本发明涉及一种取自植物的提取物，尤其涉及一种提取自藻类的提取物，以及在制取预防和治疗神经退行性疾病组合物中的应用。
背景技术：
阿尔茨海默病(alzheimer′sdisease，ad)，俗称早老性痴呆或老年性痴呆，是一种神经退行性疾病，其症状表现主要为病人记忆和认知能力不同程度地丧失，行为活动发生障碍。ad的发病机制还不十分清楚，可能与细胞的衰老、遗传基因、神经递质损伤和炎症等多种因素有关。目前临床应用或处于临床研究中的抗ad药物主要是从提高脑神经中的ach水平出发，恢复ach神经传导，改善病人的记忆、认知和行为能力，延缓病情的发展。其中一类药物是拟胆碱药物，另一类药物是促进脑神经中ach释放的药物。
常用的防治药物包括中枢兴奋剂、改善胆碱能的物质和脑血液循环改善剂等，然而这些药物存在疗效不确切、特异性不强或毒副作用大，口服吸收差，治标不治本等缺点，因而限制了它们的应用。
中国发明专利zl200710099008.8公开一种褐藻多糖硫酸酯，具有预防和治疗帕金森病的作用。将海带粉碎后添加蒸馏水沸水提取，提取液以硅藻土助滤过滤，滤液先以自来水流水透析一天，然后以蒸馏水透析一天，将透析液浓缩，加乙醇至浓度为75％沉淀，沉淀干燥得粗褐藻多糖硫酸酯。其主要由岩藻糖、半乳糖组成的硫酸多糖，其中岩藻糖含量为31％，硫酸基含量为32％，平均分子量为180kd。经验证，该种褐藻多糖硫酸酯对pd细胞模型和动物模型的da能神经元有一定的神经保护效应。
围绕褐藻的研究仍在不断深入，尤其是在防治神经退行性疾病方面的研究，正在试图从中寻找化学结构确切的分子或组合物。
技术实现要素：
本发明的一个目的在于提供一种褐藻提取物，具有防治神经退行性疾病的药理作用。
本发明的另一个目的在于提供一种褐藻提取物，具有改善记忆(包括空间记忆能力)的药理作用。
本发明的再一个目的在于提供一种褐藻提取物，具有改善阿尔茨海默病、早老性痴呆、帕金森氏病和原发性侧索硬化的药理作用。
本发明的又一个目的在于提供一种褐藻提取物作为活性成分，在制备预防和治疗神经退行性疾病的药物中的应用。
本发明的又一个目的在于提供一种褐藻提取物作为活性成分，在制备预防神经退行性疾病的食品或保健品中的应用。
本发明所称的“褐藻”为多细胞植物，其典型的种类包括褐藻门马尾藻科的植物。羊栖菜(sargassumfusiforme(harv.)setchel)属于褐藻门马尾藻科，系一种代表性褐藻，又名海大麦、鹿角尖和海菜等，以干燥藻体全藻入药，性味苦、咸、寒而无毒，主要功效为软坚散结、消痰、清凉解毒、破血祛瘀、利水消肿，用于瘿瘤、睾丸肿痛、痰饮水肿。其主要生长在北太平洋西部的暖温带水域，在我国分布十分广泛，北起辽东半岛，沿山东和浙江，南至福建和广东的浅海海域均有分布。其它还如：但不限于海蒿子、海带、鹿角菜、昆布和裙带菜等。本发明中，其指代海蒿子、海带、鹿角菜、昆布、裙带菜和羊栖菜之一种或者海蒿子、海带、鹿角菜、昆布、裙带菜和羊栖菜之任选的几种。
本发明所称的组合物，还包括各种与所含化合物或组合物相适应的药物辅料，以制成有利于给药(drugdelivery)的剂型，如：但不仅限于水溶液注射剂、粉针剂、丸剂、散剂、片剂、贴剂、栓剂、乳剂、霜剂、凝胶剂、颗粒剂、胶囊剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、缓释剂和控释剂等。这些药用辅料既可以是各种制剂中常规使用的，如：但不仅限于等渗剂、缓冲液、矫味剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂等；也可以是为了与所述物质相适应而选择使用的，如：乳化剂、增溶剂、抑菌剂、止痛剂和抗氧剂等，这类辅料能有效提高组合物所含化合物的稳定性和溶解性或改变化合物的释放速率和吸收速率等，从而改善各种化合物在生物体内的代谢，进而增强组合物的给药效果。此外，还可以为实现特定的给药目的或方式，如：缓释给药、控释给药和脉冲给药等，而使用的辅料，如：但不仅限于明胶、白蛋白、壳聚糖、聚醚和聚酯类高分子材料，如：但不仅限于，聚乙二醇、聚氨酯、聚碳酸酯及其共聚物等。所称的“有利于给药”的主要表现有：但不仅限于提高治疗效果、提高生物利用度、降低毒副作用和提高患者顺应性等。
