滴眼和氢溴酸东莨菪碱皮下注射制作水液缺乏型干眼兔模型实验研究[j].临床眼科杂志，2015(3)：263-266.
1.4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯在制备预防或治疗由泪液分泌不足所致眼部炎症损伤的眼科制剂中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述由泪液分泌不足所致眼部炎症损伤包括因疾病或用眼过度原因引起的泪液分泌不足、角膜、结膜炎症损伤的眼科疾病。
3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述由泪液分泌不足所致眼部炎症损伤为干眼症。
4.根据权利要求1所述的用途，其中，所述由泪液分泌不足所致眼部炎症损伤为泪液不足型干眼症。
5.根据权利要求1所述的用途，其中，所述眼科制剂包括滴眼液、眼用凝胶或眼用软膏。
6.根据权利要求1所述用途，其中，所述眼科制剂包括治疗有效量的4-[9-(6-氨基嘌呤基)]-2(s)-羟基丁酸甲酯和一种或多种药学上可接受的辅料。
7.根据权利要求6所述用途，其中，所述药学上可接受的辅料选自赋形剂、填充剂或稀释剂。
技术总结