本发明涉及一种外用中药组合物，具体地说是一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用中药组合物及由该护肤组合物制备得到的护肤制剂。
背景技术：
：面色暗黄是困扰中国女性的一大肌肤问题。根据资生堂(中国)研究开发中心田村昌平先生在2019年中国国际化妆品个人及家庭护理用品原料展览会的化妆品个护创新发展趋势论坛上发布的数据，“暗沉”、“没有透明感”“泛黄”、“没有光泽”四个关键词占据中国女性对于皮肤问题的意识的前四名。可见面部肤色暗黄无光对中国女性影响之重。总结导致皮肤暗黄的因素有三点，(1)皮肤表面脂质老化：可通过日常清洁进行规避；(2)食物、药物造成的黄染，病理性黄疸等涉及到饮食和疾病治疗随机体生理活动而正常代谢。(3)非酶糖基化：反应场所非常广泛，终产物难分解难代谢，随年龄的增长进行累积，是肤色暗黄问题的核心所在。非酶糖基化(nonenzymaticglycosylation，neg)是一系列复杂的非酶促反应，蛋白质和葡萄糖在体内发生非酶促反应形成schiff碱和amadori产物等早期糖基化产物，进而经过氧化、重排、交联等过程，形成不可逆的非酶糖基化终产物(advancedglycosylationendproducts，ages)。既往的许多研究表明，即使在正常人体内，ages也会随着年龄的增加不断累积，说明ages与衰老之间有密切关系。ages不仅激活修饰蛋白的迁移，还能诱导细胞因子和生长因子，因此能使正常蛋白结构改变，且ages的蛋白修饰表明它有为它们的迁移提供识别信号的作用，证明ages在衰老进程中的重要作用。另外ages介导的交联降低了蛋白酶解的敏感性，从而使蛋白积聚，产生一系列衰老病症。现有技术中延缓衰老及祛黄产品多以植物提取物构成的高效的抗氧化体系以及诸多具有美白功效来匹配其宣称。但皮肤祛黄及延缓衰老涉及多方面因素，仅抗氧化和清除自由基无法实现长效且稳定的祛黄作用。理论上讲，通过抑制非酶糖基化早期和中期反应可以有效改善ages的形成和脂褐素在皮肤上的积累，进一步起到长效且稳定的皮肤祛黄及延缓衰老的功效。本领域公知的非酶糖基化有效抑制剂氨基胍(aminoguanidine)可能是第一个被发现的抗糖化成分，作用方式是在ages形成的初期阻止这个过程，但对于已经形成或接近形成的ages没有作用。不过因为其具有一定副作用，所以在使用上受到诸多限制。在这种状况下，以植物提取物作为抑制非酶糖基化原料的突破口，是选材范围广、性价比高、成功率高的选择。技术实现要素：本发明所要解决的首要技术问题在于提供一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用中药组合物。本发明所要解决的另一技术问题在于提出一种上述中药组合物的制备方法。本发明所要解决的又一技术问题在于提出一种含有上述制备方法制备得到的中药提取物的护肤组合物。本发明所要解决的又一技术问题在于提出上述护肤组合物的制备方法。为实现本发明的目的，本发明采用如下的技术方案：一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用中药组合物，其中，所述外用中药组合物由下述重量份配比的原料药制成：陈皮10～30、炙甘草10～30、紫苏10～30、草豆蔻10～30、草果10～30。优选地，所述组合物由下述重量份配比的原料药制成：陈皮10重量份、炙甘草10重量份、紫苏10重量份、草豆蔻10重量份、草果10重量份。一种上述的外用中药组合物的制备方法，其中，所述方法步骤如下：(1)按照上述重量份配比称取原料药，依次粉碎后过10～100目筛，混合均匀；(2)用体积百分比为60％～90％乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/ml为1：10～1：50，超声提取20～40分钟得提取液；(3)将步骤(2)得到的提取液过滤，得滤液；(4)将所得滤液旋转蒸发浓缩至原体积的8％～15％，得浓缩物；(5)将浓缩物冷冻干燥，即得。优选地，所述步骤(2)中乙醇的体积百分比为80％～90％，原料药与乙醇质量体积比g/ml为1：30～1：40。优选地，所述步骤(3)中过滤为0.45μm滤纸真空抽滤。