背景技术：
1、利用通过快速扩增方案(rep)离体培养的til的过继性细胞疗法已在患有癌症的患者的宿主免疫抑制之后产生成功的过继性细胞疗法。然而，在一些情况下，经转移的til的存活率和抗肿瘤活性可在转移至患者后降低。
2、已研究施用支持性免疫刺激剂(例如，细胞因子)以增强t细胞疗法。然而，此类免疫刺激剂需要高全身性剂量，其可引起不期望的毒性。
3、因此，仍需要经改善的用于治疗癌症的til疗法。
技术实现思路
1、本文提供了使用经修饰的til治疗癌症的组合物和方法，其中，经修饰的til包含与其细胞表面缔合的一种以上免疫调节剂(例如，细胞因子)。与til缔合的免疫调节剂提供局部免疫刺激作用，其可有利地增强患者接受者中的til存活率、增殖和/或抗肿瘤活性。因此，本文公开的组合物和方法提供有效的癌症疗法。
2、一方面，本文提供了治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，其包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，可选地，其中，该患者或受试者已接受至少一种先前疗法，til的一部分为经修饰的til，使得该经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
3、一方面，本文提供了治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，其包括施用经修饰的肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，该方法包括以下步骤：
4、(a)通过将自受试者获得的肿瘤样本处理成多个肿瘤碎片，获得和/或接受来自从受试者或患者切除的肿瘤的第一til群体；
5、(b)将第一til群体添加至密闭系统中；
6、(c)通过在包含il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增，以产生第二til群体，其中，第一扩增在提供第一透气表面区域的密闭容器中进行，第一扩增进行约3天至14天以获得第二til群体，自步骤(b)至步骤(c)的转变在不打开系统的情况下进行；
7、(d)通过用额外的il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)补充第二til群体的细胞培养基来进行第二扩增，产生第三til群体，其中，第二扩增进行约7天至14天以获得第三til群体，第三til群体为治疗性til群体，第二扩增在提供第二透气表面区域的密闭容器中进行，自步骤(c)至步骤(d)的转变在不打开系统的情况下进行；
8、(e)收集自步骤(d)获得的治疗性til群体，其中，自步骤(d)至步骤(e)的转变在不打开系统的情况下进行；
9、(f)将来自步骤(e)的所收集的til群体转移至输注袋，其中，自步骤(e)至(f)的转移在不打开系统的情况下进行；
10、(g)通过冷冻保存过程，冷冻保存来自步骤(f)的包含所收集的til群体的输注袋；
11、(h)向受试者施用治疗有效剂量的来自步骤(g)的输注袋的第三til群体；以及
12、(i)在施用(h)之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
13、一方面，本文提供了治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，该方法包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，该方法包括以下步骤：
14、(a)通过将自受试者获得的肿瘤样本处理成多个肿瘤碎片，获得来自从受试者切除的肿瘤的第一til群体；
15、(b)将肿瘤碎片添加至密闭系统中；
16、(c)通过在包含il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增，产生第二til群体，其中，第一扩增在提供第一透气表面区域的密闭容器中进行，第一扩增进行约3天至11天以获得第二til群体，自步骤(b)至步骤(c)的转变在不打开系统的情况下进行；
17、(d)通过用额外的il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)补充第二til群体的细胞培养基来进行第二扩增，产生第三til群体，其中，第二扩增进行约7天至11天以获得第三til群体，第二扩增在提供第二透气表面区域的密闭容器中进行，自步骤(c)至步骤(d)的转变在不打开系统的情况下进行；
18、(e)收集自步骤(d)获得的第三til群体，其中，自步骤(d)至步骤(e)的转变在不打开系统的情况下进行；
19、(f)将来自步骤(e)的所收集的第三til群体转移至输注袋，其中，自步骤(e)至(f)的转移在不打开系统的情况下进行；
20、(g)通过冷冻保存过程，冷冻保存来自步骤(f)的包含所收集的til群体的输注袋；
21、(h)向受试者施用治疗有效剂量的来自步骤(g)的输注袋的第三til群体；以及
22、(i)在施用(h)之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
23、一方面，本文提供了治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，其包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，该方法包括以下步骤：
24、(a)由手术切除、针吸活体组织切片、粗针活体组织切片、小活体组织切片或用于自患者或受试者的癌症获得含有肿瘤和til细胞的混合物的样本的其他方式，获得和/或接受第一til群体，
25、(b)将第一til群体添加至密闭系统中；
26、(c)通过在包含il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增，产生第二til群体，其中，第一扩增在提供第一透气表面区域的密闭容器中进行，第一扩增进行约3天至11天以获得第二til群体，自步骤(b)至步骤(c)的转变在不打开系统的情况下进行；
27、(d)通过用额外的il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)补充第二til群体的细胞培养基来进行第二扩增，产生第三til群体，其中，第二扩增进行约7天至11天以获得第三til群体，第二扩增在提供第二透气表面区域的密闭容器中进行，自步骤(c)至步骤(d)的转变在不打开系统的情况下进行；
28、(e)收集自步骤(d)获得的第三til群体，其中，自步骤(d)至步骤(e)的转变在不打开系统的情况下进行；
29、(f)将来自步骤(e)的所收集的第三til群体转移至输注袋，其中，自步骤(e)至(f)的转移在不打开系统的情况下进行；
30、(g)通过冷冻保存过程，冷冻保存来自步骤(f)的包含所收集的til群体的输注袋；
31、(h)向受试者施用治疗有效剂量的来自步骤(g)的输注袋的第三til群体；以及
32、(i)在施用(h)之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
33、另一方面，本文提供了治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，其包括施用经修饰的肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，该方法包括以下步骤：
34、(a)自受试者或患者切除肿瘤，该肿瘤包含第一til群体，可选地，通过手术切除、针吸活体组织切片、粗针活体组织切片、小活体组织切片或用于自癌症获得含有肿瘤及til细胞的混合物的样本的其他方式进行；
35、(b)将肿瘤处理成多个肿瘤碎片并将肿瘤碎片添加至密闭系统中；
36、(c)通过在包含il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增，产生第二til群体，其中，第一扩增在提供第一透气表面区域的密闭容器中进行，第一扩增进行约3天至11天以获得第二til群体，自步骤(b)至步骤(c)的转变在不打开系统的情况下进行；
37、(d)通过用额外的il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)补充第二til群体的细胞培养基来进行第二扩增，产生第三til群体，其中，第二扩增进行约7天至11天以获得第三til群体，第二扩增在提供第二透气表面区域的密闭容器中进行，自步骤(c)至步骤(d)的转变在不打开系统的情况下进行；
38、(e)收集自步骤(d)获得的第三til群体，其中，自步骤(d)至步骤(e)的转变在不打开系统的情况下进行；
39、(f)将来自步骤(e)的所收集的第三til群体转移至输注袋，其中，自步骤(e)至(f)的转移在不打开系统的情况下进行；
40、(g)通过冷冻保存过程，冷冻保存来自步骤(f)的包含所收集的til群体的输注袋；
41、(h)向患有癌症的受试者或患者施用治疗有效剂量的来自步骤(g)的输注袋的第三til群体；以及
42、(i)在施用(h)之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
43、在其他方面，本文提供了治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，其包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，该方法包括以下步骤：
44、(a)由手术切除、针吸活体组织切片、粗针活体组织切片、小活体组织切片或用于从受试者或患者获得含有肿瘤和til细胞的混合物的样本的其他方式，获得和/或接受第一til群体；
45、(c)使第一til群体与第一细胞培养基接触；
46、(d)在第一细胞培养基中进行第一til群体的初始扩增(或起始第一扩增(primingfirst expansion))，获得第二til群体，其中，第一细胞培养基包含il-2、可选的okt-3(抗cd3抗体)和可选的抗原呈递细胞(apc)，起始第一扩增进行1至8天的时间段；
47、(e)在第二细胞培养基中进行第二til群体的快速第二扩增，获得第三til群体；其中，第二细胞培养基包含il-2、okt-3(抗cd3抗体)和apc；快速扩增进行14天以下的时间段，可选地，快速第二扩增可在快速第二扩增开始之后进行1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天；
48、(f)收集第三til群体；
49、(g)向患有癌症的受试者或患者施用治疗有效部分的第三til群体；以及
50、(h)在施用(g)之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜结合的免疫调节组合物。
51、另一方面，本文提供了治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，其包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，该方法包括以下步骤：
52、(a)自受试者或患者的癌症切除肿瘤，该肿瘤包含第一til群体，可选地，通过手术切除、针吸活体组织切片、粗针活体组织切片、小活体组织切片或用于自癌症获得含有肿瘤及til细胞的混合物的样本的其他方式进行；
53、(b)将肿瘤破碎成肿瘤碎片；
54、(c)使肿瘤碎片与第一细胞培养基接触；
55、(d)在第一细胞培养基中进行第一til群体的初始扩增(或起始第一扩增)，获得第二til群体，其中，第一细胞培养基包含il-2、可选的okt-3(抗cd3抗体)和可选的抗原呈递细胞(apc)，其中，起始第一扩增进行1至8天的时间段；
56、(e)在第二细胞培养基中进行第二til群体的快速第二扩增，获得第三til群体；其中，第二细胞培养基包含il-2、okt-3(抗cd3抗体)和apc；快速扩增进行14天以下的时间段，可选地，快速第二扩增可在快速第二扩增开始之后进行1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天；
57、(f)收集第三til群体；
58、(g)向患有癌症的受试者或患者施用治疗有效部分的第三til群体；以及
59、(i)在施用(g)之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
60、一方面，本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，其包括：
61、(a)通过将自肿瘤获得的肿瘤样本处理成多个肿瘤碎片来获得和/或接受来自从受试者的癌症切除的肿瘤的第一til群体；
62、(b)从步骤(a)中的第一til群体选择pd-l阳性til，获得富含pd-l的til群体；
