本发明涉及一种马齿苋提取物及其制备方法。
背景技术：
：马齿苋(学名：portulacaoleraceal.)为石竹目、马齿苋科一年生草本，含有丰富的营养价值，既具有清热解毒、消炎止痛、止血凉血的作用，还可以治疗肠胃道感染、皮肤粗糙干燥、维生素a缺乏、夜盲症、肾炎、产后子宫出血、乳腺炎等疾病，而且马齿苋的茎叶中含有蛋白质、脂肪、糖类、粗纤维、钙、磷、铁、胡萝卜素、维生素b，还含有大量的去甲肾上腺素，丰富的柠檬酸和苹果酸，因此极具营养和药用价值。现有的马齿苋提取物的提取方法大多需要加热提取，部分马齿苋的有效成分不能被保留下来，而且提取物中的杂质较多，有效成分含量和安全性不高。中国专利申请cn201711308794.8公开了“一种马齿苋的提取加工工艺”，包括以下步骤：s1、马齿苋洗净，搅碎，加乙醇溶液提取2次，过滤，减压浓缩回收乙醇，至无醇为止，得浓缩液a；s2、滤渣依次用乙醚-乙醇混合提取剂、乙醇-水混合提取剂、水进行超声提取，过滤，减压浓缩得浓缩液b；s3、将浓缩液a和浓缩液b合并，加活性炭，并于35～45℃脱色2～4h，然后加硅藻土，再进行过滤，滤液即为马齿苋提取液的原液；s4、将马齿苋提取液的原液与丙二醇、蒸馏水进行混合，待混合均匀再进行灭菌、包装即完成马齿苋的提取加工工艺。该发明同样存在马齿苋提取液中的杂质较多，有效成分含量和安全性不高的问题。技术实现要素：本发明要解决的技术问题是提供一种马齿苋提取物，其主要采用低温微射流提取得到，杂质较少，有效成分含量和安全性均较高。为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：一种马齿苋提取物，其由以下步骤制成：s1.将马齿苋用去离子水冲洗5分钟后风干，常温灭菌后置于真空干燥箱中60℃下真空干燥2小时，取出后投入气流粉碎机中进行精细粉碎得到粉末，将粉末过40目筛网得到马齿苋细粉；s2.将马齿苋细粉加入纯水中搅拌均匀得到混合液，将混合液泵入微射流提取器中提取得到提取液，将提取液离心20分钟得到上清液；s3.将上清液用微滤膜分离浓缩得到微滤膜截留浓缩液，将微滤膜截留浓缩液用纳滤膜进行纳滤膜分离浓缩得到纳滤膜截留浓缩液，将纳滤膜截留浓缩液置于真空干燥箱中60℃下真空干燥至恒重得到马齿苋提取物。进一步地，所述步骤s1中，常温灭菌的温度为10-30℃，常温灭菌的方式为紫外线灭菌，气流粉碎机的进料速度为3kg/小时，工作压力为1mpa。进一步地，所述步骤s2中，马齿苋细粉与纯水的重量比为1:(30-35)，微射流提取器的提取温度为10-30℃，微射流提取器的流量为100ml/分，微射流提取器的频率为60hz，离心的速度为3000-15000rpm。进一步地，所述步骤s3中，微滤膜的截留分子量为50000，微滤膜的工作压力为2.5-3bar，微滤膜的温度为30℃，纳滤膜的截留分子量为500，纳滤膜的工作压力为8-10bar，纳滤膜的温度为30℃。本发明要解决的另一技术问题提供上述马齿苋提取物的制备方法。为解决上述技术问题，技术方案是：一种马齿苋提取物的制备方法，包括以下步骤：s1.将马齿苋用去离子水冲洗5分钟后风干，常温灭菌后置于真空干燥箱中60℃下真空干燥2小时，取出后投入气流粉碎机中进行精细粉碎得到粉末，将粉末过40目筛网得到马齿苋细粉；s2.将马齿苋细粉加入纯水中搅拌均匀得到混合液，将混合液泵入微射流提取器中提取得到提取液，将提取液离心20分钟得到上清液；s3.将上清液用微滤膜分离浓缩得到微滤膜截留浓缩液，将微滤膜截留浓缩液用纳滤膜进行纳滤膜分离浓缩得到纳滤膜截留浓缩液，将纳滤膜截留浓缩液置于真空干燥箱中60℃下真空干燥至恒重得到马齿苋提取物。