一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用中药提取物，其中，所述提取物由上述方法提取得到的。上述中药提取物在制备具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用护肤制剂中的用途。一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用护肤制剂，其中，所述护肤制剂由上述中药提取物及护肤品领域常规辅料制成。一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用护肤组合物，其中，所述护肤组合物由a相和b相组成；所述a相和b相分别由下述重量百分比的原料组成：一种上述护肤组合物的制备方法，其中，所述方法包括如下步骤：(1)a相制备：将丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物加水浸润，加热至80～90℃，保温10～40min；降温，待温度降至60～65℃时加入对羟基苯乙酮，搅拌溶解；待温度冷却至室温，加入10％naoh，搅拌均匀；(2)b相制备：使用1，3-丙二醇、黄原胶和水将所述中药提取物复溶，配制成中药提取物溶液；(3)将所述b相与所述a相混合搅拌均匀，出料即可。上述方法制备得到的是面膜，利用本发明中药组合物及护肤品领域常规方法及辅料也可以制备得到其他剂型，如膏霜、爽肤水或乳液等。本发明中药组合物采用醇提法进行提取，醇提法为发明人推荐的最佳提取方法，但不限于醇提，其他中药学领域公知的提取方法也可以提取，如水提等。提取溶剂的极性仅决定提取有效成分的提取率高低，并不影响提取物有效成分实现本发明所述功效，其他提取方法得到的提取物也可以起到本发明所述功效。本发明制备的面膜推荐使用方法为：洁面后敷用面膜15～20分钟后，拍干或水洗均可。本发明的有益结果：本发明所提供的中药提取物外用对非酶糖基化早期及中期产物具有较佳的抑制作用。2％浓度下抑制效果明显优于阳性药氨基胍。本发明提取物在低浓度情况下对脂质过氧化反应中成纤维细胞终产物丙二醛mda有较佳的抑制作用。志愿者人体实验显示，本发明提取物制备得到的面膜对面部皮肤红的程度显著增加，黄的程度显著下降，具有较佳的祛黄效果，并且对皮肤光泽色泽具有一定的改善。附图说明图1为组方筛选中四个组方冻干粉总黄酮含量；图2为组方筛选中四个组方dpph自由基清除能力图；图3为组方筛选中四个组方体外抑制非酶糖基化能力；图4为作为本发明中药组合物的冻干粉实拍图。具体实施方式本实施例所用药材均可以从中国药材集团公司购买得到，符合中华人民共和国药典2010版标准。其他原料均可通过市售购买获得，本发明使用原料的来源见表1，本发明所用的仪器名称及厂家见表2。表1表2名称型号厂家恒温水浴锅hh·s1-m北京长安科学仪器厂高速多功能粉碎机jp-400b-8永康市九品工贸有限公司智能控温加热搅拌器szcl巩义市予华仪器有限公司旋转蒸发器re-2000上海亚荣生化仪器厂循环水式真空泵shb-ⅲ郑州长城科工贸有限公司实施例1本发明中药组合物的制备(1)按照下述配比称取原料药，依次粉碎后过10目筛，混匀；陈皮20g、炙甘草20g、紫苏20g、草豆蔻20g、草果20g(2)用体积百分比为80％乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/ml为1：30，超声提取30分钟得提取液；(3)将步骤(2)得到的提取液过0.45μm滤纸真空抽滤，得滤液；(4)将所得滤液旋转蒸发乙醇浓缩至原体积的10％，得浓缩物；(5)将浓缩物冷冻干燥，即得中药提取物冻干粉。实施例2本发明中药组合物的制备(1)按照下述配比称取原料药，依次粉碎后过10目筛，混匀；陈皮20g、炙甘草30g、紫苏10g、草豆蔻20g、草果30g(2)用体积百分比为60％乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/ml为1：10，超声提取40分钟得提取液；(3)将步骤(2)得到的提取液过0.45μm滤纸真空抽滤，得滤液；(4)将所得滤液旋转蒸发乙醇浓缩至原体积的8％，得浓缩物；(5)将浓缩物冷冻干燥，即得中药提取物冻干粉。