63、(c)通过在包含il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)的第一细胞培养基中培养富含pd-l的til群体来进行起始第一扩增，产生第二til群体，其中，起始第一扩增在具有第一透气表面区域的容器中进行，起始第一扩增进行约1至7天或约1至8天的第一时间段，获得第二til群体，第二til群体的数目大于第一til群体；
64、(d)通过在包含il-2、okt-3和apc的第二培养基中培养第二til群体来进行快速第二扩增，产生治疗性til群体，其中，在快速第二扩增中添加的apc的数目为在步骤(b)中添加的apc的数目的至少两倍，快速第二扩增进行约1至11天的第二时间段以获得治疗性til群体，第三til群体为治疗性til群体，快速第二扩增在具有第二透气表面区域的容器中进行；
65、(e)收集自步骤(d)获得的治疗性til群体；
66、(f)将来自步骤(e)的所收集的til群体转移至输注袋，以及
67、(g)在该方法期间的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
68、本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，该方法包括以下步骤：
69、(a)通过将自肿瘤获得的肿瘤样本处理成多个肿瘤碎片来获得和或接受来自从受试者或患者的癌症切除的肿瘤的第一til群体；
70、(b)将第一til群体添加至密闭系统中；
71、(c)通过在包含il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增，产生第二til群体，其中，第一扩增在提供第一透气表面区域的密闭容器中进行，第一扩增进行约3天至14天以获得第二til群体，自步骤(b)至步骤(c)的转变在不打开系统的情况下进行；
72、(d)通过用额外的il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)补充第二til群体的细胞培养基来进行第二扩增，产生第三til群体，其中，第二扩增进行约7天至14天以获得第三til群体，第三til群体为治疗性til群体，第二扩增在提供第二透气表面区域的密闭容器中进行，自步骤(c)至步骤(d)的转变在不打开系统的情况下进行；
73、(e)收集自步骤(d)获得的治疗性til群体，其中，自步骤(d)至步骤(e)的转变在不打开系统的情况下进行；
74、(f)将来自步骤(e)的所收集的til群体转移至输注袋，其中，自步骤(e)至(f)的转移在不打开系统的情况下进行；以及
75、(g)在步骤(f)中的转移至输注袋之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
76、本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，该方法包括以下步骤：
77、(a)通过将自肿瘤获得的肿瘤样本处理成多个肿瘤碎片来获得来自从受试者的癌症切除的肿瘤的第一til群体；
78、(b)将肿瘤碎片添加至密闭系统中；
79、(c)通过在包含il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增，产生第二til群体，其中，第一扩增在提供第一透气表面区域的密闭容器中进行，第一扩增进行约3天至11天以获得第二til群体，自步骤(b)至步骤(c)的转变在不打开系统的情况下进行；
80、(d)通过用额外的il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)补充第二til群体的细胞培养基来进行第二扩增，产生第三til群体，其中，第二扩增进行约7天至11天以获得第三til群体，第二扩增在提供第二透气表面区域的密闭容器中进行，自步骤(c)至步骤(d)的转变在不打开系统的情况下进行；
81、(e)收集自步骤(d)获得的第三til群体，其中，自步骤(d)至步骤(e)的转变在不打开系统的情况下进行；
82、(f)将来自步骤(e)的所收集的第三til群体转移至输注袋，其中，自步骤(e)至步骤(f)的转移在不打开系统的情况下进行；以及
83、(g)在步骤(f)中的转移至输注袋之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
84、另一方面，本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，该方法包括以下步骤：
85、(a)由手术切除、针吸活体组织切片、粗针活体组织切片、小活体组织切片或用于从患者或受试者的癌症获得含有肿瘤和til细胞的混合物的样本的其他方式，获得和/或接受第一til群体，
86、(b)将第一til群体添加至密闭系统中；
87、(c)通过在包含il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增，产生第二til群体，其中，第一扩增在提供第一透气表面区域的密闭容器中进行，第一扩增进行约3天至11天以获得第二til群体，自步骤(b)至步骤(c)的转变在不打开系统的情况下进行；
88、(d)通过用额外的il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)补充第二til群体的细胞培养基来进行第二扩增，产生第三til群体，第二扩增进行约7天至11天以获得第三til群体，第二扩增在提供第二透气表面区域的密闭容器中进行，自步骤(c)至步骤(d)的转变在不打开系统的情况下进行；
89、(e)收集自步骤(d)获得的第三til群体，其中，自步骤(d)至步骤(e)的转变在不打开系统的情况下进行；
90、(f)将来自步骤(e)的所收集的第三til群体转移至输注袋，其中，自步骤(e)至步骤(f)的转移在不打开系统的情况下进行；以及
91、(g)在步骤(f)中的转移之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
92、一方面，本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，该方法包括以下步骤：
93、(a)自受试者或患者的癌症切除肿瘤，该肿瘤包含第一til群体，可选地，通过手术切除、针吸活体组织切片、粗针活体组织切片、小活体组织切片或用于自癌症获得含有肿瘤及til细胞的混合物的样本的其他方式进行；
94、(b)将肿瘤碎片添加至密闭系统中；
95、(c)通过在包含il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增，产生第二til群体，其中，第一扩增在提供第一透气表面区域的密闭容器中进行，第一扩增进行约3天至11天以获得第二til群体，自步骤(b)至步骤(c)的转变在不打开系统的情况下进行；
96、(d)通过用额外的il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)补充第二til群体的细胞培养基来进行第二扩增，产生第三til群体，其中，第二扩增进行约7天至11天以获得第三til群体，第二扩增在提供第二透气表面区域的密闭容器中进行，自步骤(c)至步骤(d)的转变在不打开系统的情况下进行；
97、(e)收集自步骤(d)获得的第三til群体，其中，自步骤(d)至步骤(e)的转变在不打开系统的情况下进行；
98、(f)将来自步骤(e)的所收集的第三til群体转移至输注袋，其中，自步骤(e)至步骤(f)的转移在不打开系统的情况下进行；以及
99、(g)在步骤(f)中的转移之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
100、在本文提供的方法的一些实施例中，第一扩增分为第一步骤和第二步骤，其中，所述方法还包括通过在含有il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增的第一步骤，产生自肿瘤碎片或样本脱出的til，将肿瘤碎片或样本中剩余的til与从肿瘤碎片或样本脱出的til分离，可选地，消化肿瘤碎片或样本以产生肿瘤消化物，通过在细胞培养基中培养肿瘤碎片或样本或肿瘤消化物中的剩余til来进行第一扩增的第二步骤，产生第二til群体。
101、一方面，本文提供了用于将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，该方法包括以下步骤：
102、(a)由手术切除、针吸活体组织切片、粗针活体组织切片、小活体组织切片或用于从受试者或患者的癌症获得含有肿瘤和til细胞的混合物的样本的其他方式获得和/或接受第一til群体；
103、(b)使第一til群体与第一细胞培养基接触；
104、(c)在第一细胞培养基中进行第一til群体的初始扩增(或起始第一扩增)，获得第二til群体，其中，第一细胞培养基包含il-2、可选的okt-3(抗cd3抗体)和可选的抗原呈递细胞(apc)，起始第一扩增进行1至8天的时间段；
105、(d)在第二细胞培养基中进行第二til群体的快速第二扩增，获得第三til群体；其中，第二细胞培养基包含il-2、okt-3(抗cd3抗体)和apc，快速扩增进行14天以下的时间段，可选地，快速第二扩增可在快速第二扩增开始之后进行1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天；
106、(e)收集第三til群体；以及
107、(f)在步骤(f)中的收集之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
108、一方面，本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，该方法包括以下步骤：
109、(a)自受试者或患者的癌症切除肿瘤，该肿瘤包含第一til群体，可选地通过手术切除、针吸活体组织切片、粗针活体组织切片、小活体组织切片或用于获得含有肿瘤及til细胞的混合物的肿瘤样本的其他方式进行；
110、(b)将肿瘤破碎成肿瘤碎片；
111、(c)使肿瘤碎片与第一细胞培养基接触；
112、(d)在第一细胞培养基中进行第一til群体的初始扩增(或起始第一扩增)，获得第二til群体，其中，第一细胞培养基包含il-2、可选的okt-3(抗cd3抗体)和可选的抗原呈递细胞(apc)，起始第一扩增进行1至8天的时间段；
113、(e)在第二细胞培养基中进行第二til群体的快速第二扩增，获得第三til群体；其中，第二细胞培养基包含il-2、okt-3(抗cd3抗体)和apc，快速扩增进行14天以下的时间段，可选地，快速第二扩增可在快速第二扩增开始之后进行1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天；
114、(f)收集第三til群体；以及
115、(g)在步骤(f)中的收集之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
116、一方面，本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，其包括：
117、(a)通过将自肿瘤获得的肿瘤样本处理成多个肿瘤碎片，获得和/或接受来自从受试者的癌症切除的肿瘤的第一til群体；
118、(b)通过在包含il-2、可选的okt-3和可选的包含抗原呈递细胞(apc)的细胞培养基中培养第一til群体来进行起始第一扩增，产生第二til群体，其中，起始第一扩增进行约1至7天或约1至8天的第一时间段，获得第二til群体，第二til群体的数目大于第一til群体；
119、(c)通过使第二til群体与包含il-2、okt-3和apc的细胞培养基接触来进行快速第二扩增，产生第三til群体，其中，快速第二扩增进行约1至11天的第二时间段，获得第三til群体，第三til群体为治疗性til群体；
120、(d)收集自步骤(c)获得的治疗性til群体；以及
121、(e)在步骤(d)中的收集之前或之后的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
122、在此方法的一些实施例中，步骤(b)中的细胞培养基还包含抗原呈递细胞(apc)，步骤(c)中的培养基中的apc的数目大于步骤(b)中的培养基中的apc的数目。
123、一方面，本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，其包括：
124、(a)通过在包含il-2、可选的okt-3和可选的抗原呈递细胞(apc)的细胞培养基中培养第一til群体来进行起始第一扩增，产生第二til群体，该第一til群体可通过将来自从受试者的癌症切除的肿瘤的肿瘤样本处理成多个肿瘤碎片而获得；其中，起始第一扩增在具有第一透气表面区域的容器中进行，起始第一扩增进行约1至7天或约1至8天的第一时间段，获得第二til群体，第二til群体的数目大于第一til群体；