进一步地，所述步骤s1中，常温灭菌的温度为10-30℃，常温灭菌的方式为紫外线灭菌，气流粉碎机的进料速度为3kg/小时，工作压力为1mpa。进一步地，所述步骤s2中，马齿苋细粉与纯水的重量比为1:(30-35)，微射流提取器的提取温度为10-30℃，微射流提取器的流量为100ml/分，微射流提取器的频率为60hz，离心的速度为3000-15000rpm。进一步地，所述步骤s3中，微滤膜的截留分子量为50000，微滤膜的工作压力为2.5-3bar，微滤膜的温度为30℃，纳滤膜的截留分子量为500，纳滤膜的工作压力为8-10bar，纳滤膜的温度为30℃。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：1)本发明主要采用低温微射流提取马齿苋，可在常温条件下最大程度地保留马齿苋中活性成分，得到的马齿苋提取物的杂质少，有效成分含量和安全性均高；经测试，本发明制得的马齿苋提取物的氨基酸含量高于市售产品，进行动物多次皮肤刺激实验、急性眼刺激实验、人体斑贴试验均显示无刺激。2)相对于现有技术中的提取方法，本发明采用的低温微射流提取步骤能进一步提高马齿苋提取物的抗炎和抗菌性能；此外，本发明步骤s1中采用气流粉碎机进行精细粉碎的步骤能进一步提高马齿苋提取物中的有效成分含量、抗氧化和抗菌性能；步骤s3中采用微滤膜、纳滤膜进行分离纯化的步骤能进一步提高马齿苋提取物中的有效成分含量。具体实施方式下面将结合具体实施例来详细说明本发明，在此本发明的示意性实施例及其说明用来解释本发明，但并不作为对本发明的限定。实施例1按照以下步骤制备马齿苋提取物：s1.将马齿苋用去离子水冲洗5分钟后风干，20℃下紫外线灭菌后置于真空干燥箱中60℃下真空干燥2小时，取出后投入进料速度为3kg/小时、工作压力为1mpa的气流粉碎机中进行精细粉碎得到粉末，将粉末过40目筛网得到马齿苋细粉；s2.将马齿苋细粉加入纯水中搅拌均匀得到混合液，马齿苋细粉与纯水的重量比为1:32，将混合液泵入流量为100ml/分、频率为60hz的微射流提取器中20℃下提取得到提取液，将提取液10000rpm速度下离心20分钟得到上清液；s3.将上清液用截留分子量为50000、工作压力为2.8bar的微滤膜30℃下分离浓缩得到微滤膜截留浓缩液，将微滤膜截留浓缩液用截留分子量为500、工作压力为9bar的纳滤膜进行纳滤膜30℃下分离浓缩得到纳滤膜截留浓缩液，将纳滤膜截留浓缩液置于真空干燥箱中60℃下真空干燥至恒重得到马齿苋提取物。实施例2按照以下步骤制备马齿苋提取物：s1.将马齿苋用去离子水冲洗5分钟后风干，30℃下紫外线灭菌后置于真空干燥箱中60℃下真空干燥2小时，取出后投入进料速度为3kg/小时、工作压力为1mpa的气流粉碎机中进行精细粉碎得到粉末，将粉末过40目筛网得到马齿苋细粉；s2.将马齿苋细粉加入纯水中搅拌均匀得到混合液，马齿苋细粉与纯水的重量比为1:35，将混合液泵入流量为100ml/分、频率为60hz的微射流提取器中30℃下提取得到提取液，将提取液3000rpm速度下离心20分钟得到上清液；s3.将上清液用截留分子量为50000、工作压力为2.5bar的微滤膜30℃下分离浓缩得到微滤膜截留浓缩液，将微滤膜截留浓缩液用截留分子量为500、工作压力为8bar的纳滤膜进行纳滤膜30℃下分离浓缩得到纳滤膜截留浓缩液，将纳滤膜截留浓缩液置于真空干燥箱中60℃下真空干燥至恒重得到马齿苋提取物。实施例3按照以下步骤制备马齿苋提取物：s1.将马齿苋用去离子水冲洗5分钟后风干，10℃下紫外线灭菌后置于真空干燥箱中60℃下真空干燥2小时，取出后投入进料速度为3kg/小时、工作压力为1mpa的气流粉碎机中进行精细粉碎得到粉末，将粉末过40目筛网得到马齿苋细粉；s2.