实施例3本发明中药组合物的制备(1)按照下述配比称取原料药，依次粉碎后过10目筛，混匀；陈皮20g、炙甘草20g、紫苏30g、草豆蔻30g、草果10g(2)用体积百分比为90％乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/ml为1：20，超声提取40分钟得提取液；(3)将步骤(2)得到的提取液过0.45μm滤纸真空抽滤，得滤液；(4)将所得滤液旋转蒸发乙醇浓缩至原体积的10％，得浓缩物；(5)将浓缩物冷冻干燥，即得中药提取物冻干粉。实施例4本发明中药组合物的制备(1)按照下述配比称取原料药，依次粉碎后过10目筛，混匀；陈皮30g、炙甘草10g、紫苏20g、草豆蔻30g、草果20g(2)用体积百分比为80％乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/ml为1：40，超声提取40分钟得提取液；(3)将步骤(2)得到的提取液过0.45μm滤纸真空抽滤，得滤液；(4)将所得滤液旋转蒸发乙醇浓缩至原体积的15％，得浓缩物；(5)将浓缩物冷冻干燥，即得中药提取物冻干粉。实施例5本发明中药组合物的制备(1)按照下述配比称取原料药，依次粉碎后过10目筛，混匀；陈皮10g、炙甘草25g、紫苏25g、草豆蔻10g、草果25g(2)用体积百分比为80％乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/ml为1：50，超声提取20分钟得提取液；(3)将步骤(2)得到的提取液过0.45μm滤纸真空抽滤，得滤液；(4)将所得滤液旋转蒸发乙醇浓缩至原体积的10％，得浓缩物；(5)将浓缩物冷冻干燥，即得中药提取物冻干粉。实施例6本发明面膜的制备组分及用量见表3：表3制备方法(1)a相制备：将丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物加水浸润，加热至85℃，保温30min；降温，待温度降至65℃时加入对羟基苯乙酮，搅拌溶解；待温度冷却至室温，加入10％naoh，搅拌均匀；(2)b相制备：使用b相中的1，3-丙二醇、黄原胶和水将实施例1制备冻干粉复溶，配制成中药提取物溶液；(3)将所述b相与所述a相混合搅拌均匀，出料；(4)将步骤(3)制备好的面膜液分装，封口即得。实施例7本发明面膜的制备组分及用量见表4：表4制备方法(1)a相制备：将丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物加水浸润，加热至80℃，保温10min；降温，待温度降至60℃时加入对羟基苯乙酮，搅拌溶解；待温度冷却至室温，加入10％naoh，搅拌均匀；(2)b相制备：使用b相中的1，3-丙二醇、黄原胶和水将实施例2制备冻干粉复溶，配制成中药提取物溶液；(3)将所述b相与所述a相混合搅拌均匀，出料；(4)将步骤(3)制备好的面膜液分装，封口即得。实施例8本发明面膜的制备组分及用量见表5：表5制备方法(1)a相制备：将丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物加水浸润，加热至90℃，保温40min；降温，待温度降至60℃时加入对羟基苯乙酮，搅拌溶解；待温度冷却至室温，加入10％naoh，搅拌均匀；(2)b相制备：使用b相中的1，3-丙二醇、黄原胶和水将实施例3制备冻干粉复溶，配制成中药提取物溶液；(3)将所述b相与所述a相混合搅拌均匀，出料；(4)将步骤(3)制备好的面膜液分装，封口即得。实施例9本发明面膜的制备组分及用量见表6：表6制备方法(1)a相制备：将丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物加水浸润，加热至90℃，保温25min；降温，待温度降至60℃时加入对羟基苯乙酮，搅拌溶解；待温度冷却至室温，加入10％naoh，搅拌均匀；(2)b相制备：使用b相中的1，3-丙二醇、黄原胶和水将实施例4制备冻干粉复溶，配制成中药提取物溶液；(3)将所述b相与所述a相混合搅拌均匀，出料；(4)将步骤(3)制备好的面膜液分装，封口即得。