本发明属于分子生物学与遗传育种领域，涉及到一组长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记及其在筛选高糖原个体中的应用。
背景技术：
1、长牡蛎（ crassostrea gigas），又称太平洋牡蛎（pacific oyster），其环境适应能力较强，生长速度较快，营养丰富，是我国北方主要的牡蛎养殖品种，同时也是世界上养殖范围最广、产量最高的经济贝类之一。近五年，牡蛎的养殖产量逐年增加，由2015年的457.34万吨增长到2022年的581.91万吨，一直位居海水养殖贝类首位，占全国海水养殖总量的25%左右。国内外对牡蛎市场需求量的增加，给予了牡蛎养殖产业优良的发展前景，也拉动了对牡蛎优良种质的需要。牡蛎是人类蛋白质的重要来源，糖原和脂肪则是牡蛎的主要能量储存成分。牡蛎中糖原含量约为20-40%，属长牡蛎重要的营养品质性状之一，其丰度与牡蛎风味相关。牡蛎中的糖原可直接被机体吸收，从而减轻胰腺负担，因此对糖尿病的防治十分有效。研究表明，从牡蛎中提取的多糖具有明显的降血压、抗凝血、抗血栓、提高肌体的免疫功能和抗白细胞下降等作用。此外，糖原作为牡蛎体内最直接有效的储能物质，是牡蛎能量代谢的主要来源，糖原的积累可以为牡蛎生殖腺的发育和配子形成提供能量。牡蛎生长于环境变化剧烈的潮间带区域，时常会受到盐度、温度、低氧等各种环境应激的胁迫。而糖原的积累能够为牡蛎抵御外界环境应激反应提供保障。很多软体动物中已经将糖原含量的降低作为重金属刺激和化学压力的一个重要生物学指标。
2、在长牡蛎的遗传改良过程中，营养品质性状是重要的衡量指标之一。其中，人工选育是培育生长速度较快、成活率高、营养品质高的长牡蛎良种的主要选育方法，但是这种传统的选育方法往往面临着周期长，成本高，且选择准确率低以及受环境等外界因素影响的问题，从而大大降低了长牡蛎遗传改良的进程。相较于传统的选育方法，分子标记辅助育种是目前广泛应用于动植物相关遗传性状改良过程中进行辅助选择的一种技术手段。主要是通过目的基因与遗传性状紧密连锁的分子标记，实现对性状的直接选择，从而极大地提高选育准确率，缩短选育进程。
技术实现思路
1、基于上述原因，本发明选取糖原含量差异较大但同属于巨蛎属的南方种熊本牡蛎以及北方种长牡蛎作为糖原差异材料，进行了全基因组重测序，获得了影响糖原含量的关键基因和snp分子标记位点，筛选出3个snp位点并得到最优组合，用于糖原含量的预测及指导长牡蛎糖原品质性状的辅助选育。
2、为了实现上述目的，本申请的第一个技术方案公开了一组长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记，包括gys1、gys2、gys3共计3个snp位点；
3、其中，gys1位于nc_047559.1号染色体第53765341位，突变类型为g/a；gys2位于nc_047559.1号染色体第53765479位，突变类型为t/g；gys3位于nc_047559.1号染色体第53766211位，突变类型为c/t；
4、其碱基序列如seq id no:1所示。
5、进一步的，3个snp位点上突变个体的糖原含量为 gys1，aa＞ag＞gg、gys2，gg＞gt＞tt、gys3，tt＞tc＞cc。
6、进一步的，3个snp分子标记位点上的优势基因型分别为：gys1，aa型、gys2，gg、gys3，tt型。
7、本申请的第二个技术方案公开了长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记的特异性引物对，所述引物对包括如序列表seq id no:2所示的正向引物，以及如序列表seq id no:3所示的反向引物。
8、本申请的第三个技术方案公开了第一技术方案所述长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记组合在筛选长牡蛎糖原品质性状育种中的应用，其可用于筛选高糖原含量的长牡蛎个体。
9、本申请的第四个技术方案公开了一种鉴定高糖原优势基因型牡蛎个体的筛选方法，包括如下步骤：
10、s1.提取长牡蛎个体的dna；
11、s2.利用长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记的特异性引物对扩增牡蛎dna序列；
12、s3.对扩增的牡蛎dna序列进行测序，确定在所述3个snp基因位点上的基因型；
13、s4.筛选含有两个以上优势基因型的纯合基因型为高糖原长牡蛎个体。
14、进一步的，所述扩增dna序列的方法为pcr扩增反应，反应程序为：95ºc下反应3min；95ºc下反应15 s，60ºc下反应20 s，72ºc下反应1 min，共35个循环，之后再在72ºc下反应5 min。
15、进一步的，所述优势基因型在gys1位点上为aa型、在gys2位点上为gg型、在gys3位点上为tt型。
16、本发明的有益效果为：
17、本发明通过对长牡蛎和熊本牡蛎的全基因组进行测序及比较分析，公开了与牡蛎糖原性状相关的3个snp分子标记位点，并确定了该位点组合上的优势基因型及优势基因型组合。将该snp分子标记组合用于牡蛎糖原含量的预测，可实现快速筛选鉴定高糖原含量牡蛎个体。并且，可在育种前通过无损取样检测亲本基因型，并选择目标基因型组合个体作为亲本，指导长牡蛎糖原品质性状的辅助选育，提高牡蛎高糖原性状个体筛选的便捷性和准确性。
1.一组长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记，其特征在于，包括gys1、gys2、gys3共计3个snp位点；
2.根据权利要求1所述长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记，其特征在于，3个snp位点上突变个体的糖原含量为gys1，aa＞ag＞gg、gys2，gg＞gt＞tt、gys3，tt＞tc＞cc。
3.根据权利要求1所述长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记，其特征在于，3个snp分子标记位点上的优势基因型分别为：gys1，aa型、gys2，gg、gys3，tt型。
4.一种与长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记的特异性引物对，其特征在于，所述引物对包括如序列表seq id no:2所示的正向引物，以及如序列表seq id no:3所示的反向引物。
5.根据权利要求1所述长牡蛎糖原合成限速酶基因gys表达调控snp标记组合在筛选长牡蛎糖原品质性状育种中的应用，其特征在于，可用于筛选高糖原含量的长牡蛎个体。
6.一种鉴定高糖原优势基因型牡蛎个体的筛选方法，其特征在于，包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述筛选方法，其特征在于，所述扩增dna序列的方法为pcr扩增反应，反应程序为：95ºc下反应3 min； 95ºc下反应15 s，60ºc下反应20 s，72ºc下反应 1min，共35个循环，之后再在72 ºc 下反应5 min。
8.根据权利要求7所述筛选方法，其特征在于，所述优势基因型在gys1位点上为aa型、在gys2位点上为gg型、在gys3位点上为tt型。