将马齿苋细粉加入纯水中搅拌均匀得到混合液，马齿苋细粉与纯水的重量比为1:30，将混合液泵入流量为100ml/分、频率为60hz的微射流提取器中10℃下提取得到提取液，将提取液15000rpm速度下离心20分钟得到上清液；s3.将上清液用截留分子量为50000、工作压力为3bar的微滤膜30℃下分离浓缩得到微滤膜截留浓缩液，将微滤膜截留浓缩液用截留分子量为500、工作压力为10bar的纳滤膜进行纳滤膜30℃下分离浓缩得到纳滤膜截留浓缩液，将纳滤膜截留浓缩液置于真空干燥箱中60℃下真空干燥至恒重得到马齿苋提取物。实施例4按照以下步骤制备马齿苋提取物：s1.将马齿苋用去离子水冲洗5分钟后风干，25℃下紫外线灭菌后置于真空干燥箱中60℃下真空干燥2小时，取出后投入进料速度为3kg/小时、工作压力为1mpa的气流粉碎机中进行精细粉碎得到粉末，将粉末过40目筛网得到马齿苋细粉；s2.将马齿苋细粉加入纯水中搅拌均匀得到混合液，马齿苋细粉与纯水的重量比为1:33，将混合液泵入流量为100ml/分、频率为60hz的微射流提取器中25℃下提取得到提取液，将提取液5000rpm速度下离心20分钟得到上清液；s3.将上清液用截留分子量为50000、工作压力为2.7bar的微滤膜30℃下分离浓缩得到微滤膜截留浓缩液，将微滤膜截留浓缩液用截留分子量为500、工作压力为8.5bar的纳滤膜进行纳滤膜30℃下分离浓缩得到纳滤膜截留浓缩液，将纳滤膜截留浓缩液置于真空干燥箱中60℃下真空干燥至恒重得到马齿苋提取物。试验例一：多次皮肤刺激性试验参考《化妆品安全技术规范》2015版-皮肤刺激性/腐蚀性试验方法对实施例1进行试验，试验结果显示：在观察期内受试新西兰兔皮肤未出现红斑和水肿的皮肤刺激反应，样品组每天每只动物积分均值为0分，表明实施例1多次皮肤刺激强度为无刺激性。试验例二：急性眼刺激性/腐蚀性试验参考《化妆品安全技术规范》2015版-急性眼刺激性/腐蚀性试验方法对实施例1进行试验：将0.1ml受试物直接涂入新西兰兔右侧眼睛的结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合约1秒防止受试物流出。左侧眼睛不处理作为自身对照，涂入受试物后24小时内不冲洗眼睛。24小时观察之后滴入2％荧光素钠稀释液，30秒后清洗干净。在涂入受试物1小时、2小时、48小时和72小时对新西兰兔眼睛进行检查，均为出现刺激性反应，表明实施例1对新西兰兔眼睛刺激强度为无刺激性。试验例三：人体皮肤斑贴试验参考《化妆品安全技术规范》2015版-人体皮肤斑贴试验对实施例1进行试验。受试物为实施例1，阴性对照为空白对照，受试者共30人，男8人，女22人，年龄19-57岁。试验方法：选用合格的班试器材，以皮肤封闭型斑贴试验方法，将受试物约0.02-0.025ml放入班试器小室内，对照孔为空白对照。将加有受试物的班试器用低致敏胶带贴敷于受试者的背部或前臂曲侧，用手掌轻压使之均匀地贴敷于皮肤上，持续24小时。分别于去除受试物班试器后30分钟、24小时和48小时按表1标准观察皮肤反应，并记录观察结果。表1皮肤封闭型斑贴试验皮肤反应分级标准试验结果如表2所示：表2表2显示出：实施例1的人体皮肤斑贴试验结果为，30例受试者皮肤全部呈阴性反应。参比实施例1与实施例1的不同之处在于：步骤s2采用乙醇提取法。参比实施例2与实施例1的不同之处在于：步骤s1使用普通的粉碎机代替气流粉碎机。参比实施例3与实施例1的不同之处在于：步骤s3直接将上清液真空干燥。对比例对比例是申请号为cn201711308794.8的中国专利的实施例1。