在水溶液注射剂中，辅料一般包括等渗剂和缓冲液，以及必要的乳化剂(如：tweeen-80、pluronic和poloxamer等)、增溶剂和抑菌剂等。此外，还包括含有药学上可接受的其它药用辅料，如：抗氧剂、ph调节剂和止痛剂等。
用于制取口服液体制剂的辅料一般包括溶剂，以及必要的矫味剂、抑菌剂、乳化剂和着色剂等。
用于制取片剂的辅料一般包括填充剂(如：淀粉、糖粉、糊精、乳糖、可压性淀粉、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙和甘露醇等)、粘合剂(如：乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶溶液、蔗糖溶液和聚乙烯吡咯烷酮的水溶液或醇溶液等)、崩解剂(如：干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮和交联羧甲基纤维素钠)和润滑剂(如：硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇4,000、聚乙二醇6,000和月桂醇硫酸镁等)等。
用于制取乳剂的辅料一般为水、油(如：脂肪酸)、乳化剂，以及必要的防腐剂和矫味剂等。
用于制取颗粒剂的辅料与片剂类似，但造粒过程不同。根据需要，将制得的颗粒剂与助流剂混合后装入胶囊即得胶囊剂。
本发明所称的“生物体”、“动物”或“患者”是指人、野生动物和家畜(livestock)。野生动物为自然状态下未经人工驯化的动物。家畜是为了提供食物来源而人工饲养的动物，如：但不仅限于狗、猫、鼠、大鼠、仓鼠、猪、兔、奶牛、水牛、公牛、绵羊、山羊、鹅和鸡等。给予治疗的“患者”或“生物体”优先选择哺乳动物，尤其是人。
本发明所称的“预防”是指在未被临床标准认定的疾病前，各种用于防止疾病发生或发展的手段或措施，包括医学、物理或化学的方法，以阻止和降低疾病各种症状的发生或发展。
本发明所称的“治疗”是指为了阻止和降低疾病的发生或发展，使疾病病程的发展或加重得以抑制、遏制、减轻、改善、减缓、停止、延迟或反转，所描述的保持和/或用药时的疾病的、紊乱的或病理学状态的各种指标包括减轻或减少症状或并发症，或治愈或消除疾病、紊乱或状况。
本发明所称的“食品”是指包括本发明提供的各种化合物、组合物或提取物制成可食用的单一化合物或组合物。该种单一化合物或组合物的生产和制造应当符合相关食品安全标准，但是这些食品安全标准不得限定本发明。
本发明所称的“保健品”是指将包括本发明提供的各种化合物、组合物或提取物制成可食用的单一化合物或组合物以施于患者，起到对疾病进行预防和治疗的目的。其属于本发明所称的食品，但其生产、制造和销售还应当符合各种相关的要求、标准和规范。
本发明所称的“药物”是指可以用于预防或治疗某种疾病的单一化合物、多种化合物形成的组合物、中药材及其提取物，或指以单一化合物为主要活性成分的组合物或制剂(formulation)，还指由多种化合物为活性成分的组合物或制剂。“药物”应理解为不仅指根据一国之法律规定，通过其设立的行政机构审批并准予生产的产品，还指在为了获得通过审批和准予生产的过程中，所形成的含单一化合物为活性成分的各类物质形态。“形成”应理解为通过化学合成、生物转化或购买等途径获得。
本发明提供的一种褐藻提取物，按如下方法制得：
先将褐藻经水浸泡清洗后干燥；
然后，加入丙酮溶液(如：但不限于20v/v％～95v/v％，20v/v％～70v/v％，50v/v％～90v/v％或30v/v％～65v/v％等)，经加热回流(如：但不限于0.5小时～6小时、1小时～4小时、0.5小时～3小时或2小时～5.5小时等)提取后，过滤得滤液；