本发明功效实验一、配方取得现有技术对于如何进行植物原料的组合难以阐明，本发明通过数据分析的方法，根据层次聚类分析结果提取出本发明新方，经提取制备及工艺优化后，经体外生化实验、细胞实验、志愿者试用，证明具有较好的抗非酶糖基化、抗脂质过氧化及祛黄效果。具体阐述如下：检索数据库：根据检索关键词对关联“面色黄”、“面黄”、“面色萎黄”、“面尘”、“(面色)黎黑”、“(面色)皯黯”、“皯黑曾”进行检索。第一轮检索后纳入254首方剂。第二轮遴选，剔除因重病大病导致的面黄(肌瘦)，保留的方剂以保养补剂为主，最终余留方剂84首。根据上述方剂原料及中医“君臣佐使原则”取得新方——陈皮：炙甘草：紫苏：草豆蔻：草果＝1:1:1:1:1。通过对相关功效药物频次的总结获得相同功效的三个经验方，分别是：四君子汤、当归补血汤、小建中汤，三个经验方的原料及配比如下。四君子汤——人参：白术：茯苓：甘草＝9：9：9：6；当归补血汤——黄芪：当归＝5：1；小建中汤——桂枝：甘草；大枣：白芍＝9：6：6：18将本发明配方(实施例1配方)和三个经验方按照相同方法制备：本发明配方和三个经验方涉及所有药材依次粉碎后过10目筛。考虑到中药方剂多采用水煎煮的方式，采取热水浴提取。统一条件为料液比1:15，浸泡1小时后，80摄氏度水浴提取2小时。经0.45μm孔径的滤纸过滤后，旋转蒸发浓缩至原体积的约十分之一，经24小时冷冻干燥，制得四组样品的冻干粉。在对四个方剂进行同一条件提取制备后，以dpph自由基清除能力、非酶糖基化反应抑制能力以及总黄酮的含量对四个方剂组合进行评价。1.总黄酮含量检测：(1)检测方法：组合物总黄酮的测定采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法。精密称取芦丁对照品0.1g，100ml容量瓶中用体积分数为75％的乙醇溶解，定容，溶液质量浓度为1.0g/l。分别取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml于10ml容量瓶，用75％的乙醇稀释至容量瓶刻度，制得质量浓度为0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/ml的对照品溶液。分别取1ml不同浓度的芦丁对照品溶液依照次序加入4ml去离子水、0.3ml质量分数为5％的亚硝酸钠水溶液，5min后加入0.3ml质量分数为10％的硝酸铝水溶液，6min后加入2ml质量分数为1mol/l的氢氧化钠水溶液，2.4ml去离子水，10min后510nm下测定吸光值，以75％乙醇作为空白对照。纵坐标作为吸光值，芦丁对照品浓度为横坐标，绘制标准曲线。制得标准曲线方程为：y＝0.7099x-0.0135r2＝0.9996(y值为吸光度，x值为加样质量浓度)。分别取四组提取物冻干粉加去离子水配制成溶液，按照上述步骤操作测定吸光度，实验重复3次。根据标准曲线方程计算复溶后液体的总黄酮浓度。冻干粉中总黄酮的含量(％)＝c/n×100％。其中c为待测液中总黄酮的浓度，n为稀释倍数(由料液比计算)。(2)检测结果：由图1可见，本发明提取物冻干粉总黄酮含量较于三组经方高出约三到六倍。发明人利用本发明其他实施例制备得到的冻干粉重复上述实验，结论相同，在此不赘述。2.dpph自由基清除能力检测(1)检测方法：dpph乙醇溶液的配制:准确称取20mgdpph，250ml容量瓶中使用无水乙醇进行溶解并定容，得2×10-4mol/ldpph乙醇溶液，0-4℃下避光保存，现配现用。0.01％vc水溶液配制：准确称取25mgvc，加入去离子水溶解定容250ml容量瓶中，配制质量分数为0.01％的维生素c水溶液，现配现用，作为阳性对照。反应体系：a管：等体积(750μl)的样品液与dpph溶液混匀；b管：等体积的无水乙醇(750μl)与dpph溶液混匀；c管：等体积(750μl)的样品液与无水乙醇混匀；以0.01％vc作为阳性对照，蒸馏水作为阴性对照，无水乙醇作为空白对照，每个样品三组平行。避光反应30min后，在517nm下测定各管吸光度。清除率＝[(b c)-a]/b*100％(2)检测结果：通过四组冻干粉dpph自由基清除能力的测定，结果如图2所示，本发明配方的抗氧化能力最佳，其次为小建中汤，经检验，显著高于四君子汤和当归补血汤。