125、(b)通过使第二til群体与第二til群体的具有额外的il-2、okt-3和apc的细胞培养基接触来进行快速第二扩增，产生第三til群体，其中，快速第二扩增中的apc的数目为步骤(a)中的apc的数目的至少两倍，快速第二扩增进行约1至11天的第二时间段以获得第三til群体，第三til群体为治疗性til群体，快速第二扩增在具有第二透气表面区域的容器中进行；
126、(c)收集自步骤(b)获得的治疗性til群体；以及
127、(d)在步骤(c)中的收集之前或之后的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
128、一方面，本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，其包括：
129、(a)通过在包含il-2、可选的okt-3和可选的包含抗原呈递细胞(apc)的细胞培养基中培养第一til群体来进行起始第一扩增，产生第二til群体，其中，起始第一扩增进行约1至7天或约1至8天的第一时间段，获得第二til群体，第二til群体的数目大于第一til群体；
130、(b)通过使第二til群体与包含il-2、okt-3和apc的细胞培养基接触来进行快速第二扩增，产生第三til群体，其中，快速第二扩增进行约1至11天的第二时间段，获得第三til群体，第三til群体为治疗性til群体；
131、(c)收集自步骤(b)获得的治疗性til群体；以及
132、(d)在步骤(c)中的收集之前或之后的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
133、在此方法的一些实施例中，步骤(a)中的细胞培养基还包含抗原呈递细胞(apc)，其中，步骤(c)中的培养基中的apc的数目大于步骤(b)中的培养基中的apc的数目。
134、在本文提供的方法的一些实施例中，起始第一扩增分为第一步骤和第二步骤，其中，所述方法还包括通过在含有il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行起始第一扩增的第一步骤，产生从肿瘤碎片或样本脱出的til，将肿瘤碎片或样本中剩余的til与自肿瘤碎片或样本脱出的til分离，可选地，消化肿瘤碎片或样本以产生肿瘤消化物，通过在细胞培养基中培养肿瘤碎片或样本或肿瘤消化物中的剩余til来进行起始第一扩增的第二步骤，产生第二til群体。
135、一方面，本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，其包括：
136、(a)通过将肿瘤样本在包含il-2的第一细胞培养基中培养约3天来获得和/或接受来自肿瘤样本的第一til群体，该肿瘤样本由来自受试者的癌症的肿瘤的一次以上小活体组织切片、粗针活体组织切片或、针吸活体组织切片获得；
137、(b)通过在包含il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)的第二细胞培养基中培养第一til群体来进行起始第一扩增，产生第二til群体，其中，起始第一扩增在具有第一透气表面区域的容器中进行，起始第一扩增进行约7或8天的第一时间段，获得第二til群体，第二til群体的数目大于第一til群体；
138、(c)通过用额外的il-2、okt-3和apc补充第二til群体的第二细胞培养基来进行快速第二扩增，产生第三til群体，其中，在快速第二扩增中添加的apc的数目为在步骤b)中添加的apc的数目的至少两倍，快速第二扩增进行约11天的第二时间段，获得第三til群体，第三til群体为治疗性til群体，快速第二扩增在具有第二透气表面区域的容器中进行；
139、(d)收集自步骤(c)获得的治疗性til群体；
140、(e)将来自步骤(d)的所收集的til群体转移至输注袋；以及
141、(f)在步骤(e)中的转移至输注袋之前的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
142、另一方面，本文提供了将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，其包括：
143、(a)通过将肿瘤样本在包含il-2的第一细胞培养基中培养约3天来获得和/或接受来自肿瘤样本的第一til群体，该肿瘤样本由来自受试者的癌症的肿瘤的一次以上小活体组织切片、粗针活体组织切片或、针吸活体组织切片获得；
144、(b)通过在包含il-2、okt-3和抗原呈递细胞(apc)的第二细胞培养基中培养第一til群体来进行起始第一扩增，产生第二til群体，其中，起始第一扩增进行约7或8天的第一时间段，获得第二til群体，第二til群体的数目大于第一til群体；
145、(c)通过使第二til群体与包含il-2、okt-3和apc的第三细胞培养基接触来进行快速第二扩增，产生第三til群体，其中，快速第二扩增进行约11天的第二时间段，获得第三til群体，第三til群体为治疗性til群体；
146、(d)收集自步骤(c)获得的治疗性til群体；以及
147、(e)在步骤(f)中的收集之前或之后的任何时间修饰til的一部分，使得经修饰的til中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
148、在本文提供的方法的一些实施例中，癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(nsclc)、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、由人乳头状瘤病毒引起的癌症、头颈癌(包括头颈鳞状细胞癌(hnscc))、肾癌和肾细胞癌。
149、一方面，本文提供了扩增t细胞的方法，其包括：
150、(a)通过培养第一t细胞群体以实现生长及启动第一t细胞群体的活化来进行自供体获得的第一t细胞群体的起始第一扩增；
151、(b)在步骤(a)中启动的第一t细胞群体的活化开始衰减之后，通过培养第一t细胞群体以实现生长及增强第一t细胞群体的活化来进行第一t细胞群体的快速第二扩增，获得第二t细胞群体；
152、(c)收集第二t细胞群体；以及
153、(d)在步骤(c)中的收集之前或之后的任何时间修饰t细胞的一部分，使得经修饰的t细胞中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
154、另一方面，本文提供了扩增t细胞的方法，其包括：
155、(a)通过培养第一t细胞群体以实现生长及启动第一t细胞群体的活化来进行来自肿瘤样本的第一t细胞群体的起始第一扩增，该肿瘤样本自供体中的肿瘤的一次以上小活体组织切片、粗针活体组织切片或针吸活体组织切片获得；
156、(b)在步骤(a)中启动的第一t细胞群体的活化开始衰减之后，通过培养第一t细胞群体以实现生长及增强第一t细胞群体的活化来进行第一t细胞群体的快速第二扩增，获得第二t细胞群体；
157、(c)收集第二t细胞群体；以及
158、(d)在步骤(e)中的收集之前或之后的任何时间修饰t细胞的一部分，使得经修饰的t细胞中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
159、一方面，本文提供了扩增来自外周血的外周血淋巴细胞(pbl)的方法，该方法包括以下步骤：
160、(a)自患者的外周血获得外周血单核细胞(pbmc)的样本；
161、(b)将所述pbmc在包含第一细胞培养基的培养物中培养选自如下的时间段：约9天、约10天、约11天、约12天、约13天以及约14天，从而实现来自所述pbmc的外周血淋巴细胞(pbl)的扩增，第一细胞培养基具有il-2、抗cd3/抗cd28抗体和第一抗生素组合；
162、(c)自步骤(b)中的培养物收集pbl；以及
163、(d)在步骤(c)中的收集之前或之后的任何时间修饰pbl的一部分，使得经修饰的pbl中的每一个包含与其表面膜缔合的免疫调节组合物。
164、在一些实施例中，患者已用依鲁替尼(ibrutinib)或另一种白介素-2诱导型t细胞激酶(itk)抑制剂预治疗。在某些实施例中，患者对用依鲁替尼或另一种itk抑制剂的治疗而言是难治性的。
165、在一些实施例中，免疫调节组合物包含一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白，所述膜锚定的免疫调节融合蛋白各自包含一种以上免疫调节剂和细胞膜锚部分。
166、在示例性实施例中，一种以上免疫调节剂包含一种以上细胞因子。在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
167、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-2。在一些实施例中，il-2为人il-2。在示例性实施例中，人il-2具有seq id no：272的氨基酸序列。
168、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-12。在某些实施例中，il-12包含连接至人il-12p40亚基的人il-12p35亚基。在某些实施例中，人il-12p35亚基具有seq id no：267的氨基酸序列，人il-12p40亚基具有seq id no：268的氨基酸序列。
169、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-15。在一些实施例中，il-15为人il-15。在示例性实施例中，人il-15具有seq id no：258的氨基酸序列。
170、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-18。在一些实施例中，il-18为人il-18。在某些实施例中，人il-18具有seq id no：269或seq id no：270的氨基酸序列。
171、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-21。在某些实施例中，il-21为人il-21。在一些实施例中，人il-21具有seq id no：251的氨基酸序列。
172、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-15和il-21。在一些实施例中，il-15为人il-15，il-21为人il-21。在某些实施例中，人il-15具有seq id no：258的氨基酸序列，人il-21具有seq id no：271的氨基酸序列。
173、在一些实施例中，一种以上免疫调节剂包含cd40激动剂。在某些实施例中，cd40激动剂为抗cd40结合结构域或cd40l。在示例性实施例中，cd40激动剂为包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)的cd40结合结构域。在一些实施例中，cd40结合结构域的vh和vl选自以下：a)具有seq id no：274的氨基酸序列的vh和具有seq id no：275的氨基酸序列的vl；b)具有seq id no：277的氨基酸序列的vh和具有seq id no：278的氨基酸序列的vl；c)具有seq id no：280的氨基酸序列的vh和具有seq id no：281的氨基酸序列的vl；以及d)具有seq id no：283的氨基酸序列的vh和具有seq id no：284的氨基酸序列的vl。在示例性实施例中，cd40结合结构域为scfv。
174、在一些实施例中，cd40激动剂为具有seq id no：273的氨基酸序列的人cd40l。
175、在一些实施例中，一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s-ia-l-c，式中，s为信号肽，ia为免疫调节剂，l为接头，c为细胞膜锚部分。
176、在一些实施例中，细胞膜锚部分包含cd8a跨膜-胞内结构域、b7-1跨膜结构域、b7-2跨膜结构域或cd8a跨膜结构域。在示例性实施例中，细胞膜锚部分包含细胞因子b7-1跨膜结构域。在一些实施例中，细胞膜锚部分具有seq id no：239的氨基酸序列。
177、在一些实施例中，免疫调节组合物包含两种或更多种不同的膜锚定的免疫调节融合蛋白，其中，不同的膜锚定的免疫调节融合蛋白中的每一种各自包含不同的免疫调节剂。在一些实施例中，不同的免疫调节剂选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf、gcsf或它们的变体，以及cd40激动剂。在一些实施例中，不同的免疫调节剂选自：il-12和il-15、il-15和il-18、il-15和il-21、cd40l和il-15、il-15和il-21，以及il-2和il-12。
178、在一些实施例中，经修饰的til包含第一膜锚定的免疫调节融合蛋白和第二膜锚定的免疫调节融合蛋白。