试验例四：氨基酸含量测试(我提供的氨基酸测试实验是定性测试，非定量)使用氨基酸分析仪分别测定实施例1-4、参比实施例1-3和对比例的氨基酸含量，并以氨基酸含量表征马齿苋提取物的有效成分含量，氨基酸含量越高表明有效成分含量越高，测试结果如表3所示：表3由表3可以看出，本发明实施例1-4的氨基酸含量均显著高于对比例，表明本发明制得的马齿苋提取物的有效成分含量较高。参比实施例1-3的部分步骤与实施例1不同，参比实施例1的氨基酸含量的降幅较大，说明微射流提取步骤对有效成分含量的影响较大；参比实施例2、3的氨基酸含量的降幅均小于参比实施例1，说明气流粉碎机的精细粉碎步骤和采用微滤膜、纳滤膜进行分离纯化的步骤均有助于提高马齿苋提取物的有效成分含量。试验例五：抗氧化性能测试分别测定实施例1-4、参比实施例1-3和对比例的羟基自由基·oh清除率，羟基自由基·oh清除率越高表明抗氧化性能越好，测试结果如表4所示：羟基自由基·oh清除率(％)实施例173.18实施例273.07实施例373.14实施例473.10参比实施例173.17参比实施例267.65参比实施例373.18对比例54.49表4由表4可以看出，本发明实施例1-4的羟基自由基·oh清除率均显著高于对比例，表明本发明制得的马齿苋提取物具有较好的抗氧化性能。参比实施例1-3的部分步骤与实施例1不同，参比实施例2的羟基自由基·oh清除率下降，说明气流粉碎机的精细粉碎步骤能有效提高马齿苋提取物的抗氧化性能。试验例六：抗菌性能测试分别测定实施例1-4、参比实施例1-3、对比例对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、黑曲霉菌的抑菌圈直径，抑菌圈直径越大表明抗菌功效越好，测试结果如表5所示：表5由表5可以看出，本发明实施例1-4对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、黑曲霉菌的抑菌圈直径均大于对比例，表明本发明制得的马齿苋提取物具有较好的抗菌性能。参比实施例1-3的部分步骤与实施例1不同，参比实施例2的抑菌圈直径下降，说明气流粉碎机的精细粉碎步骤能有效提高马齿苋提取物的抗菌性能。试验例七：抗炎性能测试测试方法：选取104名年龄为22-35岁、脸部有炎症的试用者，随机平均分成8组，每组试用者每天早晚分别使用实施例1-4、参比实施例1-3、对比例洁肤1次，两周后试用者对抗炎效果进行评分，评分采用5分满分制，1分表示效果很差，2分表示效果差，3分表示效果一般，4表示效果较好，5分表示效果非常好，计算出每组试用者的抗炎效果平均分。测试结果如表6所示：表6由表6可以看出，本发明实施例1-4的抗炎效果平均分均显著高于对比例，表明本发明制得的马齿苋提取物具有较好的抗炎性能。参比实施例1-3的部分步骤与实施例1不同，参比实施例1的抗炎效果平均分下降，说明微射流提取步骤能有效提高马齿苋提取物的抗炎性能。上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属
技术领域：
中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种马齿苋提取物，其特征在于：其由以下步骤制成：
s1.将马齿苋用去离子水冲洗5分钟后风干，常温灭菌后置于真空干燥箱中60℃下真空干燥2小时，取出后投入气流粉碎机中进行精细粉碎得到粉末，将粉末过40目筛网得到马齿苋细粉；
s2.将马齿苋细粉加入纯水中搅拌均匀得到混合液，将混合液泵入微射流提取器中提取得到提取液，将提取液离心20分钟得到上清液；
