本发明涉及生物
技术领域：
，更具体的说是涉及一种粪菌冻干保护剂及其在粪菌移植中的应用。
背景技术：
：粪菌移植(fmt)是指将健康人粪便中的功能菌群，移植到患者胃肠道内，重建新的肠道菌群，实现肠道及肠道外疾病的治疗。粪菌移植作为重建肠道菌群的有效手段，已用于难辨梭状芽孢杆菌感染、炎症性肠病、顽固性便秘、代谢病、肠道免疫缺陷、肠道过敏等多种菌群相关性疾病的治疗和探索性研究，并被认为是近年的突破性医学进展。菌群离开肠道后，其所处环境即发生变化，其活性会受到影响。影响粪菌有效性的因素很多，比如样本的收集、运输、均质化、保存和二次取样等。为了保证临床移植的治疗效果，需采用一种有效的保存方法和手段来维持肠道菌群的活性。在微生物的众多保存方法中，冷冻保存法和冷冻干燥保存法是公认的长期保存微生物菌种最安全、可靠的方法。大部分的移值方式多以结肠镜灌注为主，少量通过鼻饲方式从空肠等部位灌入。这种方式需要安装灌入导管，造成操作不便的同时，可能损伤脆弱的人体腔内粘膜。由此造成的不良事件，也屡见报道。冻干粉的制备，可避免移植方式的器械介入，减少给药的体积与重量，便于运输和储存。因此，提供一种粪菌冻干保护剂及其在粪菌移植中的应用是本领域技术人员亟需解决的问题。技术实现要素：有鉴于此，本发明提供了一种粪菌冻干保护剂及其在粪菌移植中的应用，能够更好的保护肠道菌群的活性和提高粪菌冻干存活率。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：5％-15％海藻糖，5％-25％可食用物质，余量为无菌水；所述可食用物质为甘露醇、蔗糖、麦芽糊精、脱脂奶粉、玉米淀粉中的至少一种。进一步，一种粪菌冻干保护剂的应用，将10％-40％粪菌和60％-90％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干18-36h，获得粪菌冻干粉。进一步，所述粪菌的制备方法如下：将健康供者新鲜粪便样本50-200g，浸泡于200-1000ml的0.9％无菌生理盐水中，使用粪便分析前处理仪对其进行处理，离心与洗涤后，获得粪菌。进一步，粪菌冻干保护剂在粪菌移植中的应用。经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种粪菌冻干保护剂及其在粪菌移植中的应用，采用可食用物质，经过合理组方，能够稳定冻干粉中微生物的存活率，可以保护肠道菌群的活性；采用冻干粉技术，便于菌群移植的实施，操作方便。具体实施方式下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。前期准备制备粪菌：将健康供体新鲜粪便样本100g，浸泡于500ml的0.9％无菌nacl溶液中，使用粪便分析前处理仪对其进行处理，获得原始菌液；将原始菌液以8000g，离心15min，弃去上清；沉淀加入2倍生理盐水，混匀均匀后，以8000g，离心15min，弃去上清；重复洗涤5次，获得粪菌。实施例1一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：5％海藻糖，5％甘露醇，余量为无菌水。将10％粪菌和90％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干30h，获得粪菌冻干粉。实施例2一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：10％海藻糖，15％蔗糖，余量为无菌水。将10％粪菌和90％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干32h，获得粪菌冻干粉。实施例3一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：15％海藻糖，25％麦芽糊精，余量为无菌水。将10％粪菌和90％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干34h，获得粪菌冻干粉。实施例4一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：5％海藻糖，5％脱脂奶粉，余量为无菌水。将25％粪菌和75％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干36h，获得粪菌冻干粉。实施例5一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：10％海藻糖，15％玉米淀粉，余量为无菌水。将25％粪菌和75％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干28h，获得粪菌冻干粉。实施例6一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：15％海藻糖，10％甘露醇，15％蔗糖，余量为无菌水。将25％粪菌和75％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干26h，获得粪菌冻干粉。实施例7一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：5％海藻糖，5％麦芽糊精，余量为无菌水。将40％粪菌和60％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干24h，获得粪菌冻干粉。实施例8一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：10％海藻糖，10％脱脂奶粉，5％玉米淀粉，余量为无菌水。将40％粪菌和60％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干20h，获得粪菌冻干粉。实施例9一种粪菌冻干保护剂，按重量百分比计，由以下组分组成：15％海藻糖，10％蔗糖，10％麦芽糊精，5％脱脂奶粉，余量为无菌水。将40％粪菌和60％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干18h，获得粪菌冻干粉。试验例1分别测定粪菌和实施例1-9制备的粪菌冻干粉的活菌率，结果见表1。本发明采用流式细胞仪进行活菌率的测定。(1)梯度稀释：将样品制备10倍系列稀释样品匀液，选取10-4进行实验。(2)染色、孵育与检测：将样品稀释液与染液，充分混匀后，置于暗盒常温孵育15min，半小时内进行流式细胞仪检测。表1活菌率试验例2将实施例5制备得到的粪菌冻干粉，置于-20℃条件，按相应时间节点(0天，1周，2周，3周，1月，2月和3月)，采用流式细胞仪进行活菌率测定，结果见表2。表2活菌率时间节点活菌率(％)0天81.1±1.451周83.3±2.012周80.5±1.783周81.0±1.661月79.2±1.962月79.6±1.413月80.3±1.73表2结果表明，冻干粉活菌率在3个月内，稳定在80％左右。对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种粪菌冻干保护剂，其特征在于，按重量百分比计，由以下组分组成：5％-15％海藻糖，5％-25％可食用物质，余量为无菌水；所述可食用物质为甘露醇、蔗糖、麦芽糊精、脱脂奶粉、玉米淀粉中的至少一种。
2.权利要求1所述的一种粪菌冻干保护剂的应用，其特征在于，将10％-40％粪菌和60％-90％冻干保护剂混匀，获得粪菌液；将粪菌液冻干18-36h，获得粪菌冻干粉。
3.根据权利要求2所述的一种粪菌冻干保护剂的应用，其特征在于，所述粪菌的制备方法如下：将健康供者新鲜粪便样本50-200g，浸泡于200-1000ml的0.9％无菌生理盐水中，使用粪便分析前处理仪对其进行处理，离心与洗涤后，获得粪菌。
4.权利要求1-3任一项所述的一种粪菌冻干保护剂在粪菌移植中的应用。
技术总结本发明公开了一种粪菌冻干保护剂及其在粪菌移植中的应用，属于生物技术领域。本发明公开的一种粪菌冻干保护剂，由以下组分组成：5％‑15％海藻糖，5％‑25％可食用物质，余量为无菌水。本发明采用可食用物质，经过合理组方，能够稳定冻干粉中微生物的存活率，可以保护肠道菌群的活性；采用冻干粉技术，便于菌群移植的实施，操作方便。
技术研发人员：张召;马燕;施琬;陈涛
受保护的技术使用者：佛山市朗芯生物科技有限公司;广东南芯医疗科技有限公司
技术研发日：2020.12.09
技术公布日：2021.03.12