179、在一些实施例中，第一膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-15，第二膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-21。
180、在示例性实施例中，第一膜锚定的免疫调节融合蛋白和第二膜锚定的免疫调节融合蛋白的表达由经修饰的til中的nfat启动子控制。
181、在示例性实施例中，一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s-ia-l-c，式中，s为信号肽，ia为免疫调节剂，l为接头，c为细胞膜锚部分。在一些实施例中，ia为细胞因子。在示例性实施例中，ia选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。在一些实施例中，ia为il-2。在某些实施例中，ia为il-12。在一些实施例中，ia为il-15。在某些实施例中，ia为il-21。
182、例如，一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s1-ia1-l1-c1-l2-s2-ia2-l3-c2，式中，s1和s2各自独立地为信号肽，ia1和ia2各自独立地为免疫调节剂，l1-l3各自独立地为接头，c1和c2各自独立地为细胞膜锚部分。在一些实施例中，s1与s2相同。在某些实施例中，c1与c2相同。在一些实施例中，l2为可裂解接头。在示例性实施例中，l2为弗林蛋白酶(furin)可裂解接头。在一些实施例中，ia1和ia2各自独立地为细胞因子。
183、在一些实施例中，ia1和ia2各自独立地选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。在一些实施例中，ia1和ia2各自独立地选自il-2和il-12，其限制条件为ia1和ia2中的一个为il-2，另一个为il-12。在一些实施例中，ia1和ia2各自独立地选自：il-15和il-21，其限制条件为ia1和ia2中的一个为il-15，另一个为il-21。
184、在某些实施例中，修饰包括将编码融合蛋白的异源核酸引入til的一部分中并在经修饰的til的表面上表达融合蛋白。
185、在某些实施例中，修饰包括将编码融合蛋白之异源核酸引入til的一部分中并在经修饰的til的表面上表达融合蛋白。在一些实施例中，使用选自以下的一种以上方法将异源核酸引入经修饰的til的基因组中：crispr方法、tale方法、锌指方法和它们的组合。
186、在一些实施例中，免疫调节组合物包含融合蛋白，该融合蛋白包含连接至til表面抗原结合结构域的一种以上免疫调节剂。在一些实施例中，一种以上免疫调节剂包含一种以上细胞因子。在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-12。在某些实施例中，一种以上细胞因子包括il-15。在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-21。在某些实施例中，til表面抗原结合结构域包含抗体重链可变结构域和轻链可变结构域。在一些实施例中，til表面抗原结合结构域包含抗体或其片段。在一些实施例中，til表面抗原结合结构域对以下til表面抗原中的一种以上具有亲和力：cd45、cd4、cd8、cd3、cdlla、cdllb、cdllc、cd18、cd25、cd127、cd19、cd20、cd22、hla-dr、cd197、cd38、cd27、cd196、cxcr3、cxcr4、cxcr5、cd84、cd229、ccr1、ccr5、ccr4、ccr6、ccr8、ccr10、cd 16、cd56、cd 137、ox40或gitr。在某些实施例中，修饰包括将融合蛋白与til的一部分在允许融合蛋白与til的一部分结合的条件下孵育。
187、在一些实施例中，免疫调节组合物包含纳米颗粒，该纳米颗粒包含多种免疫调节剂。在一些实施例中，多种免疫调节剂通过可降解接头共价连接在一起。在某些实施例中，纳米颗粒包含在纳米颗粒表面上的至少一种聚合物、阳离子聚合物或阳离子嵌段共聚物。在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。在某些实施例中，一种以上细胞因子包括il-12。在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-15。在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-21。在一些实施例中，纳米颗粒为脂质体、蛋白纳米凝胶、核苷酸纳米凝胶、聚合物纳米颗粒或固态纳米颗粒。在一些实施例中，纳米颗粒为纳米凝胶。在某些实施例中，纳米颗粒还包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域结合以下抗原中的一种以上：cd45、cdlla(整合素α-l)、cd18(整合素β-2)、cd1lb、cd1lc、cd25、cd8或cd4。在一些实施例中，修饰包括将免疫调节组合物连接至til的一部分的表面。
188、在本文提供的方法的某些实施例中，对来自第一扩增的til或来自第二扩增的til或其两者进行修饰。在某些实施例中，对来自起始第一扩增的til或来自快速第二扩增的til或其两者进行修饰。
189、在本文提供的方法的一些实施例中，在第一扩增之后并在第二扩增之前进行修饰。在一些实施例中，在起始第一扩增之后并在快速第二扩增之前进行修饰，或在这两个时间点时进行修饰。在某些实施例中，在第二扩增之后进行修饰。在一些实施例中，在快速第二扩增之后进行修饰。在一些实施例中，在收集之后进行修饰。
190、在某些实施例中，第一扩增进行约11天的时间段。在一些实施例中，起始第一扩增进行约11天的时间段。
191、在本文提供的方法的一些实施例中，在第一扩增中，il-2以1000iu/ml与6000iu/ml之间的初始浓度存在于细胞培养基中。在某些实施例中，il-2在起始第一扩增中的细胞培养基中以1000iu/ml与6000iu/ml之间的初始浓度存在。
192、在一些实施例中，在第二扩增步骤中，il-2以1000iu/ml与6000iu/ml之间的初始浓度存在且okt-3抗体以约30ng/ml的初始浓度存在。在一些实施例中，在快速第二扩增步骤中，il-2以1000iu/ml与6000iu/ml之间的初始浓度存在且okt-3抗体以约30ng/ml的初始浓度存在。
193、在一些实施例中，使用透气容器进行第一扩增。在某些实施例中，使用透气容器进行起始第一扩增。在一些实施例中，使用透气容器进行第二扩增。在某些实施例中，使用透气容器进行快速第二扩增。
194、在本文提供的方法的一些实施例中，第一扩增的细胞培养基还包含选自如下的细胞因子：il-4、il-7、il-15、il-21和它们的组合。在某些实施例中，起始第一扩增的细胞培养基还包含选自如下的细胞因子：il-4、il-7、il-15、il-21和它们的组合。在一些实施例中，第二扩增的细胞培养基还包含选自如下的细胞因子：il-4、il-7、il-15、il-21和它们的组合。在某些实施例中，快速第二扩增的细胞培养基还包含选自如下的细胞因子：il-4、il-7、il-15、il-21和它们的组合。
195、在本文提供的治疗方法的一些实施例中，方法还包括在向患者施用til之前用非骨髓清除式淋巴细胞耗竭方案治疗患者的步骤。在一些实施例中，非骨髓清除式淋巴细胞耗竭方案包括以下步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺两天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨(fludarabine)三天。在一些实施例中，非骨髓清除式淋巴细胞耗竭方案包括以下步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺并且以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨两天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨三天。在某些实施例中，非骨髓清除式淋巴细胞耗竭方案包括以下步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺并且以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨两天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨一天。在某些实施例中，将环磷酰胺与美司钠(mesna)一起施用。
196、在本文提供的治疗方法的一些实施例中，方法还包括在向患者施用til之后第二天开始用il-2方案治疗患者的步骤。在本文提供的治疗方法的一些实施例中，方法还包括在向患者施用til的同一天开始用il-2方案治疗患者的步骤。在一些实施例中，il-2方案为包含600,000或720,000iu/kg阿地白介素(aldesleukin)或其生物类似物或变体的高剂量il-2方案，其以每八小时一次15分钟推注的静脉内输注形式施用直至耐受。
197、在本文提供的方法的一些实施例中，施用治疗有效的til群体，该治疗有效的til群体包含约2.3×1010至约13.7×1010个til。
198、在本文提供的方法的一些实施例中，起始第一扩增和快速第二扩增进行21天以下的时间段。在一些实施例中，起始第一扩增和快速第二扩增进行16或17天以下的时间段。在某些实施例中，起始第一扩增进行7或8天以下的时间段。在一些实施例中，快速第二扩增进行11天以下的时间段。
199、在本文提供的方法的一些实施例中，步骤(c)中的第一扩增和步骤(d)中的第二扩增各自单独地在11天的时间段内进行。在本文提供的方法的一些实施例中，步骤(a)至(f)进行约10天至约22天。
200、在本文提供的方法的一些实施例中，经修饰的til还包含基因修饰，该基因修饰导致至少一部分治疗性til群体中一种以上免疫检查点基因的表达的沉默或减少。在一些实施例中，一种以上免疫检查点基因选自：pd-1、ctla-4、lag-3、havcr2(tim-3)、cish、tgfβ、pka、cbl-b、ppp2ca、ppp2cb、ptpn6、ptpn22、pdcd1、btla、cd160、tigit、tet2、cd96、crtam、lair1、siglec7、siglec9、cd244、tnfrsf10b、tnfrsf10a、casp8、casp10、casp3、casp6、casp7、fadd、fas、smad2、smad3、smad4、smad10、ski、skil、tgif1、il10ra、il10rb、hmox2、il6r、il6st、eif2ak4、csk、pag1、sit1、foxp3、prdm1、batf、gucy1a2、gucy1a3、gucy1b2、gucy1b3、tox、socs1、ankrd11和bcor。在某些实施例中，一种以上免疫检查点基因选自：pd-1、ctla-4、lag-3、havcr2(tim-3)、cish、tgfβ和pka。
201、在一些实施例中，经修饰的til还包含基因修饰，该基因修饰导致至少一部分治疗性til群体中一种以上免疫检查点基因的表达的增强，该一种以上免疫检查点基因选自：ccr2、ccr4、ccr5、cxcr2、cxcr3、cx3cr1、il-2、il-4、il-7、il-10、il-15、il-21、notch 1/2胞内结构域(icd)和/或notch配体mdll1。在某些实施例中，使用可编程核酸酶进行基因修饰，该可编程核酸酶介导一种以上免疫检查点基因处的双链或单链断裂的产生。在一些实施例中，使用选自如下的一种以上方法进行基因修饰：crispr方法、tale方法、锌指方法和它们的组合。在某些实施例中，使用crispr方法进行基因修饰。在一些实施例中，crispr方法为crispr/cas9方法。在某些实施例中，使用tale方法进行基因修饰。在一些实施例中，使用锌指方法进行基因修饰。
202、在一些实施例中，经修饰的til被修饰以在细胞表面上瞬时表达免疫调节组合物。在一些实施例中，免疫调节组合物包含一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白，其中，各融合蛋白包含一种以上免疫调节剂和细胞膜锚部分。
203、在示例性实施例中，一种以上免疫调节剂包含一种以上细胞因子。在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
204、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-2。在一些实施例中，il-2为人il-2。在示例性实施例中，人il-2具有seq id no：272的氨基酸序列。