s3.将上清液用微滤膜分离浓缩得到微滤膜截留浓缩液，将微滤膜截留浓缩液用纳滤膜进行纳滤膜分离浓缩得到纳滤膜截留浓缩液，将纳滤膜截留浓缩液置于真空干燥箱中60℃下真空干燥至恒重得到马齿苋提取物。
2.根据权利要求1所述的一种马齿苋提取物，其特征在于：所述步骤s1中，常温灭菌的温度为10-30℃，常温灭菌的方式为紫外线灭菌，气流粉碎机的进料速度为3kg/小时，工作压力为1mpa。
3.根据权利要求1所述的一种马齿苋提取物，其特征在于：所述步骤s2中，马齿苋细粉与纯水的重量比为1:(30-35)，微射流提取器的提取温度为10-30℃，微射流提取器的流量为100ml/分，微射流提取器的频率为60hz，离心的速度为3000-15000rpm。
4.根据权利要求1所述的一种马齿苋提取物，其特征在于：所述步骤s3中，微滤膜的截留分子量为50000，微滤膜的工作压力为2.5-3bar，微滤膜的温度为30℃，纳滤膜的截留分子量为500，纳滤膜的工作压力为8-10bar，纳滤膜的温度为30℃。
5.根据权利要求1～4任意一项所述的一种马齿苋提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
s1.将马齿苋用去离子水冲洗5分钟后风干，常温灭菌后置于真空干燥箱中60℃下真空干燥2小时，取出后投入气流粉碎机中进行精细粉碎得到粉末，将粉末过40目筛网得到马齿苋细粉；
s2.将马齿苋细粉加入纯水中搅拌均匀得到混合液，将混合液泵入微射流提取器中提取得到提取液，将提取液离心20分钟得到上清液；
s3.将上清液用微滤膜分离浓缩得到微滤膜截留浓缩液，将微滤膜截留浓缩液用纳滤膜进行纳滤膜分离浓缩得到纳滤膜截留浓缩液，将纳滤膜截留浓缩液置于真空干燥箱中60℃下真空干燥至恒重得到马齿苋提取物。
6.根据权利要求5所述的一种马齿苋提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤s1中，常温灭菌的温度为10-30℃，常温灭菌的方式为紫外线灭菌，气流粉碎机的进料速度为3kg/小时，工作压力为1mpa。
7.根据权利要求5所述的一种马齿苋提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤s2中，马齿苋细粉与纯水的重量比为1:(30-35)，微射流提取器的提取温度为10-30℃，微射流提取器的流量为100ml/分，微射流提取器的频率为60hz，离心的速度为3000-15000rpm。
8.根据权利要求5所述的一种马齿苋提取物的制备方法，其特征在于：所述步骤s3中，微滤膜的截留分子量为50000，微滤膜的工作压力为2.5-3bar，微滤膜的温度为30℃，纳滤膜的截留分子量为500，纳滤膜的工作压力为8-10bar，纳滤膜的温度为30℃。
技术总结本发明提供了一种马齿苋提取物，由以下步骤制成：S1.将马齿苋用去离子水冲洗5分钟后风干，常温灭菌后置于真空干燥箱中真空干燥，取出后投入气流粉碎机中精细粉碎得到粉末，将粉末过筛得到马齿苋细粉；S2.将马齿苋细粉加入纯水中搅拌均匀得到混合液，将混合液泵入微射流提取器中提取得到提取液，离心得到上清液；S3.将上清液用微滤膜分离浓缩得到微滤膜截留浓缩液，将微滤膜截留浓缩液用纳滤膜进行纳滤膜分离浓缩得到纳滤膜截留浓缩液，将纳滤膜截留浓缩液置于真空干燥箱中真空干燥至恒重得到马齿苋提取物。本发明还提供了该马齿苋提取物的制备方法。本发明所提供的马齿苋提取物主要采用低温微射流提取得到，杂质较少，有效成分含量和安全性均较高。
技术研发人员：聂艳峰;孙怀庆;裴运林;郭朝万
受保护的技术使用者：广东丸美生物技术股份有限公司
技术研发日：2019.10.16
技术公布日：2021.03.12
