本领域涉及一种止血复合物，是一种外用的快速的止血干粉材料。
背景技术：
：意外出血以及外科出血，处理不当会引起休克甚至导致死亡。失血过多引起的临床病例占很大比例，止血是处理的核心环节，良好的止血技术是这一环节的成功保障。止血材料的研制和改进已成为当代医药领域的研究热点，随着医疗技术的进步，新型医用材料及相关技术得到了良好的发展。有效止血材料是采用生物相容性好的可吸收性材料止血，安全性高，不过敏，不刺激。目前，市场上的止血材料主要有纤维蛋白胶类、胶原蛋白类、氧化纤维素类止血纱布、壳聚糖类止血海绵、淀粉多糖类或壳聚糖止血粉等。这些材料在动物实验及临床应用中都取得了不错的效果，但也存在一些不足，明胶吸收慢增加伤口的感染风险，动物源性异种蛋白具有潜在的致敏性，纤维素类材料降解时间长、粘附性差，可能引起再出血，美国medafor公司生产的arista可吸收性淀粉止血微球制备工艺较复杂，价格昂贵，普及难度大，纯壳聚糖材料止血作用有限，对于出血量大的伤口，其黏附性较差和止血较慢。因此，研制快速止血、无动物源性、较好的生物相容性、无毒等特点的新型止血材料成为止血材料发展的必然。淀粉生物相容性好、可降解、可再生、价格低廉广泛用于医疗领域。淀粉代谢机制明确，制备可生物吸收型淀粉微球，定量添加人重组组织因子脂化物，具有生物相容性好，止血时间短的特点，值得开发成止血敷料。本专利以淀粉微球为基础结合人重组组织因子脂化物制备的止血材料，开发使用方便，效果显著，是凝血时间短的理想止血敷料。技术实现要素：本发明目的是为克服上述已有技术的不足，提供一种在淀粉微球基础上定量添加人重组组织因子脂化物，具有生物相容性好、止血时间短、效果好的复合止血材料及其制备方法，该方法制备工艺简单，有望广泛用于意外出血止血。本发明淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血材料制备方法包括如下步骤：（1）水相准备：将马铃薯淀粉加入到去离子水溶液中，控制马铃薯淀粉在去离子水中的质量比为15~20%，用naoh溶液调节ph值至8左右，加热至60~80℃，待淀粉溶解，冷却至室温；（2）油相准备：取乳化剂至于大豆油中，加热至60℃待完全溶解，冷却至室温；（3）乳化：将步骤（1）所得淀粉溶液，按照水相与油相溶液质量比为1:2.0~1:2.5的比例，缓慢加入步骤（2）制得的油相溶液中，充分搅拌，得到乳化混合液；（4）将引发剂加入上述步骤（3）得到的乳化混合液，继续充分搅拌，在引发剂的作用下，淀粉的羟基相互缩合，进行淀粉交联，最终形成含有淀粉微球的混合液；（5）将上述步骤（4）所得混合液经离心机分离取沉淀，依次用乙酸乙酯、乙醇清洗沉淀进一步干燥得到淀粉微球；（6）将上述步骤（5）得到的淀粉微球分散在适量无水1,4-二氧六环中，加入n,n'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯（dsc），在氮气保护、4℃和磁力搅拌条件下，dsc与淀粉微球反应10h后，淀粉微球表面羟基被dsc修饰；（7）将ph7.4伯瑞坦-罗宾森缓冲溶液加入至上述步骤（6）的反应液中，该缓冲溶液中加入体积分数为0.3~0.5%的人重组组织因子脂化物，继续在氮气保护、4℃和磁力搅拌12h后，离心机离心弃上清收集沉淀，依次用乙醇，去离子水清洗沉淀，真空干燥后获得最终产品淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血干粉材料。所述步骤（6）淀粉微球的质量为无水1,4-二氧六环质量的15-20%；dsc用量为淀粉微球质量的0.5~1%。所述步骤（7）中人重组组织因子脂化物与淀粉微球的比例为每克淀粉微球中加0.02毫升的人重组组织因子脂化物。所述真空干燥条件为0.17个大气压下40摄氏度6h。所述人重组组织因子脂化物是从太原博奥特生物技术有限公司购买。所述乳化剂为司盘60（span60），质量为大豆油质量的4-8%；或者吐温（tween60），质量为大豆油质量的9-10%。所述引发剂为环氧氯丙烷，加入质量为淀粉用量的6-7%；或者采用三偏磷酸钠，加入质量为淀粉用量的5-7%。马铃薯淀粉吸水能力强，通过淀粉微球化后，比表面积增加，吸水性能提高，同时还可以聚集血小板和血细胞，提高凝血。本发明制得的淀粉止血微球生物相容性好，其降解能力得到了显著的提升，大的比表面积还可增加α-淀粉酶的接触面积，有利于淀粉微球的降解。