一种与克氏原螯虾生长性能相关的SNP分子标记及其应用

    专利2026-09-10  18


    本发明属于分子标记领域,涉及水产养殖中一种与克氏原螯虾生长性能相关的snp分子标记及其应用。


    背景技术:

    1、克氏原螯虾( procambarus clarkii),隶属于甲壳动物亚门(crustacea),十足目(decapoda),螯虾科(astacidae),原螯虾属( procambarus),原产于美国和墨西哥,20世纪30年代从日本传入中国。近年来,小龙虾产量逐年增长,养殖规模不断扩大,已成为我国淡水养殖产业的新兴品种。据统计,2022年我国小龙虾养殖面积达到了2800万亩,产量达到了289.07万吨,继续保持着较快增长。然而由于长期的自繁自养,小龙虾种质资源出现退化,制约小龙虾养殖业的健康发展,开展克氏原螯虾苗种选育和遗传改良亟不可待。生长性状是育种最重要的经济性状之一,以生长快为目的的小龙虾良种选育工作中需要利用到分子标记辅助育种技术来加快小龙虾良种选育进度,因此开发与小龙虾生长性能相关的分子标记对小龙虾良种培育具有重大意义。

    2、甲壳类动物体内的胰岛素样生长因子的功能类似于胰岛素,不仅参与了糖代谢,并且对于细胞生长与增殖以及胚胎发育也起着调控作用。有研究表明,克氏原螯虾的胰岛素样生长因子受体能够与胰岛素样生长因子结合并传递信号,促进细胞增殖和生长,因此克氏原螯虾体内的胰岛素样生长因子受体基因的作用是调节细胞增殖和生长,并参与甲壳类动物的生长和发育过程。但是胰岛素样生长因子受体基因上与生长性状相关的snp分子标记尚未见报道。

    3、本发明利用hrm基因分型技术以及关联分析的方法,成功得到1个与克氏原螯虾体质量显著相关的snp分子标记。对群体中不同基因型个体进行统计发现不同基因型个体间在生长性能上存在着差异,其中tt基因型个体的体质量显著高于ct基因型以及cc基因型个体。因此,上述snp分子标记可应用于克氏原螯虾亲本筛选,从而提高育种效率。本发明不但开发了与克氏原螯虾生长相关的snp分子标记,同时还提供了一种简便迅速的基因型鉴定方法。


    技术实现思路

    1、本发明的第一个目的在于提供一种与克氏原螯虾生长性能相关的snp分子标记。

    2、所述的snp分子标记位于克氏原螯虾胰岛素样生长因子受体基因的全长第42659bp处,其等位基因为c和t,该标记的tt基因型个体的平均体质量显著大于cc基因型个体以及ct基因型个体。

    3、本发明的第二个目的在于提供一种用于扩增所述snp分子标记的引物。

    4、用于扩增所述snp分子标记的引物,正向引物序列如seq id no.1所示,反向引物序列如seq id no.2所示。

    5、本发明的第三个目的在于提供一种所述的snp分子标记或所述的引物在克氏原螯虾生长性能分型鉴定中的应用,可用于筛选体质量高,生长性能好的克氏原螯虾品种。

    6、本发明的第四个目的在于提供一种克氏原螯虾生长性能分型鉴定试剂盒,该试剂盒中含有所述的引物。

    7、本发明的第五个目的在于提供一种克氏原螯虾生长性能分型鉴定方法,该方法包括以下步骤:

    8、1)提取克氏原螯虾基因组dna;

    9、2)以提取的基因组dna为模板,利用权利要求2所述的引物进行pcr扩增;

    10、3)对pcr扩增产物进行检测。

    11、其中,所述pcr扩增的反应体系为:2× hrm analysis premix 10µl;正向引物0.6µl;反向引物0.6µl;模板1µl;rnase-free ddh2o至20µl。

    12、其中,所述pcr扩增的反应程序为:95℃预变性2min;95℃变性10s,60℃退火20s,72℃延伸30s,40个循环。

    13、在对pcr扩增产物进行检测时,采集扩增产物的荧光信号,通过熔解曲线分析snp分子标记的基因型,若检测到的基因型为tt,则判断为体质量高,生长性能好的克氏原螯虾品种。

    14、本发明的有益效果是:

    15、本发明首次提出了一种可用于筛选生长性能较好的克氏原螯虾亲本的分子标记新方法,通过pcr分型鉴定亲虾在该snp分子标记处的基因型,选择基因型为tt的个体作为繁育后代的亲本。本发明可以在筛选亲虾时准确、迅速地鉴定出体质量高,生长性能好的亲虾品种并用来繁育后代,从而在提高克氏原螯虾育种效率,增加水产养殖产量、提高养殖收入、满足餐桌需求等方面都具有重要意义。



    技术特征:

    1.一种与克氏原螯虾生长性能相关的snp分子标记,其特征在于:所述的snp分子标记位于克氏原螯虾胰岛素样生长因子受体基因的全长第42659bp处,其等位基因为c和t,该标记的tt基因型个体的平均体质量显著大于cc基因型个体以及ct基因型个体。

    2.用于扩增权利要求1所述snp分子标记的引物,其特征在于:正向引物序列如seq idno.1所示,反向引物序列如seq id no.2所示。

    3.权利要求1所述的snp分子标记或权利要求2所述的引物在克氏原螯虾生长性能分型鉴定中的应用。

    4.一种克氏原螯虾生长性能分型鉴定试剂盒,该试剂盒中含有权利要求2所述的引物。

    5.一种克氏原螯虾生长性能分型鉴定方法,其特征在于包括以下步骤:

    6.如权利要求5所述的克氏原螯虾生长性能分型鉴定方法,其特征在于,所述pcr扩增的反应体系为:2× hrm analysis premix 10µl;正向引物0.6µl;反向引物0.6µl;模板1µl;rnase-free ddh2o至20µl。

    7.如权利要求5所述的克氏原螯虾生长性能分型鉴定方法,其特征在于,所述pcr扩增的反应程序为:95℃预变性2min;95℃变性10s,60℃退火20s,72℃延伸30s,40个循环。

    8.如权利要求5所述的克氏原螯虾生长性能分型鉴定方法,其特征在于:采集扩增产物的荧光信号,通过熔解曲线分析snp分子标记的基因型,若检测到的基因型为tt,则判断为体质量高,生长性能好的克氏原螯虾品种。


    技术总结
    本发明公开了一种与克氏原螯虾生长性能相关的SNP分子标记,该分子标记位于克氏原螯虾胰岛素样生长因子受体基因的倒数第2个内含子区,具体位于基因组全长第42659bp处,其等位基因为C和T,其中TT基因型个体的平均体质量显著大于CC基因型个体以及CT基因型个体。本发明还公开了用于扩增所述SNP分子标记的引物以及一种克氏原螯虾生长性能分型鉴定方法,在提高后代虾的生长性能和育种效率,增加养殖产量和收入等方面具有重要意义。

    技术研发人员:顾泽茂,雷希爽,王江华,廖明聪,杨成伟,余丽琴
    受保护的技术使用者:华中农业大学
    技术研发日:
    技术公布日:2024/4/29
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