本发明涉及多发性骨髓瘤复发风险评估的生物标志物及其应用，尤其涉及嵌合抗原受体t细胞治疗后多发性骨髓瘤复发风险评估的生物标志物及该生物标志物在检测产品的应用，属于生物医学领域。
背景技术：
1、多发性骨髓瘤(mm)是一种克隆浆细胞异常增殖的恶性疾病，是仅次于淋巴瘤的第二大血液系统恶性肿瘤，约占血液系统恶性肿瘤的10％。绝大部分病例存在单克隆免疫球蛋白或其片段(m蛋白)的分泌，导致相关器官功能损伤，常见的症状包括血钙增高、肾功能损害、贫血、骨病以及继发淀粉样变性等相关表现。近年来，随着蛋白酶体抑制剂、免疫调节药物、单克隆抗体等新药的广泛应用，mm患者的预后得到了极大的改善，其中位生存期已从3-5年延长至现在的8-10年，但多发性骨髓瘤至今仍无法治愈；尤其是难治/复发的mm(rrmm)以及髓外病变，患者疗效极差。
2、嵌合抗原受体t细胞(car-t)是一种全新的治疗模式，国内多家中心均在进行car-t治疗rrmm的临床研究。car-t治疗mm初期有效率极高，但大部分患者仍面临复发这一难题。因此，深入探讨car-t治疗后mm细胞复发的原因，寻找其中的关键因素进行靶向干预，有望进一步提升car-t治疗mm的疗效。
3、paf，血小板活化因子，又称paf-acether或agepc(乙酰甘油醚-磷酰胆碱)，是一种有效的磷脂激活剂和许多白细胞功能、血小板聚集和脱颗粒、炎症和过敏性休克的媒介。它还参与血管通透性的变化、氧化爆发、白细胞的趋化以及吞噬细胞中花生四烯酸代谢的增强。paf由多种细胞产生，特别是那些参与宿主防御的细胞，如血小板、内皮细胞、中性粒细胞、单核细胞和巨噬细胞。
技术实现思路
1、本发明所要解决的技术问题是确定一种能够评估多发性骨髓瘤经治疗后复发风险的标志物。
2、多发性骨髓瘤治疗后复发风险评估生物标志物，所述生物标志物为血小板活化因子。
3、上述技术方案中，所述多发性骨髓瘤经过嵌合抗原受体t细胞治疗。
4、上述技术方案中，所述生物标志物利用血液作为生物样品。血小板活化因子表达以血小板活化因子受体为作用途径，血小板活化因子受体以骨髓瘤细胞中8226细胞、h929细胞、u266细胞、opm-2细胞至少一种为生物样本。最佳选取u266细胞和opm-2细胞。
5、检测生物活性分子表达的试剂在制备评估多发性骨髓瘤复发风险的产品中的应用，所述生物活性分子为血小板活化因子。
6、上述技术方案中，所述试剂包括通过酶联免疫吸附法检测血小板活化因子表达水平用的试剂。
7、检测生物活性分子受体表达的试剂在制备评估多发性骨髓瘤复发风险的产品中的应用，所述生物活性分子受体为血小板活化因子受体，试剂包括通过荧光定量pcr检测血小板活化因子受体表达水平用的试剂。所述试剂包括通过荧光定量pcr检测8226细胞和/或h929细胞和/或u266细胞和/或opm-2细胞中血小板活化因子受体表达水平用的试剂。所述试剂包含针对h-gapdh和h-pafr的引物。其中，h-gapdh引物序列正向：catcatccctgcctctactgg，反向：gtgggtgtcgctgttgaagtc；h-pafr引物序列正向attccaccaggccattaatg，反向：ggttgaatggcacaaccactt。
8、本方案通过酶联免疫吸附法(elisa)检测paf、实时定量pcr等检测细胞中paf受体(pafr)表达水平，通过cck-8检测paf对细胞增殖、细胞粘附情况，transwell法检测paf对细胞侵袭及迁移能力。
9、利用酶联免疫吸附法检测car-t治疗后复发和缓解mm患者血浆中paf的表达，qpcr对比正常人单个核细胞(pbmc)与mm细胞系中pafr的表达水平。细胞功能实验，设置paf空白组和paf刺激组，paf刺激组予100nmol的paf刺激48小时。利用cck-8检测对照组和paf刺激组细胞增殖、细胞粘附情况，transwell法检测两组细胞侵袭、迁移能力。研究发现，car-t治疗后mm复发患者中paf水平明显高于car-t治疗后缓解患者；与pbmc对比，8226、h929、u266、opm-2细胞系中pafr基因相对表达水平明显升高(p＜0.05)，其中u266、opm-2升高较为显著。选取u266、opm-2进行细胞功能实验，cck8实验表明予100nmol的paf刺激u266、opm-2细胞48小时后，细胞的增殖、粘附能力明显增强。侵袭、迁移实验显示paf刺激组的穿膜细胞数逐渐增多，明显高于其对照组。
10、car-t治疗mm后炎性微环境中paf合成增加可能具有促进mm复发的效应，这种效应可通过paf/pafr作用途径促进mm细胞增殖、粘附、侵袭及迁移。
1.多发性骨髓瘤治疗后复发风险评估生物标志物，其特征在于：所述生物标志物为血小板活化因子。
2.如权利要求1所述的多发性骨髓瘤治疗后复发风险评估生物标志物，其特征在于：所述多发性骨髓瘤经过嵌合抗原受体t细胞治疗。
3.如权利要求1或2所述的多发性骨髓瘤治疗后复发风险评估生物标志物，其特征在于：所述生物标志物利用血液作为生物样品。
4.如权利要求3所述的多发性骨髓瘤治疗后复发风险评估生物标志物，其特征在于：所述血小板活化因子表达以血小板活化因子受体为作用途径，所述血小板活化因子受体以骨髓瘤细胞中8226细胞、h929细胞、u266细胞、opm-2细胞中至少一种为生物样本。
5.检测生物活性分子表达的试剂在制备评估多发性骨髓瘤复发风险的产品中的应用，其特征在于：所述生物活性分子为血小板活化因子。
6.如权利要求5所述的检测生物活性分子表达的试剂在制备评估多发性骨髓瘤复发风险的产品中的应用，其特征在于：所述试剂包括通过酶联免疫吸附法检测血小板活化因子表达水平用的试剂。
7.检测生物活性分子受体表达的试剂在制备评估多发性骨髓瘤复发风险的产品中的应用，其特征在于：所述生物活性分子受体为血小板活化因子受体，所述试剂包括通过荧光定量pcr检测血小板活化因子受体表达水平用的试剂。
8.如权利要求7所述的检测生物活性分子受体表达的试剂在制备评估多发性骨髓瘤复发风险的产品中的应用，其特征在于：所述试剂包括通过荧光定量pcr检测8226细胞和/或h929细胞和/或u266细胞和/或opm-2细胞中血小板活化因子受体表达水平用的试剂。
9.如权利要求7或8所述的检测生物活性分子受体表达的试剂在制备评估多发性骨髓瘤复发风险的产品中的应用，其特征在于：所述试剂包含针对h-gapdh和h-pafr的引物。
10.如权利要求9所述的检测生物活性分子受体表达的试剂在制备评估多发性骨髓瘤复发风险的产品中的应用，其特征在于：h-gapdh引物序列正向：catcatccctgcctctactgg，反向：gtgggtgtcgctgttgaagtc；h-pafr引物序列正向attccaccaggccattaatg，反向：ggttgaatggcacaaccactt。
