本发明属于生物免疫技术的设计与研发，具体公开一种将牛口蹄疫灭活疫苗与山羊痘活疫苗及布氏菌活疫苗联合使用的免疫方法。
背景技术：
1、口蹄疫是可以造成高发病率和高死亡率的病毒性传染病，被列为一类动物疫病，对养殖业有着极为严重的危害，在全世界广泛流行，其中口蹄疫a型与o型为我国主要防控对象。同时我国将其列为二类疫病。布氏菌病属于人兽共患病，对动物与人都有着较大的危害，此三类疫病对养殖业和公共卫生都有着严重的危害，也是我国重点预防控制的动物疫病。口蹄疫灭活疫苗（inactivated foot and mouth disease vaccine，ifmdv）对口蹄疫病毒防控有着重要的价值，但口蹄疫有多种血清型，要根据口蹄疫的流行的特点从而选择相应的疫苗，而我国主要采取的为口蹄疫a型、o型灭活疫苗。牛结节性皮肤病是痘病毒科羊痘病毒属，防控该疫病选用山羊痘活疫苗（goat pox vaccine，gpv）。布氏菌病活疫苗（livebrucella vaccine，lbv）根据种属不同分为三种，分别为s2株、m5株、a19株，分别用来预防猪布氏菌病、羊布氏菌病以及牛布氏菌病。目前，在基层防疫工作中，免疫上述三种疫苗需要耗费大量的人力物力财力，对基层防疫人员有着极大的工作强度，对家畜也有着严重的应激影响。因此，如何减少免疫次数，同时又对其它疫病起到预防作用，显得尤为重要。为此，通过ifmdv分别与gpv及lbv（a19）联合使用后进行免疫效果评价，从而为我国牛病防治提供全新的、高效的免疫模式。
技术实现思路
1、本发明的目的在于：分析牛口蹄疫灭活疫苗（inactivated foot and mouthdisease vaccine，ifmdv）、山羊痘活疫苗（goat pox vaccine，gpv）和布氏菌活疫苗（livebrucella vaccine，lbv）联合使用的效果。
2、本发明的技术方案：牛口蹄疫灭活疫苗分别与山羊痘活疫苗及布氏菌活疫苗联合使用的免疫方法，该方法包括下述步骤：
3、（1）接种疫苗的准备：口蹄疫a/o型二价灭活疫苗，山羊痘活疫苗，布氏菌病活疫苗a19；
4、（2）接种疫苗动物准备：六月龄以上的健康犊牛，其口蹄疫a型、o型抗体均＜1﹕8，牛结节型皮肤病抗体均为阴性pi＜50%，布氏菌抗体阴性，抗体＜1﹕50；
5、（3）免疫接种：ifmdv经颈部肌肉注射3ml，gpv经颈部皮内注射1头份，同时颈部另一侧皮内注射lbva19 1头份；免疫后连续7d检测犊牛体温变化情况，同时观察犊牛的精神状态以及食欲情况；
6、（4）免疫抗体效价检测： 在免疫后30d、60d、90d、120d，经尾缘静脉无菌采血3-5ml，分离血清；采用液相阻断elisa试剂盒检测口蹄疫抗体，抗体效价≥1﹕128时判定口蹄疫抗体阳性；采用试管凝集试验检测布氏菌抗体，抗体效价≥1﹕50时判定布氏菌抗体阳性；采用竞争性elisa试剂盒检测牛结节性皮肤病抗体，pi≥50%时判定牛结节性皮肤病抗体阳性。
7、本发明的有益效果：采用ifmdv与gpv联合免疫犊牛，观察免疫后犊牛的不良反应，采用液相阻断elisa法和竞争elisa法分别测定牛血清中口蹄疫和牛结节性皮肤病抗体水平。采用ifmdv与lbv联合免疫犊牛，观察免疫后犊牛的不良反应，采用液相阻断elisa法和试管凝集试验分别鉴定血清中口蹄疫和布鲁氏菌抗体水平。应用ifmdv、lbv与gpv联合免疫犊牛，观察免疫后犊牛的不良反应，采用液相阻断elisa法、试管凝集试验及竞争elisa法，分别鉴定血清中口蹄疫、布鲁氏菌及牛结节性皮肤病抗体水平。结果 ifmdv分别与gpv、lbv联合免疫犊牛，未见严重的不良反应；ifmdv（肌肉注射）与gpv（皮内注射）同时联合免疫，犊牛血清中的gpv抗体明显高于单独免疫的抗体水平；ifmdv（肌肉注射）与lbv（皮下注射）同时联合免疫，犊牛血清中的lbv抗体高于单独免疫的抗体水平（p＜0.05）；ifmdv（肌肉注射）、gpv（皮内注射）和lbv（皮下注射）联合免疫，犊牛血清中的gpv、lbv抗体水平均高于单独免疫的抗体水平。ifmdv分别与gpv、lbv联合使用具有良好的安全性，且可以提高gpv与lbv的免疫效果。
1.牛口蹄疫灭活疫苗与山羊痘活疫苗及布氏菌活疫苗联合使用的免疫方法，其特征在于：该方法包括下述步骤：