发明人利用本发明其他实施例制备得到的冻干粉重复上述实验，结论相同，在此不赘述。3.体外抑制非酶糖基化能力检测(1)检测方法：a.试剂准备实验前高压蒸汽灭菌实验耗材及溶剂。反应液配制：量取50mlpbs，依次加入0.5g牛血清蛋白，2.7g葡萄糖，溶解混匀，0.2μm滤膜过滤除菌备用。待测样品液配制：灭菌水配制，0.2μm滤膜过滤除菌，梯度稀释为2％、1％、0.5％三个浓度。盐酸氨基胍溶液配制：灭菌水配制，0.2μm滤膜过滤除菌，梯度稀释为2％、1％、0.5％三个浓度，作为阳性对照。b.反应体系，见下表表7各组反应体系配制表组别v(pbs)/mlv(反应液)/mlv(待测样品)/mlv(氨基胍)/ml样品组(a1)-0.750.75-样品本底(a2)0.75-0.75-空白对照组(a0)0.750.75--阳性对照(b)-0.75-0.75阳性药空白(c)0.75--0.75恒温水浴锅37℃避光孵育7天，然后在激发波长370nm，发射波长440nm条件下检测荧光强度。每个样品及对照做3组平行，以平均值作为实验结果。抑制率＝[1－(a1－a2)/a0]×100％(2)检测结果：通过四组配方冻干粉的体外抑制非酶糖基化实验可见，如图3所示，在实验的三个浓度下，本发明配方的糖基化抑制能力最强，在1.0％浓度下与临床证明有效的阳性药氨基胍基本持平，在2.0％的浓度下效果更优。发明人利用其他实施例制备得到的冻干粉重复上述实验，结论相同，在此不赘述。综上所述，四组方剂提取物冻干粉中，本发明配方具有最高的总黄酮含量、最佳的糖基化抑制和自由基清除能力。依此确定在四组方剂提取物中最优组合物为本发明配方。接下来对最优的本发明配方进行制备工艺的优化。二、本发明配方提取工艺优化1.根据提取后黄酮含量进行优化，结果如下：表8本发明配方优化单因素实验结果由上表可见，60％～90％浓度的乙醇溶液、超声20min～40min、料液比1:10～1:40附近时，对组合物进行提取，黄酮的得率均较高，符合本发明工业化应用要求。2.在以上基础上进行正交实验正交实验以黄酮含量和非酶糖基化反应抑制能力作为参考指标，分别以30％和70％的权重计入综合评分，即：综合评分y＝(y1/y1max×0.3 y2/y2max×0.7)×100表9提取工艺优化正交实验表由上可知，最佳提取条件为90％乙醇溶液、料液比1:40、超声提取30分钟。料液比1:30与1:40差距较小，不同超声时间差异较小且对总的影响较小，综合实验结果和降低消耗原则，确定最佳提取工艺为：体积分数80％的乙醇溶液，料液比1:30，超声提取30min。经0.45μm孔径的滤纸过滤后，旋转蒸发浓缩至原体积的约十分之一，经24小时冷冻干燥，制得新方样品的冻干粉。实拍图见图4所示，本发明制备得到的冻干粉为紫褐色干燥粉状，具有特征性气味。三、本发明组合物对体外非酶糖基化早期、中期反应的影响实验意义：对体外非酶糖基化早期、中期反应的抑制可有效抑制ages的产生，ages为不可代谢产物，因此对ages的抑制主要以早期及中期抑制最为显效。1.实验准备(1)试剂准备a.实验前高压蒸汽灭菌实验耗材及溶剂。b.反应液配制：量取50mlpbs，依次加入0.5g牛血清蛋白，2.7g葡萄糖，溶解混匀，0.2μm滤膜过滤除菌备用。c.待测样品液配制：灭菌水配制，0.2μm滤膜过滤除菌，梯度稀释样品冻干粉为2％、1％、0.5％三个浓度。样品冻干粉由本发明实施例1制备。d.盐酸氨基胍溶液配制：灭菌水配制，0.2μm滤膜过滤除菌，梯度稀释为2％、1％、0.5％三个浓度，作为阳性对照。(2)反应体系表10各组反应体系配制表恒温培养箱37℃避光孵育，amadori产物的测定孵育24h，蛋白质羰基的测定孵育72h。2.非酶糖基化早期amadori产物的测定在非酶糖基化反应早期，葡萄糖与白蛋白及其它血清蛋白分子n末端的氨基发生反应，形成高分子酮胺结构(果糖胺)。此结构能够在碱性环境中与氯化硝基四氮唑蓝nbt发生还原反应，生成紫色的甲臜。在530nm处测定其吸光度，计算其含量，得到糖化反应过程中早期amadori产物的水平。经测，未干预的空白对照组含有1.1147mg/ml的果糖胺，使用本发明和阳性药氨基胍干预的结果如下表。