本发明将马铃薯淀粉通过反相微乳法制备成淀粉微球，并通过共价键合方式将组织因子与淀粉微球结合，相对物理吸附更加牢固，利用组织因子的启动凝血功能，快速激活凝血酶，结合淀粉微球集聚血小板和红细胞的物理作用，制备一种止血材料，实现快速凝血。在淀粉微球基础上定量添加人重组组织因子脂化物，具有生物相容性好、止血时间短、效果好功效，本发明方法制备工艺简单，有望广泛用于意外出血止血。附图说明图1为用本发明止血材料进行家兔皮肤刺激性实验24h和72h测试结果图。具体实施方式为了更清楚的说明本发明，下面结合优选实施例和附图对本发明做进一步的阐述。本领域技术人员应当理解，下面所具体描述的内容是说明性的而非限制性的，不应以此限制本发明的保护范围，还包括各具体实施方式间的任意组合，本领域普通技术人员通过阅读本发明说明书而对本发明技术方案采取的任何等效的变换，均为本发明的权利要求所涵盖。实施例一（1）水相准备，将马铃薯淀粉1.5g加入到8ml的去离子水溶液中，用naoh溶液调节ph值至8.0左右，加热至80℃，待淀粉溶解，冷却至室温。（2）油相准备，取1gspan60至于20ml大豆油中，加热至60℃待完全溶解，冷却至室温。（3）乳化，将步骤（1）所得淀粉溶液缓慢加入步骤（2）制得油相溶液中，充分搅拌。（4）加入三偏磷酸钠0.10g，完成淀粉交联，淀粉微球形成。（5）所述步骤（4）溶液，离心分离沉淀，依次用乙酸乙酯、乙醇清洗沉淀，干燥得到淀粉微球。（6）将步骤（5）所得淀粉微球1.5克分散在10ml无水的1,4-二氧六环溶液中，加入0.015gdsc，在n2保护、4℃、磁力搅拌10h后，淀粉微球表面被dsc修饰。（7）将10mlph7.4伯瑞坦-罗宾森缓冲溶液加入至步骤（6）的反应液中，该缓冲溶液含有体积分数0.3%人重组组织因子脂化物。继续在n2保护，4℃条件下反应12h，得到淀粉微球与人重组组织因子脂化物共价键合材料混合液，离心分离沉淀，依次用乙醇，去离子水清洗沉淀，经真空干燥获得淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血干粉材料。实施例二（1）马铃薯淀粉20g加入到100ml的去离子水溶液中，用naoh溶液调节ph值至8左右，加热至80℃，至淀粉溶解，冷却至室温。（2）取15gspan60至于240ml大豆油中，加热至60℃待完全溶解，冷却至室温。（3）将步骤（1）所得淀粉溶液缓慢加入步骤（2）制得油相溶液中，充分搅拌。（4）加入三偏磷酸钠1g，搅拌5h完成淀粉交联，淀粉微球形成。（5）所述步骤（4）溶液，离心分离沉淀，依次用乙酸乙酯、乙醇清洗沉淀，干燥得到淀粉微球。（6）将步骤（5）所得淀粉微球20克分散在100ml无水的1,4-二氧六环溶液中，加入0.2gdsc，在n2保护、4℃、磁力搅拌10h后，淀粉微球表面被dsc修饰。（7）将100mlph7.4伯瑞坦-罗宾森缓冲溶液加入至步骤（6）反应溶液中，该缓冲溶液含有体积分数0.5%人重组组织因子脂化物。继续在n2保护，4℃条件下反应12h，得到淀粉微球与人重组组织因子脂化物共价键合材料溶液，离心分离沉淀，依次用乙醇，去离子水清洗沉淀，经真空干燥获得淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血干粉材料。测试1：针对上述实施例所制备的止血材料进行体外全血凝固时间测试：分别称取本发明实施例一制备的止血材料、实施例二制备的止血材料和同样数量的土豆淀粉做对比，均匀撒于1cm2无纺布上。分别量取0.5毫升的新鲜人血浆，滴到撒有符合止血材料的无纺布上。秒表记录血浆凝固时间。凝血时间和效果见表一，本发明制备的止血材料血液凝固时间明显短于土豆淀粉，止血效果良好（参见表1）。表1本发明止血材料体外全血凝固时间测试结果一栏表测试2：利用本发明实施例一制备的止血材料进行家兔皮肤刺激性实验来验证复合止血材料的生物相容性。实验材料：按照实施例一制得的复合止血材料、无菌生理盐水、注射器、家兔。实验方法：精确称取复合止血材料，用生理盐水配制成5%、10%、20%的溶液。选用健康家兔两只，实验开始前正常饲养3天，以使动物适应环境，在实验前剃除兔子脊部脊柱两侧的被毛，作为注射区进行观察。在脊柱左侧设4个点进行皮内注射，右侧相同位置处做平行对照，每个点注射0.1ml注射液，对照组注射0.1ml无菌生理盐水，在24h，48h和72h观察记录各注射部位状况。实验结果：本发明止血材料对家兔皮肤无刺激，具有良好的生物相容性（参见图1、表2）。表2.本发明实施例一制备的止血材料家兔皮肤刺激性实验测试结果一栏表组别添加量（ml）现象对照组（无菌生理盐水）0.1无红肿和红斑出现止血材料5%溶液0.1无红肿和红斑出现止血材料10%溶液0.1无红肿和红斑出现止血材料20%溶液0.1无红肿和红斑出现当前第1页1 2 3