接着，将所得滤液浓缩至相对密度为1.10～1.50的浓缩液；
最后，将浓缩液干燥，即得褐藻提取物。
本发明提供的另一种褐藻提取物，按如下方法制得：
先将褐藻经水浸泡清洗后干燥(如：晾干或晒干或烘干)；
然后，加入相当于褐藻重量5～40倍量体积的20v/v％～95v/v％丙酮溶液，经0.5小时～6小时加热回流提取后，过滤得滤液；
接着，将所得滤液浓缩(如：减压)至无丙酮气味，且相对密度为1.10～1.50的浓缩液；
最后，将浓缩液干燥(如：减压真空干燥或喷雾干燥)，即得褐藻提取物。
本发明的丙酮溶液，应当理解为以丙酮为溶质的溶液，如：但不限于丙酮的水溶液，以及丙酮溶解于各种浓度的乙醇、甲醇、乙酸乙酯、氯仿、有机酸、无机酸、有机碱和无机碱等形成的溶液，以丙酮为溶质与有机或无机溶剂按比例混合后所得的丙酮溶液作为制取褐藻提取物的提取溶剂。
在制取本发明的褐藻提取物中，以水浸泡褐藻的时间为0.5小时～5小时。
在制取本发明的褐藻提取物中，还包括与滤液分离后所得的余料再经丙酮溶液提取，且如此往复提取多次，将各次滤液合并后再浓缩至至相对密度为1.10～1.50的液体。
除直接提取或萃取外，还可将提取物或萃取物继续用各种纯化方法加以精制和纯化，如：但不限于正相层析和反相层析技术、超滤技术和膜技术等，采用各种层析填料或介质，如：但不限于大孔树脂、凝胶、硅胶、小孔树脂、阴离子交换树脂、阳离子交换树脂、分子筛、纤维素、活性炭、氧化铝、中空纤维、各种截留规格透析袋和透析膜等。
本发明提供的一种药物组合物，以本发明提供的褐藻提取物为活性成分。
本发明提供的另一种食品，以本发明提供的褐藻提取物为活性成分。
本发明提供的另一种保健品，以本发明提供的褐藻提取物为活性成分。
本发明技术方案实现的有益效果：
本发明提供的各种提取物，具有改善神经系统功能，如：但不限于阿尔茨海默病、早老性痴呆、帕金森氏病和原发性侧索硬化，以及记忆能力(尤其是空间记忆能力)。
具体实施方式
以下详细描述本发明的技术方案。本发明实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
本发明所用的试剂若未明确指明，则均购自于西格玛-奥德里奇(sigma-aldrich)。
实施例1褐藻提取的制取
先将褐藻经水浸泡0.5小时～5小时，清洗后晾干；然后，加入相当于褐藻重量5～40倍量体积的20v/v％～95v/v％丙酮溶液，经0.5小时～6小时加热回流提取后，过滤得滤液；接着，将所得滤液减压浓缩至无丙酮气味，且相对密度为1.10～1.50的浓缩液；最后，将浓缩液减压真空干燥，即得褐藻提取物。
实施例2
步骤一，取羊栖菜药材(1000g)，用20倍量的水浸泡并搅拌清洗，换水三次，滤干，然后晒干，加入20％丙酮溶液10l，加热回流提取2小时，过滤，滤渣再加入20％丙酮溶液8l，加热回流提取2小时，过滤，合并滤液。
步骤二，取滤液，减压回收丙酮至无丙酮气味，得到浓缩液，相对密度为1.10，水浴95℃蒸干，烘箱70℃过夜烘干即得(记为：供试品1)。
实施例3
步骤一，取羊栖菜药材(1000g)，用20倍量的水浸泡并搅拌清洗，换水三次，滤干，然后晒干，加入30％丙酮溶液10l，加热回流提取2小时，过滤，滤渣再加入30％丙酮溶液8l，加热回流提取2小时，过滤，合并滤液。
步骤二，取滤液，减压回收丙酮至无丙酮气味，得到浓缩液，相对密度为1.15，水浴95℃蒸干，烘箱70℃过夜烘干即得(记为：供试品2)。
实施例4
步骤一，取羊栖菜药材(1000g)，用20倍量的水浸泡并搅拌清洗，换水三次，滤干，然后晒干，加入50％丙酮溶液10l，加热回流提取2小时，过滤，滤渣再加入50％丙酮溶液8l，加热回流提取2小时，过滤，合并滤液。