205、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-12。在某些实施例中，il-12包含连接至人il-12p40亚基的人il-12p35亚基。在某些实施例中，人il-12p35亚基具有seq id no：267的氨基酸序列，人il-12p40亚基具有seq id no：268的氨基酸序列。
206、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-15。在一些实施例中，il-15为人il-15。在示例性实施例中，人il-15具有seq id no：258的氨基酸序列。
207、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-18。在一些实施例中，il-18为人il-18。在某些实施例中，人il-18具有seq id no：269或seq id no：270的氨基酸序列。
208、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-21。在某些实施例中，il-21为人il-21。在一些实施例中，人il-21具有seq id no：271的氨基酸序列。
209、在一些实施例中，一种以上细胞因子包括il-15和il-21。在一些实施例中，il-15为人il-15，il-21为人il-21。在某些实施例中，人il-15具有seq id no：258的氨基酸序列，人il-21具有seq id no：271的氨基酸序列。
210、在一些实施例中，一种以上免疫调节剂包含cd40激动剂。在某些实施例中，cd40激动剂为抗cd40结合结构域或cd40l。在示例性实施例中，cd40激动剂为包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)的cd40结合结构域。在一些实施例中，cd40结合结构域的vh和vl选自：a)具有seq id no：274的氨基酸序列的vh和具有seq id no：275的氨基酸序列的vl；b)具有seq id no：277的氨基酸序列的vh和具有seq id no：278的氨基酸序列的vl；c)具有seq id no：280的氨基酸序列的vh和具有seq id no：281的氨基酸序列的vl；和d)具有seq id no：283的氨基酸序列的vh和具有seq id no：284的氨基酸序列的vl。在示例性实施例中，cd40结合结构域为scfv。
211、在一些实施例中，cd40激动剂为具有seq id no：273的氨基酸序列的人cd40l。在一些实施例中，膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端根据下式：s-ia-l-c，式中，s为信号肽，ia为免疫调节剂，l为接头，c为细胞膜锚部分。
212、在一些实施例中，细胞膜锚部分包含cd8a跨膜-胞内结构域、b7-1跨膜结构域、b7-2跨膜结构域或cd8a跨膜结构域。在示例性实施例中，细胞膜锚部分包含b7-1跨膜结构域。在一些实施例中，细胞膜锚部分具有seq id no：239的氨基酸序列。
213、在一些实施例中，免疫调节组合物包含两种或更多种不同的膜锚定的免疫调节融合蛋白，其中，不同的膜锚定的免疫调节融合蛋白中的每一种各自包含不同的免疫调节剂。在一些实施例中，不同的免疫调节剂选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf、gcsf或它们的变体，以及cd40激动剂。在一些实施例中，不同的免疫调节剂选自：il-12和il-15、il-15和il-18、cd40l、il-15和il-21，和il-15，以及il-2和il-12。
214、在一些实施例中，经修饰的til通过用编码融合蛋白的核酸转染til来修饰以在细胞表面上瞬时表达融合蛋白，该融合蛋白包含一种以上免疫调节剂和细胞膜锚部分。在一些实施例中，核酸为rna。在一些实施例中，rna为mrna。在一些实施例中，通过电穿孔用mrna转染til。在一些实施例中，在第一扩增之后并在第二扩增之前通过电穿孔用mrna转染til。在一些实施例中，在第一扩增之前通过电穿孔用mrna转染til。在一些实施例中，该方法还包括：在用mrna转染til之前，通过用抗cd3激动剂孵育来活化til。在一些实施例中，抗cd3激动剂为okt-3。在一些实施例中，在用mrna转染til之前，通过用抗cd3激动剂孵育til与约1至3天来活化til。
215、在一些实施例中，经修饰的til通过使用微流体装置暂时性破坏til的细胞膜来用编码融合蛋白的核酸转染，从而实现核酸的转染。
216、在一些实施例中，使用人工抗原呈递细胞(aapc)代替apc。在一些实施例中，aapc包括表达hla-a/b/c、cd64、cd80、icos-l和cd58的细胞。在一些实施例中，aapc包括molm-14细胞。在一些实施例中，aapc包括molm-13细胞。在一些实施例中，aapc包括molm-14细胞，该molm-14细胞内源性表达hla-a/b/c、cd64、cd80、icos-l和cd58。在一些实施例中，aapc包括molm-14细胞，该molm-14细胞内源性表达hla-a/b/c、cd64、cd80、icos-l和cd58，该molm-14细胞经永久性基因编辑以表达cd86。在一些实施例中，用一种以上病毒载体转导molm-14细胞，其中，该一种以上病毒载体包含编码cd86的核酸序列和编码4-1bbl的核酸序列，molm-14细胞表达cd86和4-1bbl。在一些实施例中，aapc经瞬时性基因编辑以在细胞表面上瞬时表达包含免疫调节融合蛋白的免疫调节组合物。在一些实施例中，aapc在细胞表面上瞬时表达免疫调节融合蛋白，该融合蛋白包含与细胞因子融合的膜锚。在一些实施例中，aapc在细胞表面上瞬时表达与选自如下的细胞因子融合的膜锚：il-2、il-7、il-10、il-12、il-15和il-21。在一些实施例中，aapc在细胞表面上瞬时表达与选自如下的细胞因子融合的膜锚：il-2、il-12、il-15和il-21。在一些实施例中，aapc在细胞表面上瞬时表达与选自如下的细胞因子融合的膜锚：il-12、il-15和il-21。
217、在一些实施例中，经修饰的til经基因修饰以在细胞表面上表达免疫调节组合物。在一些实施例中，免疫调节组合物包含一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白，该一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白各自包含一种以上免疫调节剂和细胞膜锚部分。在一些实施例中，一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-2。在某些实施例中，一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-15。在示例性实施例中，一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-18。在一些实施例中，一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-21。
218、在某些实施例中，经修饰的til包含第一膜锚定的免疫调节融合蛋白和第二膜锚定的免疫调节融合蛋白。在一些实施例中，第一膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-15，第二膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-21。在一些实施例中，第一膜锚定的免疫调节融合蛋白和第二免疫调节融合蛋白的表达由经修饰的til中的nfat启动子控制。
219、在一些实施例中，一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s-ia-l-c，式中，s为信号肽，ia为免疫调节剂，l为接头，c为细胞膜锚部分。在一些实施例中，ia为细胞因子。在示例性实施例中，ia选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。在一些实施例中，ia为il-2。在某些实施例中，ia为il-12。在一些实施例中，ia为il-15。在某些实施例中，ia为il-21。在一些实施例中，l为cd8a跨膜-胞内结构域、b7-1跨膜结构域、b7-2跨膜结构域或cd8a跨膜结构域。在某些实施例中，l为b7-1跨膜结构域。在一些实施例中，l具有seq id no：239的氨基酸序列。
220、在示例性实施例中，一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s1-ia1-l1-c1-l2-s2-ia2-l3-c2，式中，s1和s2各自独立地为信号肽，ia1和ia2各自独立地为免疫调节剂，l1-l3各自独立地为接头，c1和c2各自独立地为细胞膜锚部分。在一些实施例中，s1与s2相同。在示例性实施例中，c1与c2相同。在一些实施例中，l2为可裂解接头。在某些实施例中，l2为弗林蛋白酶可裂解接头。
221、在一些实施例中，ia1和ia2各自独立地为细胞因子。在一些实施例中，ia1和ia2各自独立地选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。在一些实施例中，ia1和ia2各自独立地选自il-2和il-12，其限制条件为ia1和ia2中的一个为il-2，另一个为il-12。在一些实施例中，ia1和ia2各自独立地选自：il-15和il-21，其限制条件为ia1和ia2中的一个为il-15，另一个为il-21。
222、在示例性实施例中，c1和c2各自独立地为cd8a跨膜-胞内结构域、b7-1跨膜结构域、b7-2跨膜结构域或cd8a跨膜结构域。在一些实施例中，c1和c2各自为b7-1跨膜结构域。在一些实施例中，c1和c2各自具有seq id no：239的氨基酸序列。
223、在某些实施例中，经修饰的til在nfat启动子的控制下表达一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白。在一些实施例中，经修饰的til用逆转录病毒载体转导以表达一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白。在一些实施例中，经修饰的til用慢病毒载体转导以表达一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白。
1.一种治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，所述方法包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，其中，可选地，患者或受试者已接受至少一种先前疗法，
2.一种治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，所述方法包括施用经修饰的肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，所述方法包括以下步骤：
3.一种治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，所述方法包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，所述方法包括以下步骤：
4.一种治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，所述方法包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，所述方法包括以下步骤：
5.一种治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，所述方法包括施用经修饰的肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，所述方法包括以下步骤：
6.一种治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，所述方法包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，所述方法包括以下步骤：
7.一种治疗有需要的患者或受试者的癌症的方法，所述方法包括施用肿瘤浸润性淋巴细胞(til)群体，所述方法包括以下步骤：
8.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括：
9.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括以下步骤：