表11糖基化早期抑制能力结果可见，低浓度时本发明的抑制能力低于氨基胍。随浓度的提高，本发明对非酶糖基化早期反应的抑制能力逐渐提高，2％浓度抑制能力明显优于氨基胍。发明人利用其他实施例制备得到的冻干粉重复上述实验，结论相同，在此不赘述。3.非酶糖基化中期蛋白质羰基含量的测定反应中期考察蛋白质羰基含量。蛋白质羰基是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，其含量的高低与蛋白质氧化损伤程度的大小相关联，是衡量蛋白质氧化损伤的主要指标。羰基可与2.4-二硝基苯肼反应生成红棕色的腙类物质，370nm处具有特征吸收峰，测定其吸光度计算得到羰基含量。经测，未干预的空白对照组含有1.4251mg/ml的总羰基，使用本发明和阳性药氨基胍干预的结果如下表。表12糖基化中期抑制能力结果可见，低浓度时本发明对非酶糖基化中期反应的抑制能力较差，1％浓度时与阳性药氨基胍基本持平，2％浓度时已有较佳的优于氨基胍的抑制能力。发明人利用其他实施例制备得到的冻干粉重复上述实验，结论相同，在此不赘述。四.组合物对成纤维细胞mda的影响脂褐素(lipofuscin)又被称老年素，是沉积在衰老的组织细胞中的呈黄褐色的不规则小体，体积和形态随着生物体年龄及所在器官而异。过量的自由基将不饱和脂肪酸氧化成过氧化脂质，其终产物丙二醛(mda)有很强的交联性质，它与含游离的氨基的磷脂、蛋白质、核酸等生物大分子交联，形成难溶的具有荧光性的schiff碱(rn＝ch-ch＝nhr)，即脂褐素。脂褐素难溶于水，不易被代谢排出。随着年龄的增长，在细胞内含量增加且有富集和体积增大的趋势，颜色变得更暗，使得皮肤愈加暗黄。非酶糖基化、脂质过氧化和氨基酸代谢及其他一些反应过程中产生的活性羰基化化合物，与蛋白质的氨基酸残基发生羰-氨交联反应。对脂质过氧化反应的抑制能力也是抗糖化能力实验体系中常用的，故测定组合物对成纤维细胞mda的影响。铺板：取对数生长期的hdf真皮成纤维细胞，以4×105cells/ml接种于6孔培养板，每孔2ml。加药：细胞培养7小时后，分别加入经由新鲜培养基稀释的本发明实施例1制备的冻干粉。细胞前处理：孵育时间24h后，吸出培养液，在细胞沉淀中加入500μlpbs，轻轻颠倒混匀，4摄氏度下2000rmp离心10min，弃去上清保留沉淀。再加入500μlpbs，超声400a、5s/次、间隙10s反复3～5次破碎细胞，制备成细胞匀浆。后续试验方法参照试剂盒所示，试剂盒为南京建成生物工程研究所生产的细胞丙二醛(mda)测定试剂盒。蛋白浓度标准曲线：y＝1.2879x-0.0845r2＝0.996。mda抑制率具体见下表。表13成纤维细胞mda抑制率组合物浓度(％)mda浓度(nmol/mgprot)抑制率(％)0.10.2535.400.050.2144.780.0250.2048.260.01250.3215.8000.380结果显示，本发明对成纤维细胞胞内脂质过氧化有较佳的抑制作用。发明人利用其他实施例制备得到的冻干粉重复上述实验，结论相同，在此不赘述。五.本发明组合物对面部皮肤祛黄效果考察样品：采用贴片式面膜剂型考察本发明功效性，面膜为实施例6制备。志愿者选择：符合2007年《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》纳入、排除标准。30例志愿者使用面膜前后皮肤色泽数据平均值结果如下表所示。表14添加组合物的面膜使用效果表征皮肤黄蓝色相的b值有先升高后降低的趋势，且低于初始值。因组合物复溶液及制备的面膜液均为棕黄色液体，且面膜敷用后拍干不清洗，故推测即时b值因面膜液颜色影响而有提高，吸收后b值下降。表征皮肤色度的ita值，皮肤的光泽度在使用面膜4h后均有一定提高。使用面膜前后不同时间，志愿者皮肤的l*、ita、光泽度值间并没有显著差异；志愿者皮肤的a*值(表征红绿色相)间有显著差异。进一步做两两使用后对比，使用面膜后即时与敷用面膜后2小时、4小时的a*间存在显著性差异，显著性p2h＝0.014，p4h＝0.008。表征皮肤黄蓝色相的b*值间存在显著差异，使用面膜后即时与敷用面膜后4小时的b*值间存在显著性差异，p4h＝0.030。即添加本发明提取物的面膜使使用者皮肤红的程度显著增加，黄的程度显著下降。