技术特征：1.一种淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血材料制备方法，其特征是包括如下步骤：
（1）水相准备：将马铃薯淀粉加入到去离子水溶液中，控制马铃薯淀粉在去离子水中的质量比为15~20%，用naoh溶液调节ph值至8左右，加热至60~80℃，待淀粉溶解，冷却至室温；
（2）油相准备：取乳化剂至于大豆油中，加热至60℃待完全溶解，冷却至室温；
（3）乳化：将步骤（1）所得淀粉溶液，按照水相与油相溶液质量比为1:2.0-1:2.5的比例，缓慢加入步骤（2）制得的油相溶液中，充分搅拌，得到乳化混合液；
（4）将引发剂加入上述步骤（3）得到的乳化混合液，继续充分搅拌，在引发剂的作用下，淀粉的羟基相互缩合，进行淀粉交联，最终形成含有淀粉微球的混合液；
（5）将上述步骤（4）所得混合液经离心机分离取沉淀，依次用乙酸乙酯、乙醇清洗沉淀进一步干燥得到淀粉微球；
（6）将上述步骤（5）得到的淀粉微球分散在适量无水1,4-二氧六环中，加入n,n'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯dsc，在氮气保护、4℃和磁力搅拌条件下，dsc与淀粉微球反应10h后，淀粉微球表面羟基被dsc修饰；
（7）将ph7.4伯瑞坦-罗宾森缓冲溶液加入至上述步骤（6）的反应液中，该缓冲溶液中加入体积分数为0.3-0.5%的人重组组织因子脂化物，继续在氮气保护、4℃和磁力搅拌12h后，离心机离心弃上清收集沉淀，依次用乙醇，去离子水清洗沉淀，真空干燥后获得最终产品淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血干粉材料。
2.根据权利要求1所述的淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血材料制备方法，其特征是所述乳化剂为司盘60（span60），质量为大豆油质量的4~8%；或者吐温（tween60），质量为大豆油质量的9~10%。
3.根据权利要求1或2所述的淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血材料制备方法，其特征是所述引发剂为环氧氯丙烷，加入质量为淀粉用量的6~7%；或者采用三偏磷酸钠，加入质量为淀粉用量的5~7%。
4.根据权利要求1或2所述的淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血材料制备方法，其特征是所述淀粉微球的质量为无水1,4-二氧六环质量的15-20%；dsc用量为淀粉微球质量的0.5-1%。
5.根据权利要求1或2所述的淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血材料制备方法，其特征是所述人重组组织因子脂化物与淀粉微球的比例为每克淀粉微球中加0.02毫升的人重组组织因子脂化物。
6.根据权利要求1或2所述的淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血材料制备方法，其特征是所述真空干燥条件为0.17个大气压下40摄氏度6h。
技术总结一种淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血材料制备方法，本发明将马铃薯淀粉溶解于去离子水后，与乳化后的大豆油按照水相与油相溶液质量比为1:2.0~1:2.5的比例混合，在引发剂作用下形成羟基相互缩合的淀粉微球；进一步将得到的淀粉微球分散在无水1,4‑二氧六环中，经N,N'‑二琥珀酰亚胺基碳酸酯（DSC）修饰后，加入人重组组织因子脂化物，通过共价键合方式将组织因子与淀粉微球结合，离心、清洗和真空干燥得到一种淀粉微球和人重组组织因子脂化物复合止血材料，利用组织因子的启动凝血功能，实现快速的凝血效果。
技术研发人员：芦冬涛;赵峰梅;李红霞;赵邑
受保护的技术使用者：山西省生物研究院有限公司
技术研发日：2020.12.16
技术公布日：2021.03.12