10.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括以下步骤：
11.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括以下步骤：
12.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括以下步骤：
13.根据权利要求9至12中任一项所述的方法，其中，第一扩增分为第一步骤和第二步骤，所述方法还包括通过在含有il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行第一扩增的第一步骤，产生自肿瘤碎片或样本脱出的til，将肿瘤碎片或样本中剩余的til与自肿瘤碎片或样本脱出的til分离，可选地，消化肿瘤碎片或样本以产生肿瘤消化物；以及通过在细胞培养基中培养肿瘤碎片或样本或肿瘤消化物中的剩余til来进行第一扩增的第二步骤，产生第二til群体。
14.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括以下步骤：
15.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括以下步骤：
16.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括：
17.根据权利要求16所述的方法，其中，在步骤(b)中，细胞培养基还包含抗原呈递细胞(apc)，步骤(c)中的培养基中的apc的数目大于步骤(b)中的培养基中的apc的数目。
18.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括：
19.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括：
20.根据权利要求19所述的方法，其中，在步骤(a)中，细胞培养基还包含抗原呈递细胞(apc)，步骤(c)中的培养基中的apc的数目大于步骤(b)中的培养基中的apc的数目。
21.根据权利要求14至18中任一项所述的方法，其中，起始第一扩增分为第一步骤和第二步骤，所述方法还包括通过在含有il-2的细胞培养基中培养第一til群体来进行起始第一扩增的第一步骤，产生自肿瘤碎片或样本脱出的til，将肿瘤碎片或样本中剩余的til与自肿瘤碎片或样本脱出的til分离，可选地，消化肿瘤碎片或样本以产生肿瘤消化物；以及通过在细胞培养基中培养肿瘤碎片或样本或肿瘤消化物中的剩余til来进行起始第一扩增的第二步骤，产生第二til群体。
22.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增为治疗性til群体的方法，所述方法包括：
23.一种将肿瘤浸润性淋巴细胞(til)扩增成治疗性til群体的方法，所述方法包括：
24.根据权利要求1至18和21至23中任一项所述的方法，其中，所述癌症选自：黑色素瘤、卵巢癌、宫颈癌、非小细胞肺癌(nsclc)、肺癌、膀胱癌、乳腺癌、三阴性乳腺癌、由人乳头状瘤病毒引起的癌症、头颈癌(包括头颈部鳞状细胞癌(hnscc))、肾癌和肾细胞癌。
25.一种扩增t细胞的方法，所述方法包括：
26.一种扩增t细胞的方法，所述方法包括：
27.一种扩增来自外周血的外周血淋巴细胞(pbl)的方法，所述方法包括以下步骤：
28.根据权利要求27所述的方法，其中，患者已用依鲁替尼或另一种白介素-2诱导型t细胞激酶(itk)抑制剂预治疗。
29.根据权利要求26或28所述的方法，其中，患者对用依鲁替尼或另一种itk抑制剂的治疗而言是难治性的。
30.根据权利要求2至29中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节组合物包含一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白，所述膜锚定的免疫调节融合蛋白各自包含一种以上免疫调节剂和细胞膜锚部分。
31.根据权利要求30所述的方法，其中，所述一种以上免疫调节剂包括一种以上细胞因子。
32.根据权利要求31所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
33.根据权利要求32所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-12。
34.根据权利要求33所述的方法，其中，所述il-12包含连接至人il-12p40亚基的人il-12p35亚基。
35.根据权利要求34所述的方法，其中，所述人il-12p35亚基具有seq id no:247的氨基酸序列，所述人il-12p40亚基具有seq id no:248的氨基酸序列。
36.根据权利要求32所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-15。
37.根据权利要求36所述的方法，其中，所述il-15为人il-15。
38.根据权利要求37所述的方法，其中，所述人il-15具有seq id no:258的氨基酸序列。
39.根据权利要求32所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-18。
40.根据权利要求39所述的方法，其中，所述il-18为人il-18。
41.根据权利要求40所述的方法，其中，所述人il-18具有seq id no:269或seq id no:270的氨基酸序列。
42.根据权利要求32所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-21。
43.根据权利要求42所述的方法，其中，所述il-21为人il-21。
44.根据权利要求43所述的方法，其中，所述人il-21具有seq id no:271的氨基酸序列。
45.根据权利要求30所述的方法，其中，所述一种以上免疫调节剂包括cd40激动剂。
46.根据权利要求45所述的方法，其中，所述cd40激动剂为抗cd40结合结构域或cd40l。
47.根据权利要求46所述的方法，其中，所述cd40激动剂为包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)的cd40结合结构域。
48.根据权利要求47所述的方法，其中，所述cd40结合结构域的vh和vl选自以下：
49.根据权利要求47或48所述的方法，其中，所述cd40结合结构域为scfv。
50.根据权利要求46所述的方法，其中，所述cd40激动剂为具有seq id no:273的氨基酸序列的人cd40l。
51.根据权利要求30至50中任一项所述的方法，其中，所述膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端根据下式：s-ia-l-c，式中，s为信号肽，ia为免疫调节剂，l为接头，c为细胞膜锚部分。
52.根据权利要求30至51中任一项所述的方法，其中，所述细胞膜锚部分包含cd8a跨膜-胞内结构域、b7-1跨膜结构域、b7-2跨膜结构域或cd8a跨膜结构域。
53.根据权利要求52所述的方法，其中，所述细胞膜锚部分包含b7-1跨膜结构域。
54.根据权利要求53所述的方法，其中，所述细胞膜锚部分具有seq id no:239的氨基酸序列。
55.根据权利要求30至54中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节组合物包含两种以上不同的膜锚定的免疫调节融合蛋白，所述不同的膜锚定的免疫调节融合蛋白中的每一种各自包含不同的免疫调节剂。
56.根据权利要求55所述的方法，其中，所述不同的免疫调节剂选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf、gcsf或它们的变体，以及cd40激动剂。
57.根据权利要求56所述的方法，其中，所述不同的免疫调节剂选自：il-12和il-15、il-15和il-18、cd40l和il-15、il-15和il-21，以及il-2和il-12。
58.根据权利要求30至57中任一项所述的方法，其中，所述修饰包括将编码融合蛋白的异源核酸引入til的一部分中，在经修饰的til的表面上表达所述融合蛋白。
59.根据权利要求58所述的方法，其中，使用一种以上选自以下的方法将所述异源核酸引入经修饰的til的基因组中：crispr方法、tale方法、锌指方法和它们的组合。
60.根据权利要求2至29中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节组合物包含融合蛋白，所述融合蛋白包含一种以上连接至til表面抗原结合结构域的免疫调节剂。
61.根据权利要求60所述的方法，其中，所述一种以上免疫调节剂包含一种以上细胞因子。
62.根据权利要求61所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
63.根据权利要求62所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-12。
64.根据权利要求62所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-15。
65.根据权利要求62所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-21。
66.根据权利要求60至65中任一项所述的方法，其中，til表面抗原结合结构域包含抗体重链可变结构域和轻链可变结构域。
67.根据权利要求60至66中任一项所述的方法，其中，til表面抗原结合结构域包含抗体或其片段。
68.根据权利要求43至50中任一项所述的方法，其中，til表面抗原结合结构域对以下til表面抗原中的一种以上具有亲和力：cd45、cd4、cd8、cd3、cdlla、cdllb、cdllc、cd18、cd25、cd127、cd19、cd20、cd22、hla-dr、cd197、cd38、cd27、cd196、cxcr3、cxcr4、cxcr5、cd84、cd229、ccr1、ccr5、ccr4、ccr6、ccr8、ccr10、cd 16、cd56、cd 137、ox40或gitr。
69.根据权利要求60至68中任一项所述的方法，其中，所述修饰包括将所述融合蛋白与所述til的一部分在允许所述融合蛋白与所述til的一部分结合的条件下孵育。
70.根据权利要求2至29中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节组合物包含纳米颗粒，所述纳米颗粒包含多种免疫调节剂。
71.根据权利要求70所述的方法，其中，所述多种免疫调节剂通过可降解接头共价连接在一起。
72.根据权利要求71所述的方法，其中，所述纳米颗粒包含在所述纳米颗粒的表面上的至少一种聚合物、阳离子聚合物或阳离子嵌段共聚物。
73.根据权利要求70至72中任一项所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
74.根据权利要求73所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-12。
75.根据权利要求73所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-15。
76.根据权利要求73所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-21。
77.根据权利要求70至76中任一项所述的方法，其中，所述纳米颗粒为脂质体、蛋白纳米凝胶、核苷酸纳米凝胶、聚合物纳米颗粒或固态纳米颗粒。
78.根据权利要求77所述的方法，其中，所述纳米颗粒为纳米凝胶。
79.根据权利要求70至78中任一项所述的方法，其中，所述纳米颗粒还包含抗原结合结构域，所述抗原结合结构域结合以下抗原中的一种以上：cd45、cdlla(整合素α-l)、cd 18(整合素β-2)、cd1lb、cd1lc、cd25、cd8或cd4。
80.根据权利要求70至79中任一项所述的方法，其中，所述修饰包括将所述免疫调节组合物连接至所述til的一部分的表面。
81.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，对来自第一扩增的til或来自第二扩增的til或其两者进行修饰。
82.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，对来自起始第一扩增的til或来自快速第二扩增的til或其两者进行修饰。
83.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，在第一扩增之后并在第二扩增之前进行修饰。