发明人利用其他实施例制备得到的面膜重复上述实验，结论相同，在此不赘述。综上结果，本发明在非酶糖基化反应早期中期均有较好的抑制作用，随浓度的增高更显著，在2％浓度下优于氨基胍；本发明对成纤维细胞脂质过氧化的抑制有一定作用；人体实验显示本发明组合物对皮肤的光泽色泽均有一定的改善作用。当前第1页1 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技术特征：1.一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用中药组合物，其特征在于所述外用中药组合物由下述重量份配比的原料药制成：
陈皮10～30、炙甘草10～30、紫苏10～30、草豆蔻10～30、草果10～30。
2.一种权利要求1所述的外用中药组合物的制备方法，其特征在于所述制备方法步骤如下：
(1)按照权利要求1所述重量份配比称取原料药，依次粉碎后过10目～100目筛，混合均匀；
(2)用体积百分比为60％～90％乙醇提取，原料药与乙醇质量体积比g/ml为1：10～1：50，超声提取20～40分钟得提取液；
(3)将步骤(2)得到的提取液过滤，得滤液；
(4)将所得滤液旋转蒸发浓缩至原体积的8％～15％，得浓缩物；
(5)将浓缩物冷冻干燥，即得。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中乙醇的体积百分比为80％～90％，原料药与乙醇质量体积比g/ml为1：30～1：40。
4.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中过滤为0.45μm滤纸真空抽滤。
5.一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用中药提取物，其特征在于：所述外用中药提取物由权利要求2至4中任意一项所述方法提取得到。
6.权利要求5所述外用中药提取物在制备具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用护肤制剂中的用途。
7.一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用护肤制剂，其特征在于：所述外用护肤制剂由权利要求5所述外用中药提取物及护肤品领域常规辅料制成。
8.一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用护肤组合物，其特征在于：所述外用护肤组合物由a相和b相组成；所述a相和b相分别由下述重量百分比的原料组成：
9.一种权利要求8所述外用护肤组合物的制备方法，其特征在于所述制备方法包括如下步骤：
(1)a相制备：将丙烯酸(酯)类/c10-30烷醇丙烯酸酯交联聚合物加水浸润，加热至80～90℃，保温10～40min；降温，待温度降至60～65℃时加入对羟基苯乙酮，搅拌溶解；待温度冷却至室温，加入10％naoh，搅拌均匀；
(2)b相制备：使用1，3-丙二醇和黄原胶将权利要求5所述外用中药提取物复溶，其他用水补足，配制成中药提取物溶液；
(3)将所述b相与所述a相混合搅拌均匀，出料即可。
10.一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的面膜，其特征在于：所述面膜由权利要求9所述方法制备得到。
技术总结本发明公开了一种具有抑制皮肤非酶糖基化功效的外用中药组合物，所述中药组合物由下述重量份配比的原料药制成：陈皮10～30、炙甘草10～30、紫苏10～30、草豆蔻10～30、草果10～30。本发明中药提取物外用对非酶糖基化早期及中期产物具有较佳的抑制作用。2％浓度下抑制效果明显优于阳性药氨基胍。本发明提取物在低浓度情况下对脂质过氧化反应中成纤维细胞终产物丙二醛MDA有较佳的抑制作用。志愿者人体实验显示，本发明提取物制备得到的面膜对面部皮肤红的程度显著增加，黄的程度显著下降，具有较佳的祛黄效果，并且对皮肤光泽色泽具有一定的改善。
技术研发人员：董银卯;易帆;孟宏;李丽;王诗旖
受保护的技术使用者：北京工商大学
技术研发日：2019.09.12
技术公布日：2021.03.12