步骤二，取滤液，减压回收丙酮至无丙酮气味，得到浓缩液，相对密度为1.2，水浴95℃蒸干，烘箱70℃过夜烘干即得(记为：供试品3)。
实施例5
步骤一，取羊栖菜药材(1000g)，用20倍量的水浸泡并搅拌清洗，换水三次，滤干，然后晒干，加入70％丙酮溶液10l，加热回流提取2小时，过滤，滤渣再加入70％丙酮溶液8l，加热回流提取2小时，过滤，合并滤液。
步骤二，取滤液，减压回收丙酮至无丙酮气味，得到浓缩液，相对密度为1.30，水浴95℃蒸干，烘箱70℃过夜烘干即得(记为：供试品4)。
实施例6
步骤一，取羊栖菜药材(1000g)，用20倍量的水浸泡并搅拌清洗，换水三次，滤干，然后晒干，加入90％丙酮溶液10l，加热回流提取2h，过滤，滤渣再加入90％丙酮溶液8l，加热回流提取2h，过滤，合并滤液。
步骤二，取滤液，减压回收丙酮至无丙酮气味，得到浓缩液，相对密度为1.45，水浴95℃蒸干，烘箱70℃过夜烘干即得(记为：供试品5)。
实施例7供试品2对亚硝酸钠所致小鼠记忆再现障碍影响
本实施例中，使用的褐藻丙酮提取物为供试品2。
亚硝酸钠为致脑缺氧剂，一般认为亚硝酸钠导致的记忆障碍是由于其进入机体后，使体内的血红蛋白氧化成高铁血红蛋白，使血红蛋白失去携氧和释氧的功能，而引起全身各组织缺氧，从而造成脑部缺氧性记忆障碍。有改善学习记忆的药物可减少亚硝酸钠所致小鼠记忆巩固不良小鼠24小时后受电击的动物数、降低5分钟内的错误次数，以及缩短小鼠第一次跳下平台的潜伏期。
雄性icr小鼠(上海西普尔-毕凯实验动物有限公司，动物合格证号：scxk(沪)2008-0016)，经口灌胃(i.g.)给药，其中空白对照组和模型组均给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠(cmc-na)，给药组给予120mg/kg的供试品2，每组10只，1次/天，10ml/kg体重，连续给药3周。最后一次给药后1小时，将小鼠放入跳台仪内适应5分钟。然后通电，动物受到电击后的正常反应是跳回平台以躲避伤害性刺激，多数动物可能再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又迅速跳回平台，如此训练5分钟，记录每鼠受电击的次数。训练后立即皮下注射亚硝酸钠120mg/kg(0.1ml/10g)，空白对照组给予等体积生理盐水。24小时后重测，视屏分析系统将摄制并自动记录动物所有相关数据，实验结果参见表1。
表1供试品2给药3周对亚硝酸钠所致小鼠记忆巩固障碍的影响
与模型组相比，**p＜0.01，*p＜0.05。
供试品2给药三周后未对小鼠体重产生显著影响。在亚硝酸钠所致小鼠记忆巩固障碍模型测试中，供试品2的潜伏期与模型组相比，差异具有统计学意义。
实施例8供试品3对乙醇诱导的小鼠记忆再现障碍影响
本实施例中，使用的褐藻丙酮提取物为供试品3。
乙醇为中枢抑制剂，可抑制大脑皮层的神经功能活动，抑制动物的条件反射过程，使脑内蛋白质和rna合成受阻，胆碱能和多巴胺等系统发生改变。在重测前给予，可明显干扰记忆的再现。乙醇价廉易得，在适宜的浓度下，结果稳定，易于重复，对中枢和一般运动功能无明显影响。有改善学习记忆的药物可减少乙醇所致记忆再现障碍小鼠24小时后由明室到暗室的潜伏期及错误次数。雄性icr小鼠(上海西普尔-毕凯实验动物有限公司，动物合格证号：scxk(沪)2008-0016)，经口灌胃(i.g.)给药，其中空白对照组和模型组均给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠(cmc-na)，给药组给予120mg/kg供试品3，每组10只，1次/天，10ml/kg体重，连续给药3周。末次给药后1小时，以避暗法训练一次。将小鼠放入避暗箱内，背朝洞口放入明室，同时启动视屏分析装置，动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时自动停止。取出小鼠，视屏分析将记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24小时后进行测试，测试前30分钟经口灌胃给予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白对照组给予等体积生理盐水。视屏分析系统将摄制并自动记录动物所有相关数据，实验结果参见表2。