84.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，在起始第一扩增之后并在快速第二扩增之前进行修饰，或者在这两个时间点时进行修饰。
85.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，在第二扩增之后进行修饰。
86.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，在快速第二扩增之后进行修饰。
87.根据权利要求2至63中任一项所述的方法，其中，在收集之后进行修饰。
88.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，所述第一扩增进行约11天的时间段。
89.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，所述起始第一扩增进行约11天的时间段。
90.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，在第一扩增中，所述il-2以1000iu/ml与6000iu/ml之间的初始浓度存在于细胞培养基中。
91.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，在起始第一扩增中，所述il-2以1000iu/ml与6000iu/ml之间的初始浓度存在于细胞培养基中。
92.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，在第二扩增步骤中，所述il-2以1000iu/ml与6000iu/ml之间的初始浓度存在，所述okt-3抗体以约30ng/ml的初始浓度存在。
93.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，在快速第二扩增步骤中，所述il-2以1000iu/ml与6000iu/ml之间的初始浓度存在，所述okt-3抗体以约30ng/ml的初始浓度存在。
94.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，所述第一扩增使用透气容器进行。
95.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，所述起始第一扩增使用透气容器进行。
96.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，所述第二扩增使用透气容器进行。
97.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，所述快速第二扩增使用透气容器进行。
98.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，所述第一扩增的细胞培养基还包含选自如下的细胞因子：il-4、il-7、il-15、il-21和它们的组合。
99.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，起始第一扩增的细胞培养基进一步包含选自如下的细胞因子：il-4、il-7、il-15、il-21和它们的组合。
100.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，第二扩增的细胞培养基进一步包含选自如下的细胞因子：il-4、il-7、il-15、il-21和它们的组合。
101.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，快速第二扩增的细胞培养基进一步包含选自如下的细胞因子：il-4、il-7、il-15、il-21和它们的组合。
102.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，所述方法还包括在向患者施用til之前用非骨髓清除式淋巴细胞耗竭方案治疗患者的步骤。
103.根据权利要求102所述的方法，其中，所述非骨髓清除式淋巴细胞耗竭方案包括以下步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺两天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨三天。
104.根据权利要求102所述的方法，其中，所述非骨髓清除式淋巴细胞耗竭方案包括以下步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺并且以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨两天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨三天。
105.根据权利要求102所述的方法，其中，所述非骨髓清除式淋巴细胞耗竭方案包括以下步骤：以60mg/m2/天的剂量施用环磷酰胺并且以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨两天，然后以25mg/m2/天的剂量施用氟达拉滨一天。
106.根据权利要求103至105中任一项所述的方法，其中，环磷酰胺与美司钠(mesna)一起施用。
107.根据权利要求1至7或102至106中任一项所述的方法，所述方法还包括在向患者施用til之后的第二天开始用il-2方案治疗患者的步骤。
108.根据权利要求1至7或102至106中任一项所述的方法，所述方法还包括在向患者施用til的同一天开始用il-2方案治疗患者的步骤。
109.根据权利要求107或108所述的方法，其中，所述il-2方案为包含600,000或720,000iu/kg的阿地白介素或其生物类似物或变体的高剂量il-2方案，所述方案以每八小时一次15分钟推注的静脉内输注形式施用直至耐受。
110.根据权利要求1至7或102至109中任一项所述的方法，其中，施用治疗有效的til群体，所述til群体包含约2.3×1010至约13.7×1010个til。
111.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，所述起始第一扩增和所述快速第二扩增进行21天以下的时间段。
112.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，所述起始第一扩增和所述快速第二扩增进行16天或17天以下的时间段。
113.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，所述起始第一扩增进行7或8天以下的时间段。
114.根据权利要求6至8或14至23中任一项所述的方法，其中，所述快速第二扩增进行11天以下的时间段。
115.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，步骤(c)中的第一扩增和步骤(d)中的第二扩增各自单独地在11天的时间段内进行。
116.根据权利要求2至5或9至13中任一项所述的方法，其中，步骤(a)至(f)在约10天至约22天内进行。
117.根据权利要求2至116中任一项所述的方法，其中，经修饰的til还包含基因修饰，所述基因修饰引起至少一部分治疗性til群体中的一种以上免疫检查点基因的表达的沉默或降低。
118.根据权利要求117所述的方法，其中，所述一种以上免疫检查点基因选自：pd-1、ctla-4、lag-3、havcr2(tim-3)、cish、tgfβ、pka、cbl-b、ppp2ca、ppp2cb、ptpn6、ptpn22、pdcd1、btla、cd160、tigit、tet2、cd96、crtam、lair1、siglec7、siglec9、cd244、tnfrsf10b、tnfrsf10a、casp8、casp10、casp3、casp6、casp7、fadd、fas、smad2、smad3、smad4、smad10、ski、skil、tgif1、il10ra、il10rb、hmox2、il6r、il6st、eif2ak4、csk、pag1、sit1、foxp3、prdm1、batf、gucy1a2、gucy1a3、gucy1b2、gucy1b3、tox、socs1、ankrd11和bcor。
119.根据权利要求117所述的方法，其中，所述一种以上免疫检查点基因选自：pd-1、ctla-4、lag-3、havcr2(tim-3)、cish、tgfβ和pka。
120.根据权利要求2至119中任一项所述的方法，其中，经修饰的til还包含基因修饰，所述基因修饰引起至少一部分治疗性til群体中的一种以上免疫检查点基因的表达的增强，所述一种以上免疫检查点基因选自：ccr2、ccr4、ccr5、cxcr2、cxcr3、cx3cr1、il-2、il-4、il-7、il-10、il-15、il-21、notch 1/2胞内结构域(icd)和/或notch配体mdll1。
121.根据权利要求117至120中任一项所述的方法，其中，所述基因修饰使用可编程核酸酶进行，所述可编程核酸酶介导所述一种以上免疫检查点基因处的双链或单链断裂的产生。
122.根据权利要求117至120中任一项所述的方法，其中，所述基因修饰使用一种以上选自以下的方法进行：crispr方法、tale方法、锌指方法和它们的组合。
123.根据权利要求122所述的方法，其中，所述基因修饰使用crispr方法进行。
124.根据权利要求123所述的方法，其中，所述crispr方法为crispr/cas9方法。
125.根据权利要求122所述的方法，其中，所述基因修饰使用tale方法进行。
126.根据权利要求122所述的方法，其中，所述基因修饰使用锌指方法进行。
127.根据权利要求1至23或81至116中任一项所述的方法，其中，经修饰的til被修饰以在细胞的表面上瞬时表达所述免疫调节组合物。
128.根据权利要求127所述的方法，其中，所述免疫调节组合物包含一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白，各融合蛋白包含一种以上免疫调节剂和细胞膜锚部分。
129.根据权利要求128所述的方法，其中，所述一种以上免疫调节剂包含一种以上细胞因子。
130.根据权利要求129所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
131.根据权利要求130所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-2。
132.根据权利要求131所述的方法，其中，所述il-2为人il-2。
133.根据权利要求132所述的方法，其中，所述人il-2具有seq id no:272的氨基酸序列。
134.根据权利要求130所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-12。
135.根据权利要求134所述的方法，其中，所述il-12包含连接至人il-12p40亚基的人il-12p35亚基。
136.根据权利要求135所述的方法，其中，所述人il-12p35亚基具有seq id no:267的氨基酸序列，所述人il-12p40亚基具有seq id no:268的氨基酸序列。
137.根据权利要求130所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-15。
138.根据权利要求137所述的方法，其中，所述il-15为人il-15。
139.根据权利要求138所述的方法，其中，所述人il-15具有seq id no:258的氨基酸序列。
140.根据权利要求130所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-18。
141.根据权利要求140所述的方法，其中，所述il-18为人il-18。
142.根据权利要求141所述的方法，其中，所述人il-18具有seq id no:269或seq idno:270的氨基酸序列。
143.根据权利要求130所述的方法，其中，所述一种以上细胞因子包括il-21。
144.根据权利要求143所述的方法，其中，所述il-21为人il-21。
145.根据权利要求144所述的方法，其中，所述人il-21具有seq id no:271的氨基酸序列。
146.根据权利要求128所述的方法，其中，所述一种以上免疫调节剂包含cd40激动剂。
147.根据权利要求146所述的方法，其中，所述cd40激动剂为抗cd40结合结构域或cd40l。
148.根据权利要求147所述的方法，其中，所述cd40激动剂为包含重链可变结构域(vh)和轻链可变结构域(vl)的cd40结合结构域。
149.根据权利要求148所述的方法，其中，所述cd40结合结构域的vh和vl选自：
150.根据权利要求148或149所述的方法，其中，所述cd40结合结构域为scfv。
151.根据权利要求46所述的方法，其中，所述cd40激动剂为具有seq id no:273的氨基酸序列的人cd40l。
152.根据权利要求128至151中任一项所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s-ia-l-c，式中，s为信号肽，ia为免疫调节剂，l为接头，c为细胞膜锚部分。
153.根据权利要求128至152中任一项所述的方法，其中，所述细胞膜锚部分包含cd8a跨膜-胞内结构域、b7-1跨膜结构域、b7-2跨膜结构域或cd8a跨膜结构域。
154.根据权利要求153所述的方法，其中，所述细胞膜锚部分包含b7-1跨膜结构域。
155.根据权利要求154所述的方法，其中，所述细胞膜锚部分具有seq id no:239的氨基酸序列。
156.根据权利要求128至155中任一项所述的方法，其中，所述免疫调节组合物包含两种以上不同的膜锚定的免疫调节融合蛋白，所述不同的膜锚定的免疫调节融合蛋白中的每一种各自包含不同的免疫调节剂。
157.根据权利要求156所述的方法，其中，所述不同的免疫调节剂选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf、gcsf或它们的变体，以及cd40激动剂。
158.根据权利要求157所述的方法，其中，所述不同的免疫调节剂选自：il-12和il-15、il-15和il-18、cd40l和il-15、il-15和il-21，以及il-2和il-12。
159.根据权利要求128至158中任一项所述的方法，其中，所述修饰包括将编码融合蛋白的异源核酸引入til的一部分中，在经修饰的til的表面上表达所述融合蛋白。
160.根据权利要求159所述的方法，其中，使用一种以上选自以下的方法将所述异源核酸引入经修饰的til的基因组：crispr方法、tale方法、锌指方法和它们的组合。
161.根据权利要求128至158中任一项所述的方法，其中，经修饰的til通过用编码所述融合蛋白的核酸转染til来修饰。
162.根据权利要求161所述的方法，其中，所述核酸为rna。
163.根据权利要求162所述的方法，其中，所述rna为mrna。
164.根据权利要求163所述的方法，其中，通过电穿孔用所述mrna转染til。
165.根据权利要求164所述的方法，其中，在第一扩增之后且在第二扩增之前，通过电穿孔用所述mrna转染til。
166.根据权利要求164所述的方法，其中，在第一扩增之前，通过电穿孔用所述mrna转染til。
167.根据权利要求161所述的方法，其中，经修饰的til通过使用微流体装置暂时性破坏til的细胞膜来用编码所述融合蛋白的核酸进行转染，从而允许所述核酸的转染。
168.根据权利要求163至167中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括在用所述mrna转染til之前，通过用抗cd3激动剂孵育来活化til。
169.根据权利要求168所述的方法，其中，所述抗cd3激动剂为okt-3。
170.根据权利要求168或169所述的方法，其中，在用所述mrna转染til之前，通过用所述抗cd3激动剂孵育til约1至3天来活化til。
171.一种组合物，所述组合物包含权利要求1至131中任一项所述的经修饰的til。
172.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至131中任一项所述的经修饰的til和药学上可接受的载体。
173.根据权利要求30所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-2。
174.根据权利要求30所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-15。
175.根据权利要求30所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-18。
176.根据权利要求30所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-21。
177.根据权利要求30所述的方法，其中，所述经修饰的til包含第一膜锚定的免疫调节融合蛋白和第二膜锚定的免疫调节融合蛋白。
178.根据权利要求177所述的方法，其中，所述第一膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-15，所述第二膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-21。
179.根据权利要求177或178所述的方法，其中，所述第一膜锚定的免疫调节融合蛋白和所述第二免疫调节融合蛋白的表达由经修饰的til中的nfat启动子控制。
180.根据权利要求30所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s-ia-l-c，式中，s为信号肽，ia为免疫调节剂，l为接头，c为细胞膜锚部分。
181.根据权利要求180所述的方法，其中，ia为细胞因子。
182.根据权利要求180所述的方法，其中，ia选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
183.根据权利要求180所述的方法，其中，ia为il-2。
184.根据权利要求180所述的方法，其中，ia为il-12。
185.根据权利要求180所述的方法，其中，ia为il-15。
186.根据权利要求180所述的方法，其中，ia为il-21。
187.根据权利要求30所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s1-ia1-l1-c1-l2-s2-ia2-l3-c2，式中，s1和s2各自独立地为信号肽，ia1和ia2各自独立地为免疫调节剂，l1至l3各自独立地为接头，c1和c2各自独立地为细胞膜锚部分。
188.根据权利要求187所述的方法，其中，s1与s2相同。
189.根据权利要求187或188所述的方法，其中，c1与c2相同。
190.根据权利要求187至189中任一项所述的方法，其中，l2为可裂解接头。
191.根据权利要求190所述的方法，其中，l2为弗林蛋白酶可裂解接头。
192.根据权利要求187至191中任一项所述的方法，其中，ia1和ia2各自独立地为细胞因子。
193.根据权利要求187至191中任一项所述的方法，其中，ia1和ia2各自独立地选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
194.根据权利要求187至191中任一项所述的方法，其中，ia1和ia2各自独立地选自il-2和il-12，限制条件为ia1和ia2中的一个为il-2且另一个为il-12。
195.根据权利要求187至191中任一项所述的方法，其中，ia1和ia2各自独立地选自il-15和il-21，限制条件为ia1和ia2中的一个为il-15且另一个为il-21。
196.根据权利要求1至126或173至195中任一项所述的方法，其中，经修饰的til被基因修饰，以在细胞的表面上表达所述免疫调节组合物。
197.根据权利要求196所述的方法，其中，所述免疫调节组合物包含一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白，所述膜锚定的免疫调节融合蛋白各自包含一种以上免疫调节剂和细胞膜锚部分。
198.根据权利要求197所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-2。
199.根据权利要求197所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-15。
200.根据权利要求197所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-18。
201.根据权利要求197所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-21。
202.根据权利要求197所述的方法，其中，经修饰的til包含第一膜锚定的免疫调节融合蛋白和第二膜锚定的免疫调节融合蛋白。
203.根据权利要求202所述的方法，其中，所述第一膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-15，所述第二膜锚定的免疫调节融合蛋白包含il-21。
204.根据权利要求202或203所述的方法，其中，所述第一膜锚定的免疫调节融合蛋白和所述第二免疫调节融合蛋白的表达由经修饰的til中的nfat启动子控制。
205.根据权利要求197所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s-ia-l-c，式中，s为信号肽，ia为免疫调节剂，l为接头，c为细胞膜锚部分。
206.根据权利要求205所述的方法，其中，ia为细胞因子。
207.根据权利要求205所述的方法，其中，ia选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
208.根据权利要求205所述的方法，其中，ia为il-2。
209.根据权利要求205所述的方法，其中，ia为il-12。
210.根据权利要求205所述的方法，其中，ia为il-15。
211.根据权利要求205所述的方法，其中，ia为il-21。
212.根据权利要求205至211中任一项所述的方法，其中，l为cd8a跨膜-胞内结构域、b7-1跨膜结构域、b7-2跨膜结构域或cd8a跨膜结构域。
213.根据权利要求205至211中任一项所述的方法，其中，l为b7-1跨膜结构域。
214.根据权利要求205至211中任一项所述的方法，其中，l具有seq id no:239的氨基酸序列。
215.根据权利要求197所述的方法，其中，所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白自n末端至c末端独立地根据下式：s1-ia1-l1-c1-l2-s2-ia2-l3-c2，式中，s1和s2各自独立地为信号肽，ia1和ia2各自独立地为免疫调节剂，l1至l3各自独立地为接头，c1和c2各自独立地为细胞膜锚部分。
216.根据权利要求215所述的方法，其中，s1与s2相同。
217.根据权利要求215或216所述的方法，其中，c1与c2相同。
218.根据权利要求215至217中任一项所述的方法，其中，l2为可裂解接头。
219.根据权利要求218所述的方法，其中，l2为弗林蛋白酶可裂解接头。
220.根据权利要求215至219中任一项所述的方法，其中，ia1和ia2各自独立地为细胞因子。
221.根据权利要求215至219中任一项所述的方法，其中，ia1和ia2各自独立地选自：il-2、il-6、il-7、il-9、il-12、il-15、il-18、il-21、il-23、il-27、ifnγ、tnfa、ifnα、ifnβ、gm-csf或gcsf或它们的变体。
222.根据权利要求215至219中任一项所述的方法，其中，ia1和ia2各自独立地选自il-2和il-12，限制条件为ia1和ia2中的一个为il-2且另一个为il-12。
223.根据权利要求215至219中任一项所述的方法，其中，ia1和ia2各自独立地选自il-15和il-21，限制条件为ia1和ia2中的一个为il-15且另一个为il-21。
224.根据权利要求215至223中任一项所述的方法，其中，c1和c2各自独立地为cd8a跨膜-胞内结构域、b7-1跨膜结构域、b7-2跨膜结构域或cd8a跨膜结构域。
225.根据权利要求215至223中任一项所述的方法，其中，c1和c2各自为b7-1跨膜结构域。
226.根据权利要求215至223中任一项所述的方法，其中，c1和c2各自具有seq id no:239的氨基酸序列。
227.根据权利要求197至226中任一项所述的方法，其中，所述经修饰的til在nfat启动子的控制下表达所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白。
228.根据权利要求197至227中任一项所述的方法，其中，所述经修饰的til用逆转录病毒载体转导，以表达所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白。
229.根据权利要求197至227中任一项所述的方法，其中，所述经修饰的til用慢病毒载体转导，以表达所述一种以上膜锚定的免疫调节融合蛋白。