表2供试品3给药3周对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
与模型组相比，**p＜0.01，*p＜0.05。
给药3周后未对小鼠体重产生显著影响。在本次的样品测试中，供试品3的潜伏期与模型组相比，差异具有统计学意义，供试品3错误次数相较于模型组，差异具有非常显著的统计学意义。
实施例9供试品5对乙醇诱导的小鼠记忆再现障碍影响
本实施例中，使用的褐藻丙酮提取物为供试品5。
乙醇为中枢抑制剂，可抑制大脑皮层的神经功能活动，抑制动物的条件反射过程，使脑内蛋白质和rna合成受阻，胆碱能和多巴胺等系统发生改变。在重测前给予，可明显干扰记忆的再现。乙醇价廉易得，在适宜的浓度下，结果稳定，易于重复，对中枢和一般运动功能无明显影响。有改善学习记忆的药物可减少乙醇所致记忆再现障碍小鼠24h后由明室到暗室的潜伏期及错误次数。雄性icr小鼠(上海西普尔-毕凯实验动物有限公司，动物合格证号：scxk(沪)2008-0016)，经口灌胃(i.g.)给药，其中空白对照组和模型组均给予等体积0.5％羧甲基纤维素钠(cmc-na)，给药组给予120mg/kg供试品5，每组10只，1次/天，10ml/kg体重，连续给药3周。末次给药后1小时，以避暗法训练一次。将小鼠放入避暗箱内，背朝洞口放入明室，同时启动视屏分析装置，动物穿过洞口进入暗室受到电击，计时自动停止。取出小鼠，视屏分析将记录每鼠从放入明室至进入暗室遇到电击所需的时间，此即潜伏期。24小时后进行测试，测试前30分钟经口灌胃给予45％的乙醇溶液(0.1ml/10g)，空白对照组给予等体积生理盐水。视屏分析系统将摄制并自动记录动物所有相关数据，实验结果参见表3。
表3供试品5给药3周对乙醇所致小鼠记忆再现障碍的影响
与模型组相比，**p＜0.01，*p＜0.05。
给药3周后未对小鼠体重产生显著影响。在本次的样品测试中，供试品5的潜伏期与模型组相比，差异具有统计学意义，供试品5的错误次数及受电击动物数与模型组相比，差异具有统计学意义。
1.一种褐藻提取物，其特征在于按如下方法制得：
先将褐藻经水浸泡清洗后干燥；
然后，加入丙酮溶液，经加热回流提取后，得滤液；
接着，将所得滤液浓缩至相对密度为1.10～1.50的浓缩液；
最后，将浓缩液干燥，即得褐藻提取物。
2.根据权利要求1所述的褐藻提取物，其特征在于所述的丙酮溶液浓度为20v/v％～95v/v％。
3.根据权利要求1所述的褐藻提取物，其特征在于加入相当于所述褐藻重量5～40倍量体积的所述丙酮。
4.根据权利要求1所述的褐藻提取物，其特征在于所述的干燥为减压真空干燥或喷雾干燥。
5.根据权利要求1所述的褐藻提取物，其特征在于所述的滤液浓缩至无丙酮气味。
6.根据权利要求1所述的褐藻提取物，其特征在于以水浸泡所述褐藻的时间为0.5小时～5小时。
7.根据权利要求1所述的褐藻提取物，其特征在于与所述的滤液分离后所得的余料，再经丙酮溶液提取，且如此往复提取多次。
8.根据权利要求1～7之一所述的褐藻提取物在制备改善神经系统功能的药物、食品或保健品中的应用。
9.根据权利要求1～7之一所述的褐藻提取物在制备预防和治疗阿尔茨海默病、早老性痴呆、帕金森氏病和原发性侧索硬化，以及记忆能力的药物、食品或保健品中的应用。
10.一种药物组合物，以权利要求1～7之一所述的褐藻提取物为活性成